葉 強，雷 寒，鄭文武，鄭舒展，陳壓西

(1.瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，四川瀘州 646000;2.重慶醫(yī)科大學(xué)脂質(zhì)研究中心重慶市糖脂代謝重點實驗室，3.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一院心血管內(nèi)科，重慶 400016)

動脈粥樣硬化的特點是血管內(nèi)膜下脂質(zhì)，特別是膽固醇和膽固醇酯的沉積，巨噬細胞、T細胞等炎癥細胞浸潤，以及中膜平滑肌細胞遷移增殖。巨噬細胞清道夫受體在攝取化學(xué)修飾的脂蛋白如氧化和乙?；兔芏戎鞍?LDL)中具有重要作用，并導(dǎo)致巨噬細胞轉(zhuǎn)化為泡沫細胞［1－3］。除此之外，巨噬細胞可以通過非受體介導(dǎo)的胞吞作用攝取大顆粒的脂蛋白，從而造成胞內(nèi)脂質(zhì)聚集［4］。

LDL受體(LDLr)是結(jié)合血漿來源LDL膽固醇和調(diào)節(jié)血漿膽固醇水平的主要受體，LDLr活性受依賴于細胞內(nèi)膽固醇濃度的負反饋系統(tǒng)的嚴密調(diào)控［5］。該系統(tǒng)通過調(diào)控LDLr介導(dǎo)的LDL攝入以及新生膽固醇合成，確保肝細胞和其他細胞胞內(nèi)膽固醇水平穩(wěn)定。因而，傳統(tǒng)觀念認為LDLr不會參與細胞內(nèi)膽固醇聚集以及泡沫細胞形成。

最近實驗及臨床研究發(fā)現(xiàn)，炎癥應(yīng)激是脂質(zhì)介導(dǎo)細胞損害導(dǎo)致動脈粥樣硬化和腎小球硬化的促進因素，我們前期研究發(fā)現(xiàn)，在人腎小球系膜細胞和肝細胞，炎癥因子通過固醇調(diào)控元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)-固醇調(diào)控元件結(jié)合蛋白2(SREBP2)兩個重要蛋白，干擾LDLr負反饋調(diào)控，導(dǎo)致泡沫細胞形成和非酒精性脂肪肝及胰島素抵抗［6－15］。

細菌脂多糖(LPS)是一種常用炎癥刺激物，通過作用于Toll樣受體4(TLR-4)通路，激活轉(zhuǎn)錄因子-核因子κB(NF-κB)，進而增加細胞因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-1β(IL-1β)合成分泌，導(dǎo)致炎癥應(yīng)激狀態(tài)，故常用于細胞實驗［16］。

巨噬細胞是泡沫細胞的重要來源，在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中有重要作用，然而，炎癥應(yīng)激狀態(tài)下巨噬細胞的LDLr負反饋調(diào)控情況尚不清楚，本研究探討LPS誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)激是否通過干擾SCAPSREBP2介導(dǎo)的LDLr負反饋調(diào)控導(dǎo)致巨噬細胞泡沫化。

