歐志方

資興市第一人民醫(yī)院，湖南郴州 423400

陰道炎是婦科常見疾病之一，由于陰道收到細菌的感染，引發(fā)的陰道炎疾病，甚至還可能形成異位妊娠或不孕、急慢性盆腔炎等嚴(yán)重的感染病[1]。該文采用三種不同的方法，對2012年1月—2012年6月在該院治療的99例陰道疾病患者進行陰道細菌檢驗，通過對比三種檢驗方法的檢驗結(jié)果，從中尋找出簡便實用、精確度高的檢驗方法，保證陰道疾病就診的準(zhǔn)確性。希望對陰道疾病的研究起到一定的借鑒作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

99例陰道疾病患者的年齡在23～47歲之間，平均年齡為26歲。99例患者均有不同程度的陰道炎及陰道瘙癢等癥狀，患者陰道存在大量的白帶分泌物。

1.2 材料與儀器

革蘭氏染色試劑盒由上海寶曼生物科技有限公司生產(chǎn)，革蘭染色檢驗法采用奧林巴斯CX41 臨床用顯微鏡，培養(yǎng)基由上?？婆d生物科技有限公司生產(chǎn)，引物均由上海生物工程公司生產(chǎn)，標(biāo)準(zhǔn)菌株由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.3 檢驗方法

患者取截石位，讓無菌陰道鏡露出宮頸后，在陰道后面的穹窿處用無菌棉簽沾取患者陰道里面的分泌物，把分泌物攝取后，放進盛有無菌生理鹽水的試管里。

1.3.1 細菌培養(yǎng)法 取出無菌生理鹽水中的陰道分泌物后，在無菌的條件下采用無菌接種環(huán)接種到專用細菌分離的培養(yǎng)基上，然后把它放到二氧化碳培養(yǎng)箱里面，在35℃的條件下進行孵育，48 h后，可以選取其中呈現(xiàn)半透明、灰色、光滑的水滴形狀的菌落，按照生化標(biāo)準(zhǔn)進行生化檢驗。

1.3.2 PCR檢測法 攝取500 μl 的陰道分泌物放入生理鹽水中，12 000 r/min 離心10 min，去除上清夜后，再加入具有堿性的裂解液，在98 ℃的條件下對其進行加熱，10 min后，12000 r/min離心5 min，就可取出一些上清夜來制作臨床DNA 模板了。在進行PCR檢驗細菌的陰性和陽性比較的時候，我們必須在制作陰道分泌物DNA 模板的時候，運用同樣的PCR 試劑，把沒有添加的DNA 的作為1個陰性組，把添加有DNA 模板的PCR 擴增作為陽性組。陰性組與陽性組進行對比分析。檢查PCR 產(chǎn)物及擴增的時候，取出25 μl 總體積的無菌離子水、模板、引物及緩沖液等，然后采用無菌的石蠟油30 ul 鋪蓋在上面，即可進入PCR 循環(huán)環(huán)節(jié)。PCR 循環(huán)總共有32 環(huán)，PCR 循環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)是：58℃下1 min，72 ℃下1 min，94 ℃下1 min，95 ℃下5 min，要經(jīng)過32個循環(huán)，最后一環(huán)要在72 ℃下延伸5 min。[2-3]

1.3.3 革蘭染色法 選用無破損的清潔玻片，在95%乙醇浸泡后取出，擦拭并晾干。攝取無菌生理鹽水中的陰道分泌物涂布于玻片，把涂片置于奧林巴斯CX41型號的顯微鏡下進行檢驗。

1.4 統(tǒng)計方法

檢驗的數(shù)據(jù)運用SPSS 14.0 計算機統(tǒng)計軟件進行處理，計數(shù)資料運用χ2檢驗。

2 結(jié)果

99例患者中，細菌培養(yǎng)法檢驗出細菌感染者77例，檢出率為77.8%，其中加特納菌58例，腸球菌9例，棒狀桿菌10例。PCR檢測法檢出細菌感染者72例，檢出率為72.7%，其中加特納菌55例，腸球菌8例，棒狀桿菌9例。革蘭染色法檢出細菌感染者36例，檢出率為36.3%。PCR檢驗法與細菌培養(yǎng)法的檢驗結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。細菌培養(yǎng)法與革蘭染色法檢出率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。PCR檢驗法與革蘭染色法檢出率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表1、表2、表3。

