陳岳濤 曹 蔚 謝艷華 孫紀(jì)元 王四旺 葉青雅

第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系天然藥物學(xué)教研室 （西安710032）

元胡止痛片由中藥延胡索（Rhizoma Corydalis）和白芷（RadixAngelica dahuricae）組成，為2010年藥典收錄的標(biāo)準(zhǔn)制劑，主要功能為理氣、活血、止痛，用于氣滯血瘀的胃痛、脅痛、頭痛及月經(jīng)痛。本實(shí)驗(yàn)以“分子中藥”理念［1，2］為指導(dǎo)，分別選取延胡索和白芷中主成分即延胡索乙素和歐前胡素，采用痛經(jīng)模型大鼠［3］，比較元胡止痛片、單味中藥提取物單用及配伍、處方主成分單用及配伍的鎮(zhèn)痛作用，并初步探究其鎮(zhèn)痛機(jī)制。

1 材 料 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雌性未孕Wistar大鼠80只，周齡11周，體重250±10g；由上海市西普爾－必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（滬）2008－0016，合格證編號(hào)：2008001609261。

1.2 藥品與試劑 延胡索，白芷，上述中藥飲片均購(gòu)于西安中藥飲片廠，批號(hào)分別為101124和101208，經(jīng)本科室鑒定，符合《中國(guó)藥典》（2010版）項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)。

苯甲酸雌二醇注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)：1007091）；縮宮素注射液（馬鞍山豐原制藥有限公司，批號(hào)：101007－1）；元胡止痛片（河南皖西制藥股份有限公司，批號(hào)：110206）；阿司匹林腸溶片（沈陽(yáng)奧吉娜藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20110703）。

NO試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：201202010）；SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)20110416）；MDA試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20110420）；考馬亮斯蘭蛋白測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)20110426）。

1.3 儀 器 AUW－200D分析天平，日本島津制作所；T10b勻漿機(jī)，德國(guó)IKA集團(tuán)；RT－9600半自動(dòng)生化分析儀，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司；TDL－5C低俗臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；TGL－16GB高速臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠。

2 實(shí)驗(yàn)方法 2.1 實(shí)驗(yàn)樣品的制備 按照2010版《中國(guó)藥典》（一部）中元胡止痛片項(xiàng)下方法分別制備延胡索提取物和白芷提取物。稱取延胡索藥材1333g，白芷藥材667g，分別采用60%乙醇浸泡24h，加熱回流2次，第1次3h，第2次2h。將提取液濃縮得延胡索提取物干膏253.9g，白芷提取浸膏142.5g。

2.2 動(dòng)物分組 將260±10g雌性未孕 Wistar大鼠80只，隨機(jī)分為10組，每組8只。分別為Ⅰ正常組，Ⅱ模型對(duì)照組，Ⅲ元胡止痛片組（0.698g／kg／d），Ⅳ 延胡索提取物組（0.077g／kg／d），Ⅴ白芷提取物組（0.137g／kg／d），Ⅵ提取物合用組（延胡索提取物0.077g／kg／d＋白芷提取物提取物0.137g／kg／d）；Ⅶ延胡索乙素組（0.07g／kg／d），Ⅷ歐前胡素組（0.025g／kg／d），Ⅸ主成分合用組（延胡索乙素0.07g／kg／d＋歐前胡素0.025g／kg／d），Ⅹ對(duì)照組（阿司匹林0.3g／kg／d）。

2.3 催產(chǎn)素所致痛經(jīng)模型的建立 除空白對(duì)照組外，其余各組動(dòng)物連續(xù)10d于每日上午8時(shí)皮下注射（s.c.）苯甲酸雌二醇注射液（第1天，第10天給予2.5mg／kg，第2到9天給予1mg／kg），空白對(duì)照組s.c.相應(yīng)劑量注射用大豆油。在給予苯甲酸雌二醇第4天開始給藥，各組均灌胃給予受試藥，1次／d，連續(xù)7d，模型和對(duì)照組給予等體積生理鹽水。最后1次灌胃40min后，腹腔注射（i.p.）催產(chǎn)素20U／kg。記錄扭體潛伏期，30min內(nèi)扭體次數(shù)，計(jì)算扭體發(fā)生率。扭體發(fā)生率%＝（各組發(fā)生扭體動(dòng)物數(shù)／各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)）×100%。

2.4 血清及子宮組織中MDA、SOD活性檢測(cè) 扭體計(jì)數(shù)后，大鼠腹腔注射20%烏拉坦（3.0mL／kg）麻醉后，腹主動(dòng)脈取血3mL，制備血清，測(cè)定血清中丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）的活性。迅速剝離子宮，精密稱取0.5g左右，加0.9%氯化鈉溶液制備成10%子宮組織勻漿，離心后按試劑盒說明書要求分別測(cè)定MDA含量及SOD活性。

3 結(jié) 果 3.1 元胡止痛方對(duì)痛經(jīng)模型大鼠的干預(yù)作用 由表1結(jié)果說明，與模型對(duì)照組比較，其余各給藥組均具有明顯鎮(zhèn)痛效果，以白芷提取物組，提取物合用組及主成分合用組最為顯著。元胡止痛片組，白芷提取物組，提取物合用組及主成分合用組能明顯延長(zhǎng)疼痛潛伏期。