1 材料

人單核細胞系(THP-1)，購于美國典藏生物中心(ATCC)，No:TIB-202;細胞生長培養(yǎng)基 RPMI 1640、胎牛血清(FCS)購于北京Hyclone公司;佛波酯(PMA)、小牛血清白蛋白(BSA)、青霉素、鏈霉素、LPS(Escherichia coli)、四乙酸乙二胺(EDTA)、叔丁基對甲酚(BHT)、聚肌苷酸 polyinosinic acid(Poly(I))、肝素鈉heparin和二甲基亞砜(DMSO)均購于Sigma;LDL:采用兩步法密度梯度超速離心方法，從人新鮮液體血漿中自行制備;細胞內(nèi)膽固醇測定試劑購于Sigma;總RNA提取試劑盒及熒光定量PCR試劑盒購于大連TaKaRa;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購于美國ABI;細胞蛋白提取試劑盒購自南京凱基生物技術(shù)公司;Bradford試劑購自北京百泰克生物技術(shù)有限公司;30%Acrylamide/Bis購于上海生工;Protein marker購于 Fermentas(立陶宛);Anti-LDLr一抗購于武漢博士德(BA1230)，host:rabbit，120ku;Anti-SREBP2一抗購于 LGC Promochem，UK，host:mouse，120ku;Anti-SCAP一抗倫敦大學(xué)學(xué)院皇家自由醫(yī)學(xué)院阮雄中教授提供，host:rabbit，125kDa;Antiactin 一抗購于 Santa Cruz(SC-1616-R)，host:rabbit，42ku;Goat anti-rabbit HRP-linked IgG購于Santa Cruz(SC-2004);Goat anti-mouse HRP-linked IgG購于MultiSciences Biotech(國內(nèi)分裝);硝酸纖微膜購于Amersham Biosciences;TNF-α ELISA試劑盒購于R＆D公司(晶美生物分裝，F(xiàn)HK0019);Synergy HT 96孔板酶標閱讀儀購于Bio-Tek;瓊脂糖購于Sigma;蘇丹黑B購于上海生工;mouse anti-human Golgi一抗購于Molecular Probes(Cat:A21270);goat antirabbit Fluor(Green)488 for SCAP二抗購于Molecular Probes(Cat:A11034);goat anti-mouse Fluor(Red)594 for Golgi二抗購于 Molecular Probes(Cat:A11032);激光共聚焦顯微鏡(Leica confocol microscope，Germany)。

2 方法

2.1 細胞培養(yǎng)及分組 THP-1生長至對數(shù)期，加入PMA誘導(dǎo)分化為巨噬細胞，無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)4 h，進入實驗分組，實驗培養(yǎng)基為含抗氧化劑EDTA及BHT的無血清培養(yǎng)基，對照組:實驗培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng);高脂組:實驗培養(yǎng)基中加入LDL，終濃度為25 mg·L－1;高脂加炎癥刺激組:實驗培養(yǎng)基中加入LDL，終濃度為 25 mg·L－1，再加入 LPS，終濃度為200 μg·L－1;高脂加炎癥刺激加 Poly(I)組，實驗培養(yǎng)基中加入 LDL，終濃度為 25 mg·L－1，再加入LPS，終濃度為 200 μg·L－1，再加入 Poly(I)，終濃度為250 mg·L－1;高脂加炎癥刺激加heparin組，實驗培養(yǎng)基中加入LDL，終濃度為25 mg·L－1，再加入 LPS，終濃度為 200 μg·L－1，再加入 heparin 終濃度為5 g·L－1;單純炎癥刺激組:實驗培養(yǎng)基中加入 LPS，終濃度為 200 μg·L－1，以上各組細胞培養(yǎng)24 h后收獲。

2.2 ELISA法檢測細胞培養(yǎng)基中 TNF-α 水平培養(yǎng)于24孔板上的THP-1巨噬細胞，無血清培養(yǎng)4 h后，實驗培養(yǎng)基中加入不同濃度LPS(0、10、100、500、1 000 μg·L－1)孵育 24 h，收集培養(yǎng)基，－70℃保存;收集細胞，Lowry法測定細胞蛋白含量;按照R＆D公司TNF-α試劑盒操作說明進行檢測，所得數(shù)據(jù)用細胞總蛋白含量進行校正。

2.3 細胞內(nèi)膽固醇濃度測定 測定THP-1巨噬細胞內(nèi)膽固醇濃度的酶染色法基于Gallo［17］和 Gamble［18］所描述的方法，實驗分組為:對照組，高脂組，高脂加炎癥刺激組，高脂加炎癥刺激加Poly(I)組，高脂加炎癥刺激加heparin組，單純炎癥刺激組，以上進入實驗細胞孵育24 h后，用PBS洗滌2次，氯仿/甲醇2∶1混合物提取細胞內(nèi)脂質(zhì)，后真空干燥，Lowry法測定細胞總蛋白含量，酶法測定總膽固醇濃度(TC)，游離膽固醇濃度(FC)，經(jīng)公式膽固醇酯(CE)=TC-FC，計算出膽固醇酯水平，最后所有結(jié)果用細胞蛋白含量校正。