由表3我們可以了解，PCR檢測法與革蘭染色檢驗法陽性檢出率效果對比。PCR檢測法檢測出57例陰道細菌陽性者，它的檢出率為77.6%。革蘭染色檢驗法檢測出73例陰道細菌陽性者，它的檢出率為90.6%。兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （χ2=12.43，P<0.01）。見表3。

表1 細菌培養(yǎng)法與PCR檢驗法檢驗結(jié)果對比[n（%）]

表2 革蘭染色檢驗法與細菌培養(yǎng)法檢驗結(jié)果對比[n（%）]

表3 革蘭染色檢驗法與PCR檢驗法陽性檢出率對比結(jié)果[n（%）]

3 討論

陰道細菌感染疾病的主要病發(fā)原理主要是陰道內(nèi)的上皮細胞受到陰道內(nèi)環(huán)境的影響，表面的糖原被病菌侵蝕，導(dǎo)致陰道內(nèi)的桿菌發(fā)生酸堿性變化，陰道桿菌數(shù)量減少，病菌增加，引起陰道炎的發(fā)生[4]。陰道細菌檢驗方法是醫(yī)務(wù)人員診斷陰道疾病的重要手段，檢驗的精確度會影響到陰道疾病的診斷，從而影響到臨床的治療效果。

該研究采用了3種不同的檢驗方法用于陰道細菌檢驗的效果進行了對比分析，結(jié)果顯示，細菌培養(yǎng)法的檢出率為77.8%，PCR檢驗法的檢出率為72.7%，革蘭染色法的檢出率為36.3%，細菌培養(yǎng)法與PCR檢測法的檢出率均較高，與革蘭染色法相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。說明細菌培養(yǎng)法與PCR檢測法在陰道細菌的檢驗中具有一定的優(yōu)勢。

革蘭染色法因其簡單易行，一值被臨床中廣泛應(yīng)用。在陰道細菌檢驗中，曾被多數(shù)學(xué)者人為其是首選方法[5]。不過由于多種因素的存在，革蘭染色法檢驗過程中也存在很大的誤差，產(chǎn)生誤差常見原因是染色過程中脫色不當(dāng)。如脫色過度，會導(dǎo)致革蘭陽性細菌在顯微鏡下被觀察為革蘭陰性菌；如脫色不足，則會使檢驗者把革蘭陰性菌誤診為革蘭陽性菌。革蘭染色法與細菌培養(yǎng)法、PCR檢測法的檢驗結(jié)果對照顯示，二者的檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），也可以說明革蘭染色法在陰道細菌的檢驗中存在一定的誤差。

細菌培養(yǎng)雖一直被認(rèn)為是臨床診斷細菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，不過其檢驗過程復(fù)雜、費力，特別是很難在基層醫(yī)院開展[6]。PCR檢測法融合PCR 的敏感性、DNA 雜交的特異性和光譜技術(shù)精確定量等各種優(yōu)點于檢測中，與細菌培養(yǎng)法比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義意義（P＞0.05），由于PCR檢驗法檢驗細菌的敏感性及特異性高，且操作過程相當(dāng)簡便及快捷，可滿足當(dāng)今臨床診斷的需要，值得在臨床上推廣。

[1]姚蘭，馮麗華.細菌性陰道病的研究進展[J].中國實驗診斷學(xué)，2009，13(12):281-283.

[2]韓風(fēng)，趙欣.細菌性陰道病實驗室診斷方法探討和臨床應(yīng)用[J].中國醫(yī)藥指南，2009，29(24):83-85.

[3]史躍杰.99例陰道細菌的檢驗方法比較分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38(14):2815-2817.

[4]嚴(yán)冬霞，樊尚榮.復(fù)發(fā)性細菌性陰道病的發(fā)病機制和治療[J].實用婦產(chǎn)科雜志，2010，26（2）：85-87.

[5]劉瑾，徐志學(xué).革蘭染色的結(jié)果分析及質(zhì)量控制[J].臨床檢驗雜志，2009，27(4):307.

[6]陳衛(wèi)群,周方紅.種不同檢驗方法對陰道念珠菌的檢驗結(jié)果對比分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2011，17(10):46-47.