林茂華 毛瑛玉 李 婷 蘇 謙 鄭建瑞

我們通過檢測CK19、HBME-1、CyclinD1、34βE12、TPO、galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌及腺瘤中的表達(dá)，以探討其對甲狀腺乳頭狀癌的診斷及鑒別診斷的價值。

1 材料與方法

1.1 材料

2012年8月至2013年1月福建醫(yī)科大學(xué)附屬寧德市閩東醫(yī)院收治的經(jīng)病理檢查確診的86 例甲狀腺乳頭狀癌和60 例甲狀腺濾泡性腺瘤。86例PTC年齡15～64歲，平均年齡27歲，女性65例，男性21例。60例FTA的年齡29～60歲，平均年齡44歲，女性48例，男性12例。分別進(jìn)行HE染色和免疫組織化學(xué)染色。

1.2 免疫組化染色

標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)10%中性緩沖福爾馬林液固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。免疫組化采用EnVision兩步法?？贵w購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，所用抗體為即用型，實驗步驟按說明書進(jìn)行，DAB顯色。選用腫瘤區(qū)域進(jìn)行CK19、HBME-1、CyclinD1、galectin-3、34βE12、TPO等抗體染色，選用同例非腫瘤區(qū)域甲狀腺組織作為內(nèi)對照。由兩位高職稱的病理醫(yī)師進(jìn)行鏡檢觀察。陽性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：CK19、34βE12均以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒為陽性染色，HBME-1以細(xì)胞胞膜著色為陽性，CyclinD1以細(xì)胞核著色為陽性，galectin-3、TPO以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)著色為陽性。高倍鏡(×400)下隨機(jī)選取10個視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，取平均值作為陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為陰性，11%～25%為(+)，26%～50%為(++)，>50%為(+++)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSSS12.0軟件包處理，采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 病理改變

甲狀腺乳頭狀癌光鏡下：腫瘤細(xì)胞呈細(xì)長、多分枝形態(tài)，被覆乳頭的濾泡上皮細(xì)胞肥大，核異型，具有核溝、核內(nèi)假包涵體，核重疊、極向紊亂，部分乳頭狀癌有毛玻璃狀核，間質(zhì)中偶可見砂粒體。濾泡性腺瘤60例中58例為常見的亞型，可見纖維性包膜，包膜外甲狀腺受壓萎縮，部分繼發(fā)出血、小囊形成、纖維組織增生及鈣化等，瘤細(xì)胞較一致，細(xì)胞無異型；另有2例為非典型腺瘤，瘤細(xì)胞呈立方、多邊形或不規(guī)則形，濾泡中出現(xiàn)非典型性巨細(xì)胞，瘤細(xì)胞排列呈片狀、巢狀或束狀，缺少完整的濾泡，包膜完整，經(jīng)過多處取材，均未見包膜或血管侵犯。

2.2 免疫組化結(jié)果

從表1及表2中可看出，86例PTC中80例(93.02%)CK19表達(dá)++～+++，60例FTA中48例(80.00%)表達(dá)++～+++，兩者比較,χ2=2.78(P>0.05)。86例PTC中80例(93.02%)CyclinD1表達(dá)++～+++；60例FTA中8例(13.33%)表達(dá)++～+++，其中1例為非典型腺瘤，χ2=46.87(P<0.01)。86例PTC中80例(93.02%)HBME-1表達(dá)++～+++。60例FTA中4例(6.66%)表達(dá)++～+++，包括1例非典型腺瘤，χ2=53.94(P<0.01)。86例PTC中78例(90.69%)34βE12表達(dá)++～+++；60例FTA中2例(3.33%)表達(dá)++～+++，χ2=54.45(P<0.01)。86例PTC中2例(2.33%)TPO 表達(dá)++～+++；60例FTA中54例(90.00%)表達(dá)++～+++，χ2=57.45(P<0.01)。86例PTC中20例(23.25%)galectin-3 表達(dá)++～+++;60例腺瘤中6例(10.00%)表達(dá)++～+++，χ2=2.12(P>0.05)。

表1 CK19、HBME-1、CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌及腺瘤組織中的表達(dá)情況/例

表2 galectin-3、34βE12、TPO在甲狀腺乳頭狀癌及腺瘤組織中的表達(dá)情況/例

3 討論

CK19主要定位于細(xì)胞質(zhì)，是中間絲蛋白家族。主要表達(dá)與單層上皮細(xì)胞，也散在表達(dá)于復(fù)層鱗狀上皮的基底層細(xì)胞。國內(nèi)外許多學(xué)者在多種癌中檢測到CK19表達(dá)，包括乳腺癌、甲狀腺乳頭狀癌、大腸癌、膀胱癌、肺鱗狀細(xì)胞癌等。有文獻(xiàn)[1]提出CK19在良性甲狀腺病灶中呈灶性表達(dá)，而在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，提示CK19可能參與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展過程。本研究顯示CK19在甲狀腺乳頭狀癌中強(qiáng)陽性表達(dá)率93.02%，在腺瘤中強(qiáng)陽性表達(dá)率為80.00%，兩者無明顯差異，對甲狀腺腺瘤與乳頭狀癌的鑒別診斷無幫助。

細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白 CyclinD1，作用于G1期，參與G0/G1期的轉(zhuǎn)換調(diào)控，是細(xì)胞周期重要的正性調(diào)控因子。有報道顯示，CyclinD1在多種腫瘤中均有表達(dá)，如非小細(xì)胞肺癌、胃癌、鱗狀細(xì)胞癌、卵巢癌等，并且認(rèn)為它與腫瘤的發(fā)生發(fā)展乃至預(yù)后都有密切關(guān)系。Khoo等[2]研究表明，CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中顯著過度表達(dá)，并與腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)。本研究顯示CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中強(qiáng)陽性表達(dá)率為93.02%，明顯高于甲狀腺腺瘤13.30%，表明CyclinD1表達(dá)與乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。

HBME-1是間皮瘤相關(guān)抗體，主要成分為酸性氨基多聚糖蛋白，這種抗體在大多數(shù)上皮型間皮瘤中呈強(qiáng)陽性細(xì)胞膜表達(dá)。在肺癌、胰腺癌、乳腺癌也可表達(dá)。有學(xué)者認(rèn)為HBME-1是甲狀腺乳頭狀癌較好的標(biāo)記[3]，并可用于淋巴結(jié)中良性甲狀腺組織與轉(zhuǎn)移性乳頭狀癌的識別。Ito等研究報道HBME-1在PTC陽性表達(dá)率達(dá)100%[4]。本組研究顯示在濾泡性腺瘤中HBME-1強(qiáng)陽性表達(dá)率為3.33%，余均為弱陽性或陰性，而在乳頭狀癌中強(qiáng)陽性表達(dá)率為95.60%，故HBME-1是甲狀腺乳頭狀癌較好的標(biāo)記，而且對良、惡性鑒別診斷亦有幫助。

34βE12與人角蛋白中間絲蛋白1、5、10和14反應(yīng)，表達(dá)于鱗狀上皮、導(dǎo)管上皮和其他復(fù)層上皮，是前列腺基底細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，還可鑒別乳腺導(dǎo)管及小葉上皮來源的腫瘤。目前應(yīng)用于甲狀腺乳頭狀癌的研究較少，趙麗華等[5]的研究示甲狀腺乳頭狀癌34βE12的陽性表達(dá)86.05%，顯著高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和橋本氏甲狀腺炎。本研究顯示34βE12在甲狀腺乳頭狀