葉保國，聞春艷，李新白，朱慶三，宋雪松＊

（1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 麻醉科，吉林 長春130021；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 病理科，吉林 長春130033；3.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 脊柱外科，吉林 長春130021）

我國有悠久的大豆栽培歷史，大豆產(chǎn)品是我國人民日常生活不可缺少的食品［1］。以往的研究表明大豆皂甙有降血脂、抑制腫瘤、抗血栓、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性［2］，但對糖尿病大鼠脾臟的作用研究尚未見相關(guān)報道，本實驗旨在觀察大豆皂甙對糖尿病大鼠脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、IL－2及γ－IFN水平的影響，為研究大豆皂甙對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和主要試劑 190－210g健康雄性Wistar大鼠45只，由吉林省藥品檢驗所提供（合格證號960101032）；大豆皂甙（SS）由吉林省中醫(yī)中藥研究所提供；實驗用大豆皂甙用生理鹽水稀釋；鏈脲佐菌素（STZ）購于Sigma公司，3H－TdR購于北京原子能研究所，ConA、IMDM、小牛血清購于四季青生物工程公司

1.2 糖尿病模型制備 在實驗分組前，首先制備糖尿病模型，隨機(jī)取實驗動物35只，腹腔注射STZ（用新配制的枸櫞酸緩沖液溶解）50mg／kg；48h后采尾血測空腹血糖，濃度大于16.7mmol／L為模型復(fù)制成功［3］，該模型成功30只。

1.3 實驗分組及給藥 取未造模的10只動物做正常對照組，造模成功的30只動物隨機(jī)分為糖尿病對照組（15只）、大豆皂甙給藥組（15只），大豆皂甙給藥組每日灌胃大豆皂甙10mg／kg，正常對照組及糖尿病對照組均每日給與等劑量生理鹽水，連續(xù)給藥3個月。在實驗過程中糖尿病對照組動物死亡4只、大豆皂甙給藥組動物死亡1只。

1.4 指標(biāo)檢測

1.4.1 脾體比 取材前稱大鼠體重，然后脫臼處死，無菌取出脾臟，稱重，得脾體比值。

1.4.2 HE染色 脾臟常規(guī)固定、脫水、透明、浸蠟、包埋；切片5μm，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察。

1.4.3 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗 將無菌取出的脾臟制備單細(xì)胞懸液，加入含ConA的IMDM培養(yǎng)板中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育72h，于培養(yǎng)結(jié)束前12h加3H－TdR，在液閃測定儀上測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。

1.4.4 IL－2的檢測 同樣制備單細(xì)胞懸液，加入含ConA的IMDM培養(yǎng)板中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育48h，離心取上清，將其加入含有IL－2的培養(yǎng)板中，再孵育48h，然后加入3H－TdR再培養(yǎng)8h，液體閃爍計數(shù)儀測定同位素?fù)饺肓俊?/p>

1.4.5 γ－IFN的檢測 用結(jié)晶紫法檢測［4］，上清制備同上，染色后用722分光光度計于540nm波長處測A值。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 大鼠體重及腎組織的各指標(biāo)（SOD、CAT、LPO、GSH－Px）均以±s表示，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，多個樣本均數(shù)間比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 脾體比 與對照組相比較，糖尿病模型組和大豆皂甙治療組的脾體比無顯著性差異（P＞0.01），見表1。

2.2 脾臟的形態(tài)學(xué)檢測 與對照組相比較，糖尿病模型組和大豆皂甙治療組的脾臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)無顯著性差異（P＞0.01）。

2.3 脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的檢測 與對照組相比較，糖尿病模型組可使大鼠脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率明顯降低（P＜0.01），大豆皂甙治療組可使大鼠脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率明顯升高（P＜0.01），而對照組和大豆皂甙治療組無明顯差異（P＞0.01），見表1。

2.4 脾淋巴細(xì)胞IL－2活性的檢測 與對照組相比較，糖尿病模型組可使大鼠脾淋巴細(xì)胞IL－2水平明顯降低（P＜0.01），大豆皂甙治療組可使大鼠脾淋巴細(xì)胞IL－2水平升高（P＜0.01），而對照組和大豆皂甙治療組無明顯差異（P＞0.01），見表1。

2.5 脾淋巴細(xì)胞γ－IFN活性的檢測 與對照組相比較，糖尿病模型組可使大鼠脾淋巴細(xì)胞γ－IFN水平明顯降低（P＜0.01），大豆皂甙治療組可使大鼠脾淋巴細(xì)胞γ－IFN水平升高（P＜0.01），而對照組和大豆皂甙治療組無明顯差異（P＞0.01），見表1。

表1 大豆皂甙作用下Wistar大鼠脾臟免疫指標(biāo)的比較（n＝10，±s）

表1 大豆皂甙作用下Wistar大鼠脾臟免疫指標(biāo)的比較（n＝10，±s）

＊P＜0.01，△P＞0.01compared with control group；

Group spleen body thanlymphocyte transformation rate（cpm） IL－2（cpm） γ－IFN（A）82.3 0.387±0.023 Diabetic model 0.38±0.05△ 634.68±21.23＊ 14257.3±1328.6＊ 0.193±0.080＊SS treatment 0.35±0.07△ 1028.35±39.66△ 19893.4±1452.6△ 0.365±0.021 Control 0.36±0.04 1074.32±45.63 20374.1±17△

3 討論

大豆皂甙具有抗補(bǔ)體、增強(qiáng)造血功能、促進(jìn)脾細(xì)胞增殖、免疫調(diào)節(jié)、肝損傷保護(hù)和促進(jìn)潰瘍愈合的作用，但其對T細(xì)胞及免疫功能影響的研究還不夠深入［5，6］。機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)主要是通過細(xì)胞免疫和體液免疫，而IL－2和γ－IFN是細(xì)胞免疫的主要參與者，二者主要由機(jī)體內(nèi)Th1細(xì)胞分泌，它能維持T細(xì)胞在體外的生長，激活多種免疫細(xì)胞，是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能最主要的細(xì)胞因子［7，8］，因此IL－2和γ－IFN作為細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中重要的調(diào)節(jié)因子，在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、抗腫瘤方面發(fā)揮著重要的作用［9，10］。本實驗的研究表明糖尿病大鼠脾臟IL－2和γ－IFN水平非常顯著地低于正常對照組（P＜0.01）；經(jīng)大豆皂甙治療3個月后糖尿病大鼠脾臟IL－2和γ－IFN水平非常顯著地升高，與正常對照組比較無顯著性差異（P＞0.01）。分析其原因，可能是糖尿病大鼠Th1細(xì)胞減少，致使分泌IL－2和γ－IFN減少，并導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能的降低；另一原因可能是糖尿病大鼠的cAMP／cGMP（腺苷環(huán)化酶／烏苷環(huán)化酶），前列腺素E／前列腺素F的比值失衡的結(jié)果，這些都可能是造成糖尿病大鼠IL－2和γ－IFN含量降低的主要原因之一。綜上所述，對糖尿病大鼠脾臟IL－2和γ－IFN的檢測，對探討大豆皂甙對糖尿病大鼠的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制具有重要的臨床價值。

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