陳岳濤 曹 蔚 謝艷華 孫紀元 王四旺 葉青雅

第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系天然藥物學(xué)教研室 （西安710032）

元胡止痛片由中藥延胡索（Rhizoma Corydalis）和白芷（RadixAngelica dahuricae）組成，為2010年藥典收錄的標準制劑，主要功能為理氣、活血、止痛，用于氣滯血瘀的胃痛、脅痛、頭痛及月經(jīng)痛。本實驗以“分子中藥”理念［1，2］為指導(dǎo)，分別選取延胡索和白芷中主成分即延胡索乙素和歐前胡素，采用痛經(jīng)模型大鼠［3］，比較元胡止痛片、單味中藥提取物單用及配伍、處方主成分單用及配伍的鎮(zhèn)痛作用，并初步探究其鎮(zhèn)痛機制。

1 材 料 1.1 實驗動物 SPF級雌性未孕Wistar大鼠80只，周齡11周，體重250±10g；由上海市西普爾－必凱實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（滬）2008－0016，合格證編號：2008001609261。

1.2 藥品與試劑 延胡索，白芷，上述中藥飲片均購于西安中藥飲片廠，批號分別為101124和101208，經(jīng)本科室鑒定，符合《中國藥典》（2010版）項下標準。

苯甲酸雌二醇注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批號：1007091）；縮宮素注射液（馬鞍山豐原制藥有限公司，批號：101007－1）；元胡止痛片（河南皖西制藥股份有限公司，批號：110206）；阿司匹林腸溶片（沈陽奧吉娜藥業(yè)有限公司，批號：20110703）。

NO試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：201202010）；SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號20110416）；MDA試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20110420）；考馬亮斯蘭蛋白測定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號20110426）。

1.3 儀 器 AUW－200D分析天平，日本島津制作所；T10b勻漿機，德國IKA集團；RT－9600半自動生化分析儀，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司；TDL－5C低俗臺式離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；TGL－16GB高速臺式離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠。

2 實驗方法 2.1 實驗樣品的制備 按照2010版《中國藥典》（一部）中元胡止痛片項下方法分別制備延胡索提取物和白芷提取物。稱取延胡索藥材1333g，白芷藥材667g，分別采用60%乙醇浸泡24h，加熱回流2次，第1次3h，第2次2h。將提取液濃縮得延胡索提取物干膏253.9g，白芷提取浸膏142.5g。

2.2 動物分組 將260±10g雌性未孕 Wistar大鼠80只，隨機分為10組，每組8只。分別為Ⅰ正常組，Ⅱ模型對照組，Ⅲ元胡止痛片組（0.698g／kg／d），Ⅳ 延胡索提取物組（0.077g／kg／d），Ⅴ白芷提取物組（0.137g／kg／d），Ⅵ提取物合用組（延胡索提取物0.077g／kg／d＋白芷提取物提取物0.137g／kg／d）；Ⅶ延胡索乙素組（0.07g／kg／d），Ⅷ歐前胡素組（0.025g／kg／d），Ⅸ主成分合用組（延胡索乙素0.07g／kg／d＋歐前胡素0.025g／kg／d），Ⅹ對照組（阿司匹林0.3g／kg／d）。

2.3 催產(chǎn)素所致痛經(jīng)模型的建立 除空白對照組外，其余各組動物連續(xù)10d于每日上午8時皮下注射（s.c.）苯甲酸雌二醇注射液（第1天，第10天給予2.5mg／kg，第2到9天給予1mg／kg），空白對照組s.c.相應(yīng)劑量注射用大豆油。在給予苯甲酸雌二醇第4天開始給藥，各組均灌胃給予受試藥，1次／d，連續(xù)7d，模型和對照組給予等體積生理鹽水。最后1次灌胃40min后，腹腔注射（i.p.）催產(chǎn)素20U／kg。記錄扭體潛伏期，30min內(nèi)扭體次數(shù)，計算扭體發(fā)生率。扭體發(fā)生率%＝（各組發(fā)生扭體動物數(shù)／各組實驗動物數(shù)）×100%。

