陶 潛 張曉娟 鄭艷莉 魯曉燕

骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是新近發(fā)現(xiàn)的卵巢癌生物學(xué)標(biāo)志物之一，在腫瘤形成過程中刺激細(xì)胞粘附、遷移、信號(hào)傳導(dǎo)和血管形成。本文研究OPN在卵巢交界性腫瘤及卵巢癌中的表達(dá)，分析其與腫瘤分化、臨床分期的關(guān)系，以提高卵巢癌的早期診斷率。

1 材料與方法

1.1 一般資料

48例卵巢癌及35例卵巢交界性腫瘤標(biāo)本均來自南通市第一人民醫(yī)院2005年1月－2012年12月的手術(shù)標(biāo)本。所有患者均為女性。卵巢癌患者年齡28～69歲，平均年齡51.4歲;腫瘤多為囊實(shí)性;發(fā)生于雙側(cè)者23例;腫瘤平均直徑7.34 cm，漿液性乳頭狀囊腺癌21例，黏液性乳頭狀囊腺癌12例，內(nèi)膜樣癌10例，5例為轉(zhuǎn)移性癌。交界性腫瘤患者平均年齡41歲;腫瘤平均直徑9.24 cm;交界性漿液性乳頭狀囊腺瘤24例，交界性黏液性乳頭狀囊腺瘤9例，交界性內(nèi)膜樣腫瘤2例。所有病例術(shù)前均未放療或化療，均經(jīng)HE染色及本院兩位主治以上病理醫(yī)師診斷。同時(shí)選取20例卵巢良性漿液性囊腺瘤對(duì)比。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué)EnVision法。OPN單克隆抗體購自福州邁新公司。所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，行HE及免疫組織化學(xué)染色。并用已知陽性切片作陽性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗和二抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

采用雙盲法觀察每張切片。OPN染色以細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性著色。具體觀察方法:高倍鏡下(×200)隨機(jī)選擇5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，共1 000個(gè)細(xì)胞。①按陽性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的比例計(jì)分:無陽性細(xì)胞計(jì)0分，陽性細(xì)胞＜25%計(jì)1分，陽性細(xì)胞＞25%計(jì)2分。②按陽性細(xì)胞顯色強(qiáng)度計(jì)分:無顯色計(jì)0分，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)淺黃色顆粒計(jì)1分，棕黃色顆粒計(jì)2分，棕褐色顆粒計(jì)3分。①+②≥3分記為陽性，否則為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Stata10.0軟件分析，各組間率采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OPN在卵巢組織中的表達(dá)

骨橋蛋白在卵巢癌、交界性腫瘤及漿液性囊腺瘤組織中陽性率分別為 72.9%(35/48)、45.7%(16/35)及15.0%(3/20)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。

2.2 OPN表達(dá)與卵巢癌病理特征的關(guān)系

在漿液性癌、黏液性癌、內(nèi)膜樣癌及轉(zhuǎn)移性癌中表達(dá)陽性率分別為 80.9%(17/21)、58.3%(7/12)、70.0%(7/10)及80.0%(4/5)，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.542)，顯示其表達(dá)與癌組織學(xué)類型無相關(guān)性。但在分化較好的癌中OPN表達(dá)率明顯低于分化差的癌。26例有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌，OPN表達(dá)者22例，其表達(dá)與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者差異顯著，見表1。此外，本組研究同時(shí)觀察到伴有腹膜非浸潤性種植的交界性腫瘤，OPN的表達(dá)明顯強(qiáng)于無腹膜浸潤者。3例伴有微浸潤交界性漿液性乳頭狀腫瘤浸潤區(qū)癌細(xì)胞明顯表達(dá)OPN。

表1 OPN在卵巢癌組織中的表達(dá)

3 討論

OPN是1種含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽序列的分泌型磷酸化糖蛋白，最早是由Senger［1］于1979年作為1種與惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)的鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白提取的，通過與其主要受體整合素和CD44的相互作用，在腫瘤細(xì)胞的移行、浸潤、促進(jìn)腫瘤血管的形成、抑制凋亡等多個(gè)環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要的作用［2］。骨橋蛋白在許多人類腫瘤組織中表達(dá)增高，如肝癌、胃癌、宮頸癌、乳腺癌［3-6］。高亞麗等［7］通過免疫組織化學(xué)方法檢測乳腺癌中OPN的表達(dá)，結(jié)果顯示OPN與乳腺癌的組織學(xué)分級(jí)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與5年生存率呈負(fù)相關(guān)。余洋等［8］研究50例膀胱尿路上皮癌中OPN表達(dá)，顯示OPN隨腫瘤病理分級(jí)、臨床分期的增高而明顯增加，并且在初發(fā)組和復(fù)發(fā)組、單發(fā)組與多發(fā)組的比較中，差異顯著。本組研究結(jié)果中，卵巢癌OPN陽性率72.9%，而良性腫瘤幾乎無表達(dá)，提示OPN可能通過同樣的作用途徑促進(jìn)卵巢上皮細(xì)胞異常增生和惡性轉(zhuǎn)化。

本組實(shí)驗(yàn)中，OPN表達(dá)與卵巢癌組織學(xué)類型無相關(guān)性，而與組織學(xué)分級(jí)密切相關(guān)，低分化的卵巢癌OPN表達(dá)明顯高于高分化癌，表明OPN的表達(dá)不僅反映了卵巢癌細(xì)胞的增殖活性，還與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)。OPN在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中OPN表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，顯示陽性表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲、轉(zhuǎn)移能力，與Kim等［9］研究結(jié)果相符。伴有腹膜非浸潤性種植的交界性腫瘤，OPN的表達(dá)明顯強(qiáng)于無腹膜浸潤者，伴有微浸潤交界性漿液性乳頭狀腫瘤浸潤區(qū)癌細(xì)胞明顯表達(dá)OPN，更進(jìn)一步提示OPN在腫瘤細(xì)胞的突變及進(jìn)展中發(fā)揮了不可忽略的作用。還有學(xué)者用組織化學(xué)和原位雜交檢測到了卵巢乳頭狀囊腺癌里已鈣化的沙樣瘤里存在OPN［10］，因此對(duì)于伴沙粒體形成的交界性漿液性腫瘤應(yīng)密切隨訪血清OPN水平。

關(guān)于OPN與卵巢癌的研究尚處于初始階段，眾多報(bào)道結(jié)果不一，可能是由于研究方法、實(shí)驗(yàn)條件不同和選擇對(duì)象不一致及統(tǒng)計(jì)方法不同導(dǎo)致。OPN與卵巢癌的關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。

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