2.4 LDL瓊脂糖電泳 THP-1巨噬細胞培養(yǎng)于24孔板，無血清培養(yǎng)4 h后，加入25 mg·L－1LDL，繼續(xù)孵育24 h，收集培養(yǎng)基，蘇丹黑 ∶培養(yǎng)基=1∶9混合后，室溫下孵育20 min，上1%瓊脂糖橋聯(lián)電泳，電泳參數(shù)為:巴比妥電泳緩沖液，pH值8.6，離子強度0.075，電壓 200 V，電流 400 mA，時間 20 min，天然LDL和氧化LDL分別作為陽性與陰性對照。

2.5 總RNA提取及Real-time PCR 根據(jù)RNAiso試劑盒操作說明提取實驗THP-1巨噬細胞總RNA，500 ng總RNA作為模板，選用ABI逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，逆轉(zhuǎn)錄體系 20 μl，含:50 mmol·L－1KCl，10 mmol·L－1Tris.HCl，5 mmol·L－1MgCl2，每種 dNTP 濃度為 1 mmol·L－1，2.5 μmol·L－1random hexamers，20 U RNAsin，和 50 U Moloney-murine leukemia virus RTase;逆轉(zhuǎn)錄在DNA Thermal Cycler(Eppen-dorf)中進行，參數(shù)為:25℃ 10 min，37℃ 120 min，85℃ 5 s;cDNA合成后，用SYBR Green I PCR Master Mix(Takara)在Opticon 2 Real-Time PCR Detector(Bio-Rad)進行熒光定量PCR反應(yīng)，熱循環(huán)條件包括 50℃ 2 min，95℃ 5 min，95℃ 20 s，55℃ 20 s，共40 個循環(huán)，95℃ 1 min，55℃ 1 min，55℃到95℃每增加0.5℃讀板，作溶解曲線。實驗在細胞水平重復(fù)4次。β-actin作為參照基因。Real-time PCR結(jié)果以CT值來表示起始模板的數(shù)量，CT值越小起始模板的數(shù)量越大。本實驗均用比較CT值法－△△CT來表示基因的表達水平，計算公式如下:實驗組相對于對照組基因表達水平的倍數(shù)=－exp(△△CT)，其中△△CT=實驗組△CT－對照組△CT△CT=靶基因CT值－β-actin CT值。引物序列:LDL receptor上游 5'-GTGTCACAGCGGCGAATG-3'，下游 5'-CGCACTCTTTGATGGGTTCA-3';SREBP2上游5'-CCG CCTGTTCCGATGTACAC-3'，下游 5'-TGCACATTCA GCCAGGTTCA-3';SCAP上游 5'-GGGAACTTCTGG CAGAATGACT-3'，下游5'-CTGGTGGATGGTCCCAA TG-3';β-actin上游 5'-CCTGGCACCCAGCACAAT-3'，下游 5'-GCCGATCCACACACGGAGTACT-3';所有引物由ABI公司Primer Express Software version 2.0 System設(shè)計。

2.6 Western blot檢測蛋白表達 收集并裂解巨噬細胞，定量總蛋白和胞核蛋白濃度，變性，電泳，轉(zhuǎn)硝酸纖維膜，5%脫脂牛奶室溫下封閉1 h，PBST洗滌2次，硝酸纖維膜與兔抗人LDLr多克隆抗體稀釋液在室溫下孵育1 h，PBST洗滌液洗滌3次，羊抗兔HRP標記二抗稀釋液與硝酸纖維膜在室溫下孵育1 h，PBST洗滌3次，最后應(yīng)用 ECL Advance Western blot Detection化學(xué)發(fā)光試劑盒在Hyperfilm ECL自顯影成像;硝酸纖維膜50℃下抗體剝脫液洗滌20 min，PBST洗滌3次后，分別加入鼠抗人SREBP2單克隆抗體及羊抗鼠二抗，以及兔抗人SCAP多克隆抗體和羊抗兔二抗。

2.7 激光共聚焦掃描檢測SCAP定位 培養(yǎng)于24孔板上THP-1巨噬細胞經(jīng)實驗處理后，PBS洗滌2次，5%福爾馬林生理鹽水室溫下固定30 min;再用0.25%TritonX-100處理細胞15 min。1%BSA室溫下封閉20 min。加入Rabbit anti-human SCAP一抗(終濃度1∶100)和mouse anti-human Golgi antibody(終濃度 1 ∶100)，200 μl/孔，4℃ 過夜。PBST 洗滌3次，加入 goat anti-rabbit Fluor488 for SCAP二抗(終濃度1∶100)和goat anti-mouse Fluor594 for Golgi二抗(終濃度 1 ∶100)，200 μl/孔，室溫下孵育 1 h。PBST洗滌3次，50%PBS甘油封片，在激光共聚焦顯微鏡下觀察并采集圖片。