2.4 血清及子宮組織中MDA、SOD活性檢測 扭體計數(shù)后，大鼠腹腔注射20%烏拉坦（3.0mL／kg）麻醉后，腹主動脈取血3mL，制備血清，測定血清中丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）的活性。迅速剝離子宮，精密稱取0.5g左右，加0.9%氯化鈉溶液制備成10%子宮組織勻漿，離心后按試劑盒說明書要求分別測定MDA含量及SOD活性。

3 結(jié) 果 3.1 元胡止痛方對痛經(jīng)模型大鼠的干預(yù)作用 由表1結(jié)果說明，與模型對照組比較，其余各給藥組均具有明顯鎮(zhèn)痛效果，以白芷提取物組，提取物合用組及主成分合用組最為顯著。元胡止痛片組，白芷提取物組，提取物合用組及主成分合用組能明顯延長疼痛潛伏期。

表1 元胡止痛方對痛經(jīng)模型大鼠的干預(yù)作用

3.2 對大鼠子宮組織及血清SOD活性的影響 圖1結(jié)果表明，與正常對照組比較，模型對照組子宮組織SOD活性降低（P＜0.05）；血清SOD活性顯著降低（P＜0.01）；與模型對照組比較，Ⅳ延胡索提取物組組織中SOD活性變化無統(tǒng)計學(xué)意義；Ⅶ延胡索乙素組子宮組織SOD活性升高（P＜0.05）；Ⅲ元胡止痛片組，Ⅴ白芷提取物組，Ⅵ提取物合用組，Ⅷ歐前胡素組，Ⅸ有效成分合用組，Ⅹ陽性對照組子宮組織SOD活性均顯著升高（P＜0.01）；Ⅹ陽性對照組血清SOD活性變化無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；Ⅵ提取物合用組，Ⅶ延胡索乙素組血清SOD活性升高（P＜0.05）；Ⅲ元胡止痛片組，Ⅳ延胡索提取物組，Ⅴ白芷提取物組，Ⅷ歐前胡素組，Ⅸ有效成分合用組血清SOD活性顯著升高（P＜0.01）。

圖1 元胡止痛片對痛經(jīng)模型大鼠子宮組織及血清SOD活性的影響

3.3 對痛經(jīng)模型大鼠子宮組織及血清MDA含量的影響

圖2結(jié)果表明，與正常對照組比較，模型對照組子宮組織和血清MDA含量顯著升高；與模型對照組比較，各給藥組子宮組織MDA含量顯著降低（P＜0.01）；Ⅶ延胡索乙素組血清MDA含量變化無統(tǒng)計學(xué)意義；Ⅳ延胡索提取物組，Ⅷ歐前胡素組，Ⅹ陽性對照組血清 MDA含量降低（P＜0.05）；Ⅲ元胡止痛片組，Ⅴ白芷提取物組，Ⅵ提取物合用組，Ⅸ有效成分合用組血清 MDA含量顯著降低（P＜0.01）。

圖2 元胡止痛片對痛經(jīng)模型大鼠子宮組織及血清MDA含量的影響

4 討 論 傳統(tǒng)中藥元胡止痛方含延胡索、白芷兩味藥材，二者相須為伍，行氣定痛。其中延胡索主要有效成分為延胡索乙素，白芷主要有效成分為歐前胡素，故探討延胡索提取物、白芷提取物、延胡索乙素＋歐前胡素對大鼠痛經(jīng)治療作用差異，藉此闡明元胡止痛方的配伍原理。本實驗結(jié)果證實，延胡索乙素和歐前胡素均能明顯延長痛經(jīng)模型大鼠疼痛潛伏期，降低扭體次數(shù)，表現(xiàn)明顯鎮(zhèn)痛作用［4］，其中主成分配伍組的效果優(yōu)于單用，提示延胡索乙素和歐前胡素主成分配伍具有協(xié)同作用，其鎮(zhèn)痛療效優(yōu)于元胡止痛片，但低于延胡索和白芷提取物配伍組；提示分別源自延胡索和白芷中的延胡索乙素、歐前胡素應(yīng)該是元胡止痛方中起鎮(zhèn)痛作用的二個主要“中藥分子”，然而它們不是二味中藥材中唯一鎮(zhèn)痛的中藥分子。由此說明，中藥對證治療的配伍原理十分復(fù)雜，闡明中藥治病的物效基礎(chǔ)的研究任重而道遠。

