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        消腫噴劑對急性軟組織損傷大鼠血清PGE2、IL-6影響的實驗研究*

        2013-11-22 01:09:08牛淑亮劉鳳霞王水泉王海龍新疆醫(yī)科大學烏魯木齊830011
        陜西中醫(yī) 2013年1期
        關鍵詞:紅花油噴劑消腫

        牛淑亮 劉鳳霞 王水泉 廖 靜 王海龍 新疆醫(yī)科大學 (烏魯木齊830011)

        消腫噴劑為蘇梔消腫膏改良制劑,主要有蘇木、梔子、姜黃、延胡索、制乳香、制沒藥、三七、血竭、冰片等多味中藥組成,具有明顯活血祛瘀、舒筋活絡、消腫止痛作用。臨床應用治療跌打損傷,各種骨折后軟組織腫脹、疼痛1583例,效果良好。為探討其促進急性軟組織損傷修復的作用機理,我們進行了消腫噴劑對急性軟組織損傷大鼠血清PGE 2、IL-6影響的實驗研究。

        1 實驗材料 1.1 實驗動物 健康SD大白鼠72只,雌雄各半,8周齡,體重216.3±11.4g(新疆醫(yī)科大學大學實驗動物中心提供)。

        1.2 實驗用藥 消腫噴劑(蘇木、梔子、姜黃、延胡索、制乳香、制沒藥、三七、血竭混勻,浸泡于60%酒精中,每天攪拌1次,10后過濾,取濾液,再加冰片,溶解后分裝)。對照藥物選用正紅花油(成都東洋百信制藥有限公司生產,批準文號:國藥準字Z20033087)。

        1.3 實驗儀器 軟組織打擊器(自制),Labsystems Multiskan MS352型酶標儀,TG16W微量高速離心機,GNP-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱,ELISA Kit for Rat PGE2(美國RD公司進口分裝,生產批號:20120610)、ELISA Kit for Rat IL-6(美國RD公司進口分裝,生產批號:20120615)

        2 實驗方法 2.1 造模與分組 造模方法參照文獻[1]略加改造:SD大白鼠54只,實驗前1天禁水禁食,以8%硫化鈉溶液右后肢脫毛。實驗前,水合氯醛腹腔注射麻醉(0.1mL/100g),麻醉成功后將大鼠固定在自制打擊器上,將200g重的砝碼通過與砝碼直徑相當?shù)乃芰瞎苤凶?0cm高處垂直自由落體沖擊大鼠大腿外側肌肉豐厚處,連續(xù)打擊2次,打擊面積約1×2cm2,造成打擊局部出現(xiàn)散在出血點,皮下瘀腫創(chuàng)面及腫脹的非開放性軟組織損傷模型。排除皮膚破損或骨折者,并已經解剖及組織學驗證成功率為100%。

        造模成功的大鼠按隨機數(shù)字表法分為將大鼠隨機等分為3組,各18只。模型組,正紅花油藥物對照組和消腫噴劑藥物治療組。18只未打擊大鼠為空白組。模型組、空白組不予給藥,對照組與治療組每天早晚各外拭給藥一次,連續(xù)給藥5d。各組均給予正常飼食。

        2.2 取材 造模后1,3,5d二次給藥前,分3批處死大鼠。水合氯醛腹腔注射麻醉(0.1mL/100g),腹主動脈采血,血液室溫靜置5min,2500r/min離心5min,收集上清,保存、備用。然后以打擊部位為中心,沿損傷處切取肌肉組織,10%甲醛溶液固定,備用。

        2.3 指標檢測與方法 2.3.1 損傷局部組織,石蠟包埋,切片,染色,鏡下進行組織學觀察,并計數(shù)嗜中性粒細胞及浸潤情況。

        2.3.2 嚴格按試劑盒操作說明測定血清PGE2、IL-6含量。

        4 實驗結果 4.1 組織學觀察 治療后1d,模型組肌纖維水腫,部分肌纖維碎裂,肌束間距增寬,創(chuàng)傷病灶中嗜中性粒細胞浸潤密度高。紅花油組與消腫噴劑組鏡下觀察結果與模型組類似,僅紅細胞瘀積,肌纖維水腫及微血管擴張程度稍輕。消腫噴劑組較模型組,嗜中性粒細胞明顯減少(P<0.05),消腫噴劑組與紅花油組無顯著差異性(P>0.05)。

        治療后3d,模型組見廣泛充血水腫,肌核增生,較多中性白細胞浸潤。紅花油組與消腫噴劑組充血、水腫減輕,肌間質及血管周圍可見少量中性細胞浸潤。

        治療后第5d,模型組部分肌纖維紅染,偶見肌纖維排列紊亂、紅細胞瘀積現(xiàn)象,細胞呈彌漫性浸潤。紅花油組與消腫噴劑組見少量充血水腫,細胞浸潤以及肌漿碎裂不明顯,肌纖維形態(tài)大致正常。結果見表1。

        表1 各組大鼠治療后不同時期創(chuàng)傷病灶中嗜中性粒細胞計數(shù)變化(±s,個/視野)

        表1 各組大鼠治療后不同時期創(chuàng)傷病灶中嗜中性粒細胞計數(shù)變化(±s,個/視野)