3 結(jié)果

3.1 生理條件(非炎癥)下，LDL負荷對巨噬細胞LDLr mRNA表達的影響 生理條件(非炎癥狀態(tài))下，當細胞加載LDL時，不同濃度LDL均可以顯著抑制巨噬細胞的LDLr mRNA的表達，其抑制程度與LDL濃度呈劑量相關(guān)性。本實驗確定25 mg·L－1LDL作為后續(xù)實驗的LDL負荷濃度，見Tab 1。

Tab 1 Effect of LDL loading on LDLr mRNA level inmacrophages under physiological condition(±s)

Tab 1 Effect of LDL loading on LDLr mRNA level inmacrophages under physiological condition(±s)

#P＜0.05 vs control group，*P＜0.05 vs 25 mg·L－1LDL group.

LDL/mg·L－10 25 50 100 200 LDLr mRNA level 1 0.25±0.09# 0.13 ±0.12# 0.11±0.05# 0.02 ±0.008*

3.2 LDL負荷條件下，不同濃度LPS對巨噬細胞LDLr mRNA表達的影響 25 mg·L－1LDL明顯抑制巨噬細胞LDLr mRNA表達，同時有LPS存在時，LDL抑制LDLr mRNA表達的反饋調(diào)節(jié)被減弱，并且LPS呈劑量依賴性上調(diào)巨噬細胞LDLr mRNA表達。本實驗確定200 μg·L－1LPS作為后續(xù)實驗的有效炎癥刺激濃度，見Tab 2。

Tab 2 Effect of LPS on LDLr mRNA level in macrophages under LDL loading(±s)

Tab 2 Effect of LPS on LDLr mRNA level in macrophages under LDL loading(±s)

#P＜0.05 vs control group，＊＊P＜0.05 vs 25 mg·L－1LDL group.

LDL/mg·L－10 25 25 25 25 25 LPS/μg·L －1 0 0 50 100 200 400 LDLr mRNA level 1 0.37±0.09#0.39±0.22 0.50±0.11 0.70±0.35* 0.72 ±0.31*

3.3 LPS呈濃度依賴性增加巨噬細胞合成分泌TNF-α LPS可以明顯增加巨噬細胞向培養(yǎng)基中分泌炎癥因子TNF-α，且這種效應(yīng)呈劑量依賴性，200 μg·L－1LPS可成功誘導(dǎo)炎癥狀態(tài)，作為后續(xù)實驗有效炎癥刺激濃度，見Tab 3。

Tab 3 Effect of LPS on the secretion of TNF-α in macrophages( ± s)

Tab 3 Effect of LPS on the secretion of TNF-α in macrophages( ± s)

*P＜0.05 vs 10 μg·L －1group.

LPS/μg·L －1010 100 500 1000 TNF-α concentration/ng·L－1 1028.83±68.351042.33±165 1890±565.69*2304±613.58*3482±1032.56*

3.4 細胞內(nèi)膽固醇測定結(jié)果 細胞內(nèi)膽固醇測定結(jié)果顯示，當細胞培養(yǎng)基中僅有25 mg·L－1LDL存在時，細胞內(nèi)膽固醇酯水平輕度增加，當同時有200 μg·L－1LPS存在時，細胞內(nèi)膽固醇酯水平明顯增加。應(yīng)用清道夫受體阻斷劑聚肌苷酸Poly(I)和LDLr阻斷劑heparin后，數(shù)據(jù)表明清道夫受體阻斷劑Poly(I)未減少細胞內(nèi)膽固醇酯沉積，而LDLr阻斷劑heparin卻可以減少膽固醇酯聚集，單獨LPS刺激也能增加細胞內(nèi)膽固醇酯水平，見Tab 4。

Tab 4Cholesterol ester detection(±s)

Tab 4Cholesterol ester detection(±s)

*P＜0.05 vs 25 mg·L－1LDL group，#P＜0.05 vs 25 mg·L－1LDL+200 μg·L－1 LPS group，△P＜0.05 vs control group.

