梁少帥，欒秀珍，孟祥靖

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟南 250355;2.山東千佛山醫(yī)院，濟南 250014)

枕大池又名小腦延髓池，目前神經(jīng)系統(tǒng)疾病的多種動物實驗均需要行枕大池穿刺，廣泛應(yīng)用于抽取腦脊液，腦積水、腦膜炎、腦水腫、腦出血、腦血管痙攣、脊髓空洞等疾病動物模型建立及腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞移植等多項實驗項目，其中家兔性情溫順，成本較低，常作為首選實驗對象。目前兔經(jīng)皮枕大池穿刺具體方法報道較少，兔枕大池壓力低，椎間隙窄，對于初次操縱者成功率低且會出現(xiàn)諸多問題，本文通過實驗給予詳細(xì)介紹。

1 材料和方法

1.1 動物和儀器

30只體重2～2.5 kg健康新西蘭白兔，雌雄不限，來源于山東中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心【SCXK(魯)20100005】，操作于山東中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心屏障動物實驗設(shè)施進行【SYXK(魯)2011-0019】。2 mL無菌注射器，針頭規(guī)格 0.5 mm×20 mm(橙色)，購自青島永盛醫(yī)用高分子器材有限公司、無菌手套、備皮刀片、碘伏等。

1.2 方法

1.2.1 動物麻醉 采用3%戊巴比妥鈉1 mL/kg，經(jīng)兔耳緣靜脈先快后慢靜注，2 min四肢癱軟、呼吸變淺、角膜反射遲鈍，麻醉成功。

1.2.2 穿刺方法 頸后部備皮消毒后，動物采取側(cè)臥位，頭頸背側(cè)垂直于操作臺，由助手將兔耳向前牽拉，使其頭向胸部屈曲，充分暴露枕骨與頸椎間隙，左手拇指在頭頸部正中線(A線)定位枕骨隆突(AB)與第一頸椎(AC)之間間隙為進針點(封3圖1)，右手持穿刺針與頸部皮膚成90度，朝兔嘴方向緩慢刺入(圖2)，以突破感或聽到“嘎查”聲為標(biāo)準(zhǔn)，見無色透亮腦脊液流出，蘇醒后無功能障礙為穿刺成功并記錄穿刺深度。

圖1 兔矢狀位MRI小腦延髓池解剖。Fig.2 Rabbit sagittal view MRI cisterna magna anatomy．

2 結(jié)果

25只家兔有無色透亮腦脊液流出，蘇醒后情況良好，其最小穿刺深度1.2 cm，最大穿刺深度1.6 cm，平均1.432 cm;余5只家兔中1只穿刺過程中反應(yīng)強烈當(dāng)場死亡，解剖示傷及延髓，1只雖穿刺成功，但腦脊液流出欠通暢，2只出現(xiàn)血性腦脊液，1只蘇醒后出現(xiàn)頭左歪，考慮傷及副神經(jīng)。

3 討論

3.1 穿刺針刺入后無腦脊液流出

首先觀察進針角度，將穿刺針退至皮下再次刺入，穿刺針應(yīng)順應(yīng)動物頭部彎曲的角度靈活進針，偏上偏下均不會有腦脊液流出，甚至損傷副神經(jīng);進針過程中如遇到骨質(zhì)，也需重新進針;如突破感明確仍無腦脊液流出，應(yīng)考慮針頭堵塞，拔出針頭后，無菌鹽水沖洗通暢后再次進針。

3.2 進針深度不好掌握

進針深度易受動物的體位、品種、大小的影響而差別較大，通常在1.2～1.6 cm之間，需掌握家兔脊髓解剖，以穿破硬脊膜時突破感為準(zhǔn);頸后部備皮要干凈，否則兔毛會影響觀察進針深度。

3.3 穿刺過程中動物出現(xiàn)呼機困難或反應(yīng)強烈

呼吸困難應(yīng)考慮體位影響，大部分文獻(xiàn)報道頭應(yīng)盡量向胸部屈曲，雖容易暴露枕骨大孔與頸椎間隙，但易造成動物呼吸困難，影響穿刺，動物體位不可過分屈曲，應(yīng)適時使動物放松;刺破硬脊膜時會出現(xiàn)動物反應(yīng)強烈，是穿刺意外死亡的主要原因，助手需注意固定家兔，以防止兔頭后仰誤傷延髓，另外注意控制麻醉深度。

3.4 針頭堵塞

反復(fù)穿刺不成功易出血，血塊及肌肉組織易堵塞針頭，應(yīng)盡量做到一針到位，針頭堵塞應(yīng)及時更換或沖洗。

3.5 穿刺有腦脊液流出，但不通暢

通常與進針角度有關(guān)，此時可輕微旋轉(zhuǎn)針頭或上下左右輕調(diào)針頭，切忌加深進針深度，也可接上注射器輕輕回抽。

目前兔枕大池穿刺主要有切開直視穿刺［1－2］和經(jīng)皮穿刺兩種，相比之下經(jīng)皮穿刺具有操作簡單、創(chuàng)傷少、感染率低、可多次穿刺的優(yōu)點，操作熟練者2～3 min即可完成，如要求實驗動物長期存活，此法更為首選。由于兔椎間隙狹窄，經(jīng)驗不足者易失敗，甚至動物死亡。因此提高穿刺的成功率相當(dāng)重要。最關(guān)鍵的是穿刺針的選擇及體表定位。穿刺針不僅會影響腦脊液的流出，同樣會影響枕大池注藥，2 mL無菌注射器針頭(橙色)成本低，無需消毒，針頭長度短不宜損傷延髓，直徑適中不宜堵塞。有文獻(xiàn)報道采用5 mL注射器針頭或4 1/2針頭穿刺［3－4］，其中 5 mL 注射器針頭及針尖斜面過長，極易損傷延髓;4 1/2針頭雖長度短，但直徑過細(xì)，兔枕大池壓力低，即使穿刺成功也常無腦脊液流出。另外定位枕外隆突與第一頸椎間隙很關(guān)鍵，穿刺不應(yīng)局限于固定的穿刺深度、角度，應(yīng)根據(jù)動物的品種、大小、體位適時作出調(diào)整?？傊媒?jīng)皮枕大池穿刺適合多項神經(jīng)系統(tǒng)疾病的實驗研究，方便實用，值得推廣。

［1］ 張子衡，陳衛(wèi)國，郭國炳，等．大鼠腦積水模型的建立［J］．中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志．2005，4(1):32 －34．

［2］ 馬東周，孫紅燕，徐亮，等．兔實驗性腦積水模型的建立［J］．中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2007，17(4):418 －419，423．

［3］ 張慶俊，孫國柱，張更申，等．實驗性家兔脊髓空洞癥發(fā)病機制研究［J］．中華神經(jīng)外科雜志．2000，16(6):364－366．

［4］ 富宏，陶迎紅，王學(xué)美，等．經(jīng)皮穿刺延髓池抽取兔和大鼠腦脊液的方法［J］．中國比較醫(yī)學(xué)雜志．2006，16(11):684－687．