據(jù)報道［5，6］原發(fā)性痛經(jīng)會導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化的加速升高，MDA作為脂質(zhì)做氧化的最終產(chǎn)物，其水平的提高與痛經(jīng)相關(guān)。在本實驗中觀察到，由縮宮素造成的痛經(jīng)模型大鼠血清和子宮組織中抗氧化酶（SOD）的活性下降，MDA的含量升高，與文獻報道［7，8］的結(jié)果一致。痛經(jīng)時各種抗氧化酶活性相應(yīng)降低，激起自由基的連鎖、增生反應(yīng)，形成一系列的脂質(zhì)自由基及其降解產(chǎn)物，從而進一步引起細胞膜的流動性降低，通透性增高，線粒體腫脹，溶酶體破壞及溶酶體酶的釋放，更進一步加重子宮內(nèi)膜的損傷，使痛經(jīng)發(fā)生并加劇。本實驗結(jié)果表明元胡止痛片可以明顯增強子宮組織及血清中SOD活性，減少自由基及其降解產(chǎn)物－MDA的含量，消除體內(nèi)過氧化氫及脂質(zhì)過氧化物，阻斷活性氧自由基對機體的進一步損傷，調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜缺血時細胞內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)，保護生物膜，包括細胞膜、細胞器膜上多烯脂肪酸、細胞骨架及其他蛋白質(zhì)免受自由基攻擊，從而達到治療或緩解痛經(jīng)的作用。白芷提取物及歐前胡素顯著提高子宮組織及血清中SOD活性，降低MDA含量，與元胡止痛片一致，提示作用于氧化應(yīng)激通路可能是歐前胡素的鎮(zhèn)痛機制，但是延胡索提取物對子宮組織SOD活性影響無統(tǒng)計學(xué)意義，延胡索乙素對血清MDA含量影響無統(tǒng)計學(xué)意義，提示延胡索乙素可能通過其他途徑與歐前胡素協(xié)同鎮(zhèn)痛。

［1］王四旺.“分子中藥學(xué)”內(nèi)涵與現(xiàn)代中醫(yī)藥［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2008，4（3）：9－12.

［2］王四旺.“中藥分子”與“分子中藥”［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2008，29（18）：1633－1636.

［3］嵇 波，張露芬，朱 江，等.痛經(jīng)模型建立和評價方法的思考［J］.中國藥理學(xué)通報，2008，24（6）：711－714.

［4］方 玲，朱新冰，尹 菊，等.經(jīng)前三劑止痛方治療實驗性痛經(jīng)模型大鼠作用機制研究［J］.天津中醫(yī)藥，2010（1）：46－49.

［5］Dikensoy E，Balat O，Pence S，et al.Malondialde－h(huán)yde，nitric oxide and adrenomedullin levels in patients with primary dysmenorrhea［J］.Obstet Gynaecol Res，2008，6（34）：1049－53

［6］Yeh M L，Chen H H，So E C，et al.A study of serum malondialdehyde and interleukin－6levels in young women with dysmenorrhea in Taiwan［J］.Life Sci，2004，75（6）：669－673.

［7］劉健鴻，姚 凝，裴培田，等.舒經(jīng)玫瑰膠囊對小鼠原發(fā)性痛經(jīng)血清SOD、OFR影響實驗研究［J］.中華中西醫(yī)學(xué)雜志，2004，2（6）：1－2.

［8］裴培田，王 昕，趙一梅，等.舒經(jīng)玫瑰膠囊對小鼠原發(fā)性痛經(jīng) MDA、Ca2＋的影響［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2003，10（5）：31－32.