黃秀珍
大量流行病學(xué)及分子生物學(xué)研究資料已經(jīng)表明,反復(fù)持續(xù)高危型HPV感染是宮頸癌及其癌前病變發(fā)生的必要條件[1]。HPV DNA檢測(cè)作為細(xì)胞學(xué)的輔助方法,已經(jīng)廣泛用于宮頸癌的篩查[2]。HPV DNA的檢測(cè)方法眾多,近年來(lái),導(dǎo)流雜交技術(shù)逐步應(yīng)用于臨床,其性能亦獲得廣泛肯定。本研究應(yīng)用導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測(cè)了1 623例女性患者HPV DNA,并對(duì)其HPV基因型分布特征進(jìn)行分析,報(bào)告如下。
選取2010年7月-2013年4月在我院進(jìn)行HPV DNA檢查的1 623例疑診宮頸癌患者作為研究對(duì)象?;颊吣挲g為20~80歲,平均(45.3±17.5)歲。
1.2.1 儀器與試劑 達(dá)安公司生產(chǎn)的DA-7600熒光定量PCR儀,凱普生物科技有限公司生產(chǎn)的HybriMaxTM醫(yī)用核酸分子快速雜交儀、HPV DNA抽提試劑盒、HPV DNA擴(kuò)增分型檢測(cè)試劑盒。
1.2.2 標(biāo)本采集 由醫(yī)生用棉拭子先除去宮頸口處多余的分泌物,用凱普專(zhuān)用宮頸刷伸入宮頸內(nèi)1~2 cm處轉(zhuǎn)動(dòng)3~5圈,獲取宮頸口及頸管脫落上皮細(xì)胞,將標(biāo)本毛刷置入到含有細(xì)胞保存液的帶蓋樣品管中,4 ℃保存,1周內(nèi)檢測(cè)。
1.2.3 HPV分型檢測(cè) 按試劑盒要求依次進(jìn)行HPV DNA分離提取、HPV DNA PCR擴(kuò)增、核酸分子快速導(dǎo)流雜交、結(jié)果判讀。結(jié)果判讀時(shí)按芯片上HPV亞型分布的相應(yīng)著色位點(diǎn)判斷,21種HPV基因亞型分為高危型、低危型,高危型包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68等15種,低危型包括HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44,HPV81(CP8304)等6種。
1 623例女性患者中有798例檢測(cè)出HPV感染,HPV陽(yáng)性率為49.2%。不同年齡段HPV陽(yáng)性率結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 不同年齡段HPV陽(yáng)性率結(jié)果分析
除HPV43型以外,其余20種亞型均被檢測(cè)出。不同HPV基因亞型陽(yáng)性率見(jiàn)表2。
表2 798例HPV感染患者基因亞型陽(yáng)性率分析
在798例女性HPV感染患者中,單一基因型HPV感染患者620例,多重基因型HPV感染患者178例,見(jiàn)表3。
表3 798例HPV感染患者基因型分析
HPV屬于乳頭多瘤空泡病毒科,是一類(lèi)可以特異性感染人皮膚以及黏膜的雙鏈閉合環(huán)狀DNA病毒。通過(guò)DNA序列分析發(fā)現(xiàn),HPV至少有200多個(gè)基因型,迄今為止已確定基因組全序列的HPV基因型有85種,其中42種與人類(lèi)疾病有關(guān)[3]。不同型別HPV所致的細(xì)胞病理變化有所區(qū)別,根據(jù)這一點(diǎn)可以將HPV基因型分為高危型、低危型兩大類(lèi),前者是誘發(fā)宮頸癌的重要病原學(xué)因素[4]。基于上述原因,對(duì)HPV進(jìn)行準(zhǔn)確的基因分型,對(duì)HPV感染的治療、宮頸癌的預(yù)防、流行病學(xué)調(diào)查、基因疫苗研制等均有重要的臨床意義。
導(dǎo)流雜交技術(shù)是目前臨床上用于HPV基因分型的常用技術(shù)之一,與傳統(tǒng)雜交法不同,該技術(shù)將探針固定于膜纖維中,目標(biāo)分子主動(dòng)導(dǎo)流穿過(guò)固定有探針的薄膜并與互補(bǔ)探針相結(jié)合形成復(fù)合物被固定下來(lái),未被結(jié)合固定的分子穿過(guò)薄膜后被除去。由于導(dǎo)流雜交技術(shù)加速了分子之間的相互作用,從而使雜交時(shí)間由傳統(tǒng)雜交法的幾個(gè)小時(shí)減至幾分鐘,大大縮短了檢測(cè)時(shí)間。