Group TC FC CE Control 14.31 ±1.79 9.52 ±1.95 4.79 ±1.21 LDL 25 mg·L －1 16.41±2.67 10.82±2.51 5.59±2.03 LDL25 mg·L －1+LPS 200 μg·L －1 21.90±2.01* 13.10±1.20* 8.80±1.80*LDL25 mg·L－1+LPS 200 μg·L－1+Poly(I)250 mg·L－1 21.72±2.11* 13.51±1.60* 8.22±1.30*LDL25 mg·L－1+LPS 200 μg·L－1+Heparin 5 g·L －1 13.92±1.10# 9.60±1.05# 4.32±1.31#LPS 200 μg·L －1 18.10±1.31△ 11.20±1.68△ 6.9±0.54△

3.5 LDL瓊脂糖電泳結(jié)果 LDL瓊脂糖電泳證實，來自巨噬細胞培養(yǎng)基中的LDL與天然LDL有相同電泳遷移率，與氧化LDL遷移率明顯不同，提示巨噬細胞培養(yǎng)基中LDL沒有被氧化修飾，見Fig 1。

Fig 1 LDL agarose gel electrophoresis

3.6 LPS對巨噬細胞LDLr mRNA及蛋白表達的影響 Real-Time PCR發(fā)現(xiàn)，LPS增加LDLr mRNA表達水平，克服25 mg·L－1LDL對LDLr mRNA表達的反饋抑制;Western blot也證實25 mg·L－1LDL抑制LDLr蛋白表達，LPS克服25 mg·L－1LDL對LDLr反饋抑制，增加LDLr蛋白表達;單獨LPS刺激也增加LDLr mRNA及蛋白表達，見Fig 2。

3.7LPS對巨噬細胞SREBP2和SCAP mRNA及蛋白表達的影響 Real-Time PCR發(fā)現(xiàn)，LPS增加SREBP2和SCAP mRNA表達水平，克服25 mg·L－1LDL對SREBP2和SCAP mRNA表達的抑制效應(yīng);Western blot也證實25 mg·L－1LDL抑制 SREBP2和SCAP蛋白表達，LPS克服25 mg·L－1LDL對SREBP2和SCAP蛋白表達抑制，增加SREBP2和SCAP蛋白表達;單獨LPS刺激也增加SREBP2和SCAP mRNA及蛋白表達，見Fig 3，F(xiàn)ig 4。

Fig 2 Effect of LPS on LDLr mRNA and protein expression in macrophages

Fig 3 Effect of LPS on SREBP2 mRNA and protein expression in macrophages

Fig 4 Effect of LPS on SCAP mRNA and protein expression in macrophages

3.8 激光共聚焦結(jié)果 抗人SCAP與抗高爾基體的共染色發(fā)現(xiàn)，25 mg·L－1LDL抑制SCAP從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)位至高爾基體，然而LPS克服25 mg·L－1LDL對SCAP轉(zhuǎn)位的抑制，增加SCAP從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)位至高爾基體，導(dǎo)致SCAP在高爾基體堆積，單獨LPS刺激同樣增加SCAP從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)至高爾基體轉(zhuǎn)位，見Fig 5。

Fig 5 Effect of LPS on the translocation of SCAP-SREBP2 complex from the ER to the Golgi in the presence of LDL

4 討論

傳統(tǒng)觀念認為，清道夫受體是巨噬細胞泡沫化的主要途徑，氧化修飾LDL被認為是動脈粥樣斑塊中泡沫細胞內(nèi)膽固醇的主要來源，并且天然LDL與巨噬細胞共孵育后，LDL不會通過LDLr大量進入細胞內(nèi)致膽固醇積聚。然而，最近研究發(fā)現(xiàn)，佛波酯激活的單核巨噬細胞會通過非受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用增加對LDL攝取，導(dǎo)致巨噬細胞內(nèi)膽固醇聚集，提示液相內(nèi)吞作用是巨噬細胞調(diào)控膽固醇聚集的一條有意義的途徑［19］。

