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        CDNF治療大鼠脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究

        2013-12-09 00:26:24婁永利閔有會
        中外醫(yī)療 2013年12期
        關(guān)鍵詞:手術(shù)

        張 輝 婁永利 閔有會 姜 羽

        鄭州大學(xué)附屬鄭州市中心醫(yī)院神經(jīng)外科,河南鄭州 450007

        脊髓損傷的特點(diǎn)就是致殘率、耗費(fèi)較高,但是對于其治療方法仍然沒有確切的結(jié)論,給社會帶來重大的負(fù)擔(dān)。目前,隨著神經(jīng)營養(yǎng)分子(即CDNF)研究的深入,脊髓損傷治療也出現(xiàn)了新的轉(zhuǎn)機(jī)。神經(jīng)營養(yǎng)分子具有調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞的生長與發(fā)育的功效,是一種促進(jìn)神經(jīng)元修復(fù)的小分子蛋白。該文選擇了75 至雌性大鼠,研究CDNF 對于大鼠脊髓損傷的治療效果。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選擇健康的Wista 雌性大鼠75只,其平均體重為268.49g,將上述大鼠隨機(jī)分為3組。將其中25只設(shè)置為假手術(shù)組(A組),25只設(shè)定為單純脊椎損傷組(B組),25只設(shè)定為采用CDNF 治療脊髓損傷組(C組)。A組大鼠不損傷其脊髓,僅進(jìn)行脊髓半切損傷模型。B組大鼠注入生理鹽水。對C組大鼠注入10?LCDNF。

        1.2 脊髓半切損傷動物模型

        稱取上述大鼠的具體重量,使用30 mg/kg 的水合氯醛進(jìn)行腹腔注射麻醉。靜待大鼠至全麻狀態(tài),使其使大鼠俯臥在手術(shù)臺上,并對其四肢進(jìn)行捆綁固定,剪除手術(shù)區(qū)的毛發(fā)。確定第10 胸椎的位置,對皮膚進(jìn)行消毒后鋪設(shè)一次性手術(shù)巾。將大鼠的背部皮膚以及皮下組織切開,使其T8~11處的棘突和椎板更充分的暴露出來。采用持針器把棘突和關(guān)節(jié)突進(jìn)行摘除,使脊髓節(jié)段暴露更充分。對胸髓一側(cè)采取橫向剖開,并把硬模直至中央導(dǎo)水管切斷,使用衛(wèi)星注射器,對大鼠的脊髓進(jìn)行2 mm 缺損傷害。在手術(shù)后,大鼠的一側(cè)肢體會出現(xiàn)痙攣性抽搐并出現(xiàn)癱瘓癥狀,這說明脊髓的版企鵝損傷模型已經(jīng)制作成功,隨后可以對大鼠進(jìn)行止血、縫合皮膚等操作。

        1.3 術(shù)后管理

        在手術(shù)后使用清潔籠具對大鼠進(jìn)行單獨(dú)喂養(yǎng),進(jìn)行青霉素注射,預(yù)防大鼠出現(xiàn)感染。同時(shí)每天擠壓大鼠的腹部,幫助其進(jìn)行排便直至膀胱功能恢復(fù)。此外,還要定時(shí)對大鼠進(jìn)行翻身,防止其出現(xiàn)褥瘡。在手術(shù)后不同時(shí)間段內(nèi)對大鼠進(jìn)行應(yīng)用行為學(xué)評分。

        1.4 免疫組織化學(xué)染色與電鏡標(biāo)本制作

        在手術(shù)結(jié)束后14 d時(shí),對大鼠進(jìn)行腹腔的麻醉,將其胸部解剖開后以左心房為入口進(jìn)行置管,若果其右心房有午夜透明液體流出,則即刻使用10%的中性福爾馬林溶液對大鼠進(jìn)行關(guān)注固定。關(guān)注30 min后,顯露手術(shù)階段,取出2 cm 左右的損傷脊髓,標(biāo)記后置入10%甲醛溶液進(jìn)行固定。

        在手術(shù)后8周,將動物進(jìn)行腹腔麻醉,剖開胸部后以生理鹽水進(jìn)行灌注。生理鹽水灌注200 mL后采用40/L 的戊二醛溶液繼續(xù)灌注。固定2 h后,取出損傷節(jié)段的脊髓組織,固定24 h后,使用環(huán)氧樹脂進(jìn)行包埋后制作超薄切片,電鏡下觀察。

        1.5 統(tǒng)計(jì)方法

        采用SPSS17.0 對收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,進(jìn)行t 檢驗(yàn)。

