盧 瑋，鄭桂梅，劉愛民

（1.吉林大學第二醫(yī)院 婦產科，吉林 長春130041；2.通化市人民醫(yī)院 婦產科，吉林 通化134001）

腹水作為卵巢惡性腫瘤常見的臨床癥狀之一，臨床可根據腹水細胞形態(tài)推測原發(fā)灶，并鑒別腫瘤的良、惡性。術中及時對腹水／腹腔沖洗液脫落細胞學進行檢查，可以為臨床治療提供可靠的病理學依據［1］。近年來，隨著液基薄層細胞制片技術的不斷發(fā)展，膜式液基薄層細胞學技術（Thin prep cytology test，TCT）在臨床上應用也越廣泛。其操作方法簡單且在細胞標本的采集、制作和診斷技術方面與傳統(tǒng)普通涂片技術相比都有很大的進步，使卵巢惡性腫瘤腹水／腹腔沖洗液瘤細胞陽性診出率明顯提高［2］。但是診斷效果不佳，有報道表明 Ki－67能增加宮頸涂片的診斷符合率，國內外尚無TCT聯(lián)合Ki－67在診斷卵巢癌腹水中的臨床價值進行評估，因此本研究對此方法進行研究。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集本院200例卵巢惡性腫瘤患者腹水／腹腔沖洗液標本，患者平均年齡38－70歲；FIGO分期，Ⅰ－Ⅱ期137例，Ⅲ－Ⅳ期63例；高分化79例，中分化63例，低分化58例；其中漿液性囊腺癌106例，黏液性囊腺癌73例，其他癌21例（內膜樣癌11例、未分化癌8例、內胚竇瘤2例）。所有患者抽取腹水／腹腔沖洗液標本前均未接受過內分泌、放療及化療類藥物治療。全部病例術后均經病理證實。

1.2 腹水標本的處理 在開腹后取腹水，如果腹水量少的話，用30－50ml生理鹽水沖洗腹腔，然后再取腹腔沖洗液，所取得的標本分2管收集，并立即送實驗室，分別采用TCT＋ Ki－67和TCT分別進行細胞學檢查。

1.3 新柏氏TCT涂片 儀器：新柏氏2000薄層細胞學檢測系統(tǒng)、細胞保存液、清洗液。將標本采集在干燥、干凈的離心管中離心3min，棄掉上清液，取3 ml Thin2prep細胞保存液加入離心管中，混勻后倒入保存瓶，經Thinprep2000微電腦系統(tǒng)程序化處理，制成直徑為2cm的薄層細胞涂片，95%乙醇固定10min，經HE染色，封固后鏡檢。如果血液標本有多量，則加入3－5滴25%冰醋酸和細胞處理液混勻細胞層，混勻后（1 500r／min）10min離心，棄上清液后，加入細胞保存液。將剩余在保存液瓶中的標本保存，以作再次制片備用。最后在顯微鏡下觀察結果。

1.4 Ki－67免疫組化陽性標準 細胞核內棕黃色顆粒達到下面標準者為Ki－67染色陽性：10個高倍（＠400）視野中，每個視野計數(shù)100個細胞，有Ki－67標記核的陽性細胞數(shù)大于10%為陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法 用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計處理。計數(shù)資料組間用χ2檢驗，P＜0.05說明差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 腹腔液TCT與TCT＋Ki－67免疫組化染色質量的比較 見表1。

在細胞量及異常細胞量方面，TCT＋ Ki－67有76例（38%）優(yōu)于TCT；在細胞保存及形態(tài)結構方面，TCT＋ Ki－67有147例（73.5%）和 TCT一致；在背景材料方面，TCT＋ Ki－67有98例（49.0%）和TCT一致（見表1）。經χ2檢驗，兩種檢查方法在免疫組化染色質量方面，差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝75.0，P＜0.001）

表1 腹腔液TCT與TCT＋Ki－67免疫組化染色質量的比較〔n（%）〕

2.2 兩種檢查方法的診斷結果 見表2。

所有病例以病理診斷為金標準，經病理驗證所有研究對象均為卵巢癌。本組TCT技術檢測，確診癌的62例（31.0%），可疑癌的19例（9.5%），陰性119例（59.5%）。TCT＋ Ki－67技術檢測，確診癌的97例（48.5%），可疑癌的22例（11.0%），陰性的81例（40.5%）。經χ2檢驗，兩種檢查方法在惡性細胞確診方面，差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝12.8，P＜0.001）。