        組別 第1d 第3d 第5d模型組43.22±10.05 14.56±11.22 7.35±3.13紅花油組 32.08±16.41 6.67±3.01 2.30±0.76消腫噴劑組31.51±13.11 6.70±1.92 0.00

        4.2 大鼠血清PGE2含量 各實驗組血清PGE2含量峰值均出現(xiàn)在第3d,至第5d大幅降低。較空白組相比,造模各組均具有顯著差異,P<0.01。第1d、第3d、第5d,紅花油組、消腫噴劑組較模型組均有差異性,P<0.01或P<0.05。結果見表2。

        表2 各組大鼠治療后不同時期血清PGE2含量(ng/L,±s)

        表2 各組大鼠治療后不同時期血清PGE2含量(ng/L,±s)

        組別 第1d 第3d 第5d空白組6.91±2.07 - -模型組 181.67±29.51 190.32±33.40 135.83±12.04紅花油組 134.00±41.62 147.41±23.09 104.63±13.75消腫噴劑組113.16±21.75 126.37±14.42 81.27±7.90

        4.3 大鼠血清IL-6含量 各實驗組血清IL-6含量峰值均出現(xiàn)在第3d,至第5d大幅降低。較空白組相比,造模各組均具有顯著差異,P<0.01。第1d、第3d、第5d,紅花油組、消腫噴劑組較模型組均有差異性,P<0.01或P<0.05。結果見表3。

        5 討 論 急性軟組織損傷是因皮膚以下骨骼之外的組織受外來應力作用且達到一定的強度,超過軟組織承受負荷,造成的急性破壞和組織生理功能暫時紊亂而誘發(fā)的癥狀、損傷。氣滯血瘀,筋脈阻滯是其主要病機,臨床表現(xiàn)為腫、痛、功能障礙,病理表現(xiàn)為炎性介質的釋放增加、損傷局部的炎癥反應和微循環(huán)障礙。

        表3 各組大鼠治療后不同時期血清IL-6含量(pg/L,±s)

        表3 各組大鼠治療后不同時期血清IL-6含量(pg/L,±s)

        組別 第1d 第3d 第5d空白組2.41±0.57 - -模型組 49.77±19.41 57.36±13.42 38.89±8.09紅花油組 39.65±9.98 44.40±8.69 31.96±7.57消腫噴劑組30.96±7.57 36.59±6.11 21.44±3.09

        IL-6主要由T、B細胞和單核巨噬細胞分泌的細胞因子,能促進中性粒細胞的活化、聚集,多在細胞受到 TNF-α、IL-1β刺激后產生,血清中IL-6水平可反應組織損傷程度[2]。PGE2是重要的炎癥介質,能夠降低痛閾,激活外周感覺神經末梢EP受體,敏化外周痛覺感受器[3],其持久廣泛的擴張血管、致痛和免疫功能的影響,在創(chuàng)傷中起重要作用。

        抑制無菌性炎性滲出,改善微循環(huán),促進水腫吸收,減輕局部損傷,有利于創(chuàng)傷組織的修復愈合[4,5]。消腫噴劑所含藥物蘇木可以減少細胞培養(yǎng)上清液中IL-2的生成[6]。梔子提取物京尼平苷具有較好的治療軟組織損傷的作用。姜黃素對IL-8、MIP-1α、MCP-1、IL-1b及 TNF-α有抑制作用。乳香乙醇提取物可抑制大鼠體內的多形核白細胞浸潤。諸藥合用可改善急性軟組織損傷動物模型癥狀、癥候,加速傷肢組織修復,抑制損傷局部炎性細胞因子IL-1β表達[7]。

        本研究結果表明消腫噴劑能夠抑制急性軟組織損傷大鼠血清PGE2和IL-6表達,且在治療1d,3d,5d后與模型組比較具有顯著差異性。消腫噴劑對損傷局部炎癥反應具有抑制作用,從而發(fā)揮發(fā)揮對急性軟組織損傷動物模型有治療作用。

        [1]周國林,姚全勝,潘玉英.一種動物軟組織損傷的實驗方法[J].中國藥理學通報,1991,7(5):396-398.

        [2]張 劍,碧 清.創(chuàng)傷性休克患者血清TNF-α、IL變化的意義[J].浙江中西醫(yī)結合雜志,2008,18(2):103-104.

        [3]OmoteK,Kawamata T,NakayamaY,et al.Effects ofa novel selective ag-onist for prostaglandinreceptor subtype EP4 on hyperalgesia and inflam-mation inmonoarthriticmodel[J].Anesthesiology,2002,9(7):170-176.

        [4]陳迎春,高紹芳,邸淑珍.舒筋涂劑治療急性軟組織損傷的實驗研究[J].陜西中醫(yī),2009,30(4):490-491.

        [5]張根印,牛淑亮,楊 寧.蘇梔消腫膏對急性軟組織損傷模型大鼠血液流變學的影響[J].陜西中醫(yī)學院學報,2008,31(3):49-50.

        [6]姚全勝,周國林.梔子抗炎、治療軟組織損傷有效部位的篩選研究[J].中國中藥雜志,1991,16(8):486-488.

        [7]牛淑亮,劉鳳霞,王海龍,等.消腫噴劑促進急性軟組織損傷大鼠損傷修復的實驗研究[J].陜西中醫(yī),2011,32(7):918-920.

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