黃秀珍

大量流行病學(xué)及分子生物學(xué)研究資料已經(jīng)表明，反復(fù)持續(xù)高危型HPV感染是宮頸癌及其癌前病變發(fā)生的必要條件[1]。HPV DNA檢測(cè)作為細(xì)胞學(xué)的輔助方法，已經(jīng)廣泛用于宮頸癌的篩查[2]。HPV DNA的檢測(cè)方法眾多，近年來(lái)，導(dǎo)流雜交技術(shù)逐步應(yīng)用于臨床，其性能亦獲得廣泛肯定。本研究應(yīng)用導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測(cè)了1 623例女性患者HPV DNA，并對(duì)其HPV基因型分布特征進(jìn)行分析，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2010年7月-2013年4月在我院進(jìn)行HPV DNA檢查的1 623例疑診宮頸癌患者作為研究對(duì)象?；颊吣挲g為20～80歲，平均(45.3±17.5)歲。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 達(dá)安公司生產(chǎn)的DA-7600熒光定量PCR儀，凱普生物科技有限公司生產(chǎn)的HybriMaxTM醫(yī)用核酸分子快速雜交儀、HPV DNA抽提試劑盒、HPV DNA擴(kuò)增分型檢測(cè)試劑盒。

1.2.2 標(biāo)本采集 由醫(yī)生用棉拭子先除去宮頸口處多余的分泌物，用凱普專(zhuān)用宮頸刷伸入宮頸內(nèi)1～2 cm處轉(zhuǎn)動(dòng)3～5圈，獲取宮頸口及頸管脫落上皮細(xì)胞，將標(biāo)本毛刷置入到含有細(xì)胞保存液的帶蓋樣品管中，4 ℃保存，1周內(nèi)檢測(cè)。

1.2.3 HPV分型檢測(cè) 按試劑盒要求依次進(jìn)行HPV DNA分離提取、HPV DNA PCR擴(kuò)增、核酸分子快速導(dǎo)流雜交、結(jié)果判讀。結(jié)果判讀時(shí)按芯片上HPV亞型分布的相應(yīng)著色位點(diǎn)判斷，21種HPV基因亞型分為高危型、低危型，高危型包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68等15種，低危型包括HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44，HPV81(CP8304)等6種。

2 結(jié)果

2.1 HPV陽(yáng)性率分析

1 623例女性患者中有798例檢測(cè)出HPV感染，HPV陽(yáng)性率為49.2%。不同年齡段HPV陽(yáng)性率結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同年齡段HPV陽(yáng)性率結(jié)果分析

2.2 HPV感染患者基因亞型陽(yáng)性率分析

除HPV43型以外，其余20種亞型均被檢測(cè)出。不同HPV基因亞型陽(yáng)性率見(jiàn)表2。

表2 798例HPV感染患者基因亞型陽(yáng)性率分析

2.3 HPV感染患者基因型分析

在798例女性HPV感染患者中，單一基因型HPV感染患者620例，多重基因型HPV感染患者178例，見(jiàn)表3。

表3 798例HPV感染患者基因型分析

3 討論

HPV屬于乳頭多瘤空泡病毒科，是一類(lèi)可以特異性感染人皮膚以及黏膜的雙鏈閉合環(huán)狀DNA病毒。通過(guò)DNA序列分析發(fā)現(xiàn)，HPV至少有200多個(gè)基因型，迄今為止已確定基因組全序列的HPV基因型有85種，其中42種與人類(lèi)疾病有關(guān)[3]。不同型別HPV所致的細(xì)胞病理變化有所區(qū)別，根據(jù)這一點(diǎn)可以將HPV基因型分為高危型、低危型兩大類(lèi)，前者是誘發(fā)宮頸癌的重要病原學(xué)因素[4]。基于上述原因，對(duì)HPV進(jìn)行準(zhǔn)確的基因分型，對(duì)HPV感染的治療、宮頸癌的預(yù)防、流行病學(xué)調(diào)查、基因疫苗研制等均有重要的臨床意義。

導(dǎo)流雜交技術(shù)是目前臨床上用于HPV基因分型的常用技術(shù)之一，與傳統(tǒng)雜交法不同，該技術(shù)將探針固定于膜纖維中，目標(biāo)分子主動(dòng)導(dǎo)流穿過(guò)固定有探針的薄膜并與互補(bǔ)探針相結(jié)合形成復(fù)合物被固定下來(lái)，未被結(jié)合固定的分子穿過(guò)薄膜后被除去。由于導(dǎo)流雜交技術(shù)加速了分子之間的相互作用，從而使雜交時(shí)間由傳統(tǒng)雜交法的幾個(gè)小時(shí)減至幾分鐘，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間。

在本研究中，我們利用導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測(cè)了1623例女性患者的HPV基因型，結(jié)果可見(jiàn)798例患者感染了HPV，HPV DNA陽(yáng)性率為49.2%，由于上述患者均為疑診為宮頸癌的患者，因此本研究的HPV DNA陽(yáng)性率顯著高于流行病學(xué)調(diào)查。然后，我們按照年齡對(duì)HPV DNA陽(yáng)性患者進(jìn)行分組，結(jié)果可見(jiàn)30～39歲患者HPV DNA陽(yáng)性率(54.3%)最高，而20～29歲患者HPV DNA陽(yáng)性率(27.3%)最低，由此可見(jiàn)年齡與HPV DNA陽(yáng)性率有一定的關(guān)系。此外，通過(guò)對(duì)798例

HPV DNA陽(yáng)性患者的基因亞型進(jìn)行分析，我們可見(jiàn)單一基因型HPV感染患者620例(77.7%)，多重基因型HPV感染患者178例(22.3%)，后者的比例顯著低于其他文獻(xiàn)報(bào)道[5-6]，這可能是由于地域差別所致。最后，我們對(duì)每種基因亞型HPV DNA陽(yáng)性率進(jìn)行分析，結(jié)果可見(jiàn)除HPV43型以外，其余20種亞型均被檢測(cè)出，且HPV16型陽(yáng)性率在50%以上，其余依次為HPV52型、HPV58型、HPV18型、HPV33型等，上述基因亞型均為高危型，其原因與本研究的HPV DNA陽(yáng)性率顯著高于流行病學(xué)調(diào)查一致，與研究對(duì)象的特點(diǎn)有關(guān)[7-8]。

由于本院婦科的女性患者來(lái)自全省各地，因此本研究結(jié)果可以在一定程度上反映本地區(qū)的情況。綜上所述，本地區(qū)HPV感染患者以單一基因型感染最為常見(jiàn)，主要高危型包括HPV16型、HPV52型、HPV58型等。

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