LDLr是結(jié)合血漿來源LDL膽固醇和調(diào)節(jié)血漿膽固醇水平的主要受體，然而，巨噬細胞內(nèi)膽固醇聚集過程中LDLr所起的作用仍不是很清楚。本研究發(fā)現(xiàn)，LPS通過LDLr途徑增加天然LDL在巨噬細胞內(nèi)聚集，如Tab 2所示。清道夫受體特異性抑制劑聚肌苷酸Poly(I)不能抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞內(nèi)膽固醇聚集，而LDLr受體抑制劑肝素heparin卻能抑制LPS誘導(dǎo)的膽固醇酯聚集，說明LDLr參與了LPS誘導(dǎo)的膽固醇聚集。這一結(jié)果與以前我們在平滑肌細胞上發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象一致。除此以外，所有實驗培養(yǎng)基都含有目前廣泛使用的抗氧化劑BHT和EDTA，這兩種抗氧化劑可以有力的防止LDL氧化;并且培養(yǎng)基中的LDL電泳遷移率與天然LDL一致，說明實驗中沒有LDL被氧化，因為培養(yǎng)基中沒有清道夫受體的配體存在，證實LDLr介導(dǎo)了巨噬細胞內(nèi)膽固醇堆積，有效排除了清道夫受體途徑參與脂質(zhì)聚集。進一步實驗發(fā)現(xiàn)LPS上調(diào)LDLr mRNA和蛋白表達，擾亂了LDLr負反饋調(diào)控。這些結(jié)果提示，炎癥應(yīng)激可以通過擾亂LDLr負反饋調(diào)控改變細胞內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)。

我們研究LPS逆轉(zhuǎn)25 mg·L－1LDL對LDLr反饋抑制效應(yīng)的分子機制，特別是炎癥應(yīng)激狀態(tài)下調(diào)控LDLr表達的兩個重要分子SCAP和SREBP2的表達和細胞內(nèi)轉(zhuǎn)位。最近，胰島素誘導(dǎo)基因1(Insig1)被確定為固醇調(diào)控的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留因子，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上與SCAP-SREBP2復(fù)合物相互作用。當細胞內(nèi)膽固醇濃度升高時，Insig1結(jié)合SCAP的固醇敏感區(qū)域，防止SCAP-SREBP2逃離內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，減少LDLr轉(zhuǎn)錄合成，減少外源性膽固醇攝入，防止細胞內(nèi)膽固醇增多;當細胞內(nèi)膽固醇濃度降低時，Insig1與SCAP-SREBP2復(fù)合物分離，SCAP攜帶SREBP2轉(zhuǎn)位至高爾基體，SREBP2經(jīng)過高爾基體上蛋白水解后，活性片段SREBP2-N進入細胞核內(nèi)，與固醇調(diào)控元件1(SRE-1)結(jié)合，啟動LDLr轉(zhuǎn)錄合成，促進細胞攝取外源性膽固醇。我們的結(jié)果表明SCAP的mRNA和蛋白表達對膽固醇的反應(yīng)是相似的，提示SCAP是膽固醇敏感器。實驗結(jié)果表明，炎癥應(yīng)激增加SCAP和SREBP2 mRNA和蛋白表達，進而增加SCAP/Insig1比率，這似乎是假設(shè)，因為Insig1在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的數(shù)量有限，在炎癥狀態(tài)下沒有足夠量固定表達增加的SCAP-SREBP2復(fù)合物;因而炎癥應(yīng)激狀態(tài)下，即使在細胞內(nèi)高膽固醇濃度水平下，SCAPSREBP2復(fù)合物從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)逃逸至高爾基體，這種非正常逃逸擾亂了LDLr生理反饋調(diào)控。

總之，這些結(jié)果提示LPS擾亂了THP-1巨噬細胞內(nèi)LDLr依賴膽固醇的正常而又嚴密的反饋調(diào)控，因而在LPS存在下，天然LDL通過LDLr被巨噬細胞大量攝入，導(dǎo)致膽固醇酯堆積，這一過程將THP-1巨噬細胞轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽毎?。本研究提示，在炎癥應(yīng)激下，天然LDL無需氧化修飾既可被巨噬細胞大量攝取，LDLr可能是巨噬細胞泡沫化的另一條重要通路。

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