表2 兩種檢查方法的診斷結果〔n（%）〕

3 討論

卵巢癌腹水／腹腔沖洗液惡性瘤細胞細胞學診斷的準確性依賴于標本的采集、染色技術和嚴格的閱片制度。其中標本采集的效果影響顯著，如果標本采集不滿意或數(shù)量少時可能造成假陰性［3］。標本制片受到血細胞含量多少、脫落細胞數(shù)量、退變程度、腹水新鮮程度、涂片的薄厚、染色情況以及固定狀態(tài)等因素的影響［4］。雖然TCT這一新的制片方法在這些方面相對于傳統(tǒng)普通涂片方法來說有所改善，但還是有較大的影響。所以，對于研究出能更加有效改善這些影響因素的新方法還是非常有必要的。

Ki－67是由Hodgkin’s淋巴瘤所產生的L428細胞系的粗制核部的鼠單克隆抗體，1983年由Gerges等首先報道［5］。其核抗原是分子量為345 kd及395kd的兩條多肽鏈組成DNA結合核蛋白，與染色質相連，編碼基因定位于第10號染色體。它在細胞進入G1期時開始表達，在S期和G2期逐漸升高，M期達到高峰，而在有絲分裂后迅速減少，G0期和G1早期不表達［6］。Ki－67是一個細胞增殖性抗原，其參與細胞周期的調控，在目前研究很多，而且已經有研究證明用Ki－67的MIB－1抗體進行免疫組化染色檢查在宮頸細胞學涂片中是個可行的方法［2］。但至今還沒有數(shù)據顯示，TCT聯(lián)合Ki－67在診斷卵巢癌腹水中的臨床價值。所以，本實驗就在TCT的基礎上，聯(lián)合Ki－67對卵巢癌腹水的診斷進行研究。研究表明，在免疫組化染色質量方面，TCT＋Ki－67對細胞量及異常細胞量方面檢測優(yōu)于TCT，而對細胞保存及形態(tài)結構和背景材料評估二者相當，從而表明采用聯(lián)合檢測能提高免疫組化染色質量。在診斷結果方面的比較，TCT＋Ki－67診斷和病理診斷符合的例數(shù)高于TCT，這可能是因為Ki－67在卵巢癌中高表達，能更加客觀反映腫瘤細胞的增殖能力［7，8］，從而提高了檢出符合率。

綜上所述，對卵巢癌腹水的診斷進行研究表明，TCT聯(lián)合Ki－67能提高免疫組化染色質量，并且診斷能力優(yōu)于TCT檢測。

［1］Aniali Limaye.Comparative analysis of conventional Papanicolaou tests and a fluid thin－based thin－layer method［J］.Arch Pathol Lab Med，2003，127（2）：143.

［2］陳素琴，馮卿卿，李全香等.TCT在卵巢惡性腫瘤腹水診斷中的臨床價值［J］.中國婦幼保健，2010，04－0572－03.

［3］梅 平，劉艷輝，莊恒國，et al.1747例宮頸陰道病變篩查結果分析［J］.臨床與實驗病理學雜志，2005，2（1）：70.

［4］Pahuja S，Choudhurg M，Gupta U.Ki－67immunostaining in Pap smear of cervix：assessment of proliferation in preinvasive and invasive aquamous epithelial lesions［J］.Indian Pathol Microbiol 2004，47（1）：1.

［5］Gerges J.Immunobichemical and molecular biologic characterization of the cell proliferation associated undear antigen that isdefined by monoclonal antibody Ki－67 ［J］.Am J Pathol，1991，（138）：867.

［6］Korkolopoulou P，Vassilopoulos I，Konstantinidou A E，et al The combined evaluation of p27Kip1and Ki－67expression provides independent information on overall survival of ovarian carcinoma apatient［J］.GynecolOncol 2002，85（3）：404.

［7］Matsuta M，Kimura S，Kosegawa G.Immunoh is to chemical detection of ki67in epithelial skin tumors in formalin fixed paraffin embedded tissue sections using a new monoclonal antibody（MIB 1）［J］.J Dermatol，1996，23（3）：147.

［8］GarzettiG G，Ciavattini A，Goteri G.Ki－67antigen immune staining（MIB1monoclonalantibody）in serous ovarian tumors：index of proliferative activity with prognostic significance［J］.GynecolOncol，1995，56（2）：169.