在本研究中,我們利用導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測(cè)了1623例女性患者的HPV基因型,結(jié)果可見(jiàn)798例患者感染了HPV,HPV DNA陽(yáng)性率為49.2%,由于上述患者均為疑診為宮頸癌的患者,因此本研究的HPV DNA陽(yáng)性率顯著高于流行病學(xué)調(diào)查。然后,我們按照年齡對(duì)HPV DNA陽(yáng)性患者進(jìn)行分組,結(jié)果可見(jiàn)30~39歲患者HPV DNA陽(yáng)性率(54.3%)最高,而20~29歲患者HPV DNA陽(yáng)性率(27.3%)最低,由此可見(jiàn)年齡與HPV DNA陽(yáng)性率有一定的關(guān)系。此外,通過(guò)對(duì)798例
HPV DNA陽(yáng)性患者的基因亞型進(jìn)行分析,我們可見(jiàn)單一基因型HPV感染患者620例(77.7%),多重基因型HPV感染患者178例(22.3%),后者的比例顯著低于其他文獻(xiàn)報(bào)道[5-6],這可能是由于地域差別所致。最后,我們對(duì)每種基因亞型HPV DNA陽(yáng)性率進(jìn)行分析,結(jié)果可見(jiàn)除HPV43型以外,其余20種亞型均被檢測(cè)出,且HPV16型陽(yáng)性率在50%以上,其余依次為HPV52型、HPV58型、HPV18型、HPV33型等,上述基因亞型均為高危型,其原因與本研究的HPV DNA陽(yáng)性率顯著高于流行病學(xué)調(diào)查一致,與研究對(duì)象的特點(diǎn)有關(guān)[7-8]。
由于本院婦科的女性患者來(lái)自全省各地,因此本研究結(jié)果可以在一定程度上反映本地區(qū)的情況。綜上所述,本地區(qū)HPV感染患者以單一基因型感染最為常見(jiàn),主要高危型包括HPV16型、HPV52型、HPV58型等。
[1] Zhang L,Wang Y,Peng M,et al.Prevalence and type distribution of high-risk human papillomavirus infections among women in Wufeng County,China〔J〕.Arch Gynecol Obstet,2012,286(3):695.
[2] Wong WC,Fong B,Chan PK.Acceptance of human papillomavirus vaccination among first year female university students in Hong Kong〔J〕.Sex Health,2009,6(4):264.
[3] 張學(xué)東,何青年.人乳頭瘤病毒與子宮頸癌的研究進(jìn)展〔J〕.國(guó)外醫(yī)學(xué)(婦產(chǎn)科學(xué)分冊(cè)),2006,33(2):113.
[4] Monroy OL,Aguilar C,Lizano M,et al.Prevalence of human papillomavirus genotypes,and mucosal IgA anti-viral responses in women with cervical ectopy〔J〕.J Clin Virol,2010,47(1):43.
[5] 陳占國(guó),周 武,許張曄,等.導(dǎo)流雜交方法檢測(cè)人乳頭狀瘤病毒分型的臨床應(yīng)用〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2008,18(9):1345.
[6] 陶萍萍,張國(guó)榮,卞美璐,等.婦科門(mén)診21種人乳頭狀瘤病毒感染狀況分析〔J〕.中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào),2008,22(4):208.
[7] 王旭洲,余英豪,黃惠娟,等.HPV基因分型檢測(cè)與非典型鱗狀細(xì)胞的相關(guān)性研究〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2010,25(6):554.
[8] 王喜梅,羅光霞,張雪梅,等.宮頸腺癌HPV 16/18感染與ki67、p53蛋白表達(dá)的關(guān)系〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2009,24(1):22.