表1 元胡止痛方對(duì)痛經(jīng)模型大鼠的干預(yù)作用

3.2 對(duì)大鼠子宮組織及血清SOD活性的影響 圖1結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組子宮組織SOD活性降低（P＜0.05）；血清SOD活性顯著降低（P＜0.01）；與模型對(duì)照組比較，Ⅳ延胡索提取物組組織中SOD活性變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅶ延胡索乙素組子宮組織SOD活性升高（P＜0.05）；Ⅲ元胡止痛片組，Ⅴ白芷提取物組，Ⅵ提取物合用組，Ⅷ歐前胡素組，Ⅸ有效成分合用組，Ⅹ陽(yáng)性對(duì)照組子宮組織SOD活性均顯著升高（P＜0.01）；Ⅹ陽(yáng)性對(duì)照組血清SOD活性變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；Ⅵ提取物合用組，Ⅶ延胡索乙素組血清SOD活性升高（P＜0.05）；Ⅲ元胡止痛片組，Ⅳ延胡索提取物組，Ⅴ白芷提取物組，Ⅷ歐前胡素組，Ⅸ有效成分合用組血清SOD活性顯著升高（P＜0.01）。

圖1 元胡止痛片對(duì)痛經(jīng)模型大鼠子宮組織及血清SOD活性的影響

3.3 對(duì)痛經(jīng)模型大鼠子宮組織及血清MDA含量的影響

圖2結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組子宮組織和血清MDA含量顯著升高；與模型對(duì)照組比較，各給藥組子宮組織MDA含量顯著降低（P＜0.01）；Ⅶ延胡索乙素組血清MDA含量變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅳ延胡索提取物組，Ⅷ歐前胡素組，Ⅹ陽(yáng)性對(duì)照組血清 MDA含量降低（P＜0.05）；Ⅲ元胡止痛片組，Ⅴ白芷提取物組，Ⅵ提取物合用組，Ⅸ有效成分合用組血清 MDA含量顯著降低（P＜0.01）。

圖2 元胡止痛片對(duì)痛經(jīng)模型大鼠子宮組織及血清MDA含量的影響

4 討 論 傳統(tǒng)中藥元胡止痛方含延胡索、白芷兩味藥材，二者相須為伍，行氣定痛。其中延胡索主要有效成分為延胡索乙素，白芷主要有效成分為歐前胡素，故探討延胡索提取物、白芷提取物、延胡索乙素＋歐前胡素對(duì)大鼠痛經(jīng)治療作用差異，藉此闡明元胡止痛方的配伍原理。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，延胡索乙素和歐前胡素均能明顯延長(zhǎng)痛經(jīng)模型大鼠疼痛潛伏期，降低扭體次數(shù)，表現(xiàn)明顯鎮(zhèn)痛作用［4］，其中主成分配伍組的效果優(yōu)于單用，提示延胡索乙素和歐前胡素主成分配伍具有協(xié)同作用，其鎮(zhèn)痛療效優(yōu)于元胡止痛片，但低于延胡索和白芷提取物配伍組；提示分別源自延胡索和白芷中的延胡索乙素、歐前胡素應(yīng)該是元胡止痛方中起鎮(zhèn)痛作用的二個(gè)主要“中藥分子”，然而它們不是二味中藥材中唯一鎮(zhèn)痛的中藥分子。由此說明，中藥對(duì)證治療的配伍原理十分復(fù)雜，闡明中藥治病的物效基礎(chǔ)的研究任重而道遠(yuǎn)。

據(jù)報(bào)道［5，6］原發(fā)性痛經(jīng)會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化的加速升高，MDA作為脂質(zhì)做氧化的最終產(chǎn)物，其水平的提高與痛經(jīng)相關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)中觀察到，由縮宮素造成的痛經(jīng)模型大鼠血清和子宮組織中抗氧化酶（SOD）的活性下降，MDA的含量升高，與文獻(xiàn)報(bào)道［7，8］的結(jié)果一致。痛經(jīng)時(shí)各種抗氧化酶活性相應(yīng)降低，激起自由基的連鎖、增生反應(yīng)，形成一系列的脂質(zhì)自由基及其降解產(chǎn)物，從而進(jìn)一步引起細(xì)胞膜的流動(dòng)性降低，通透性增高，線粒體腫脹，溶酶體破壞及溶酶體酶的釋放，更進(jìn)一步加重子宮內(nèi)膜的損傷，使痛經(jīng)發(fā)生并加劇。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明元胡止痛片可以明顯增強(qiáng)子宮組織及血清中SOD活性，減少自由基及其降解產(chǎn)物－MDA的含量，消除體內(nèi)過氧化氫及脂質(zhì)過氧化物，阻斷活性氧自由基對(duì)機(jī)體的進(jìn)一步損傷，調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜缺血時(shí)細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)，保護(hù)生物膜，包括細(xì)胞膜、細(xì)胞器膜上多烯脂肪酸、細(xì)胞骨架及其他蛋白質(zhì)免受自由基攻擊，從而達(dá)到治療或緩解痛經(jīng)的作用。白芷提取物及歐前胡素顯著提高子宮組織及血清中SOD活性，降低MDA含量，與元胡止痛片一致，提示作用于氧化應(yīng)激通路可能是歐前胡素的鎮(zhèn)痛機(jī)制，但是延胡索提取物對(duì)子宮組織SOD活性影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，延胡索乙素對(duì)血清MDA含量影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示延胡索乙素可能通過其他途徑與歐前胡素協(xié)同鎮(zhèn)痛。

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