        2 結(jié)果

        2.1 大鼠的應(yīng)用行為學(xué)評分

        對手術(shù)后的大鼠進(jìn)行應(yīng)用行為學(xué)評分,發(fā)現(xiàn)A組大鼠的評分為滿分,在進(jìn)行脊髓半切損傷之后大鼠的一側(cè)后肢則喪失了運(yùn)動功能。在手術(shù)后1周,B組大鼠也出現(xiàn)側(cè)后肢的攣縮,C組患者沒有出現(xiàn)后肢攣縮。在手術(shù)后2~4 周時(shí),B組大鼠和C組大鼠均出現(xiàn)不同程度的恢復(fù)。在手術(shù)后4~8周后,恢復(fù)的幅度變小。手術(shù)2周后B組和C組大鼠的應(yīng)用學(xué)評分出現(xiàn)明顯差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

        表1 大鼠的應(yīng)用行為學(xué)評分

        2.2 3組大鼠的GFAP表達(dá)情況

        對免疫組織進(jìn)行化學(xué)染色觀察,A組大鼠中GFAP 也出現(xiàn)了GFAP 陽性細(xì)胞表達(dá)。在脊髓損傷的大鼠脊髓細(xì)胞標(biāo)本中,能夠發(fā)現(xiàn)GFAP的表達(dá)無規(guī)律且明顯增多。C組大鼠的GFAP 陽性細(xì)胞低于B組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

        表2 3組大鼠的GFAP表達(dá)情況對比

        2.3 電鏡下脊髓損傷的病理變化

        在電鏡觀察下,B組大鼠的神經(jīng)元細(xì)胞核出現(xiàn)碎裂,在脊髓神經(jīng)纖維髓鞘斷裂分層的部位沒有出現(xiàn)新生的軸突。B組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞核也出現(xiàn)碎裂,髓鞘斷裂分層,僅有少量的再生軸突,其細(xì)胞質(zhì)中線粒體數(shù)量含量較少。

        3 討論

        脊髓損傷一般分為2個(gè)階段,即原發(fā)性和繼發(fā)性。脊髓損傷之后,會出現(xiàn)出血性壞死、水腫、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞等。在脊髓損傷出現(xiàn)的早期,血管就會出現(xiàn)破壞,脊髓的灰質(zhì)內(nèi)的一部分神經(jīng)元、白質(zhì)內(nèi)部的少突出膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)壞死。這些壞死的細(xì)胞就會釋放出大量的自由基,這些自由基會氧化鄰近的細(xì)胞,損傷細(xì)胞膜,破壞細(xì)胞內(nèi)的重要結(jié)構(gòu)。在脊髓損傷的過程中,還會出現(xiàn)嚴(yán)重的炎性反應(yīng)。因此而激活損傷處的小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,該類細(xì)胞可吞噬脊髓損傷區(qū)壞死的細(xì)胞以及碎片。這個(gè)過程炎性反應(yīng)可造成脊髓組織缺血,致使脊髓組織發(fā)生壞死,使細(xì)胞壞死范圍擴(kuò)大。

        該研究證明,C組大鼠的應(yīng)用行為學(xué)評分明顯高于B組,但是仍然低于A組。C組的GFAP的表達(dá)低于B組。C組大鼠的GFAP 陽性細(xì)胞低于B組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CDNF 對于脊髓損傷后反應(yīng)性星形膠質(zhì)瘢痕性的形成有明顯的抑制作用,進(jìn)而能夠促進(jìn)突觸的連接重建,加速神經(jīng)功能的恢復(fù)。CDNF對于治療脊髓損傷的原理在于,抑制脊髓損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和活性,遏制瘢痕的出現(xiàn),重建神經(jīng)元的突觸連接。但是,該次試驗(yàn)也證明,CDNF 治療脊髓損傷的功效仍然有其局限性,若將這一技術(shù)與干細(xì)胞技術(shù)相結(jié)合,為脊髓損傷的治療提供更多的參考資料,方可更好的治療脊髓損傷,提高患者的生活質(zhì)量。

        [1]程雷,劉奔,范偉強(qiáng),等.CDNF 治療大鼠脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥指南,2012(28):53-55.

        [2]李曉寧,宋金柱,蘇志強(qiáng).夾脊電針對大鼠脊髓損傷后NGF 和BDNF表達(dá)的影響[J].哈爾濱工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2007,39(12):2014-2016.

        [3]Evans JR,Barker RA.Neurotrophic factors as a therapeutie target for Parkinson’S disease[J].Expert Opin Ther Targets,2008,12(4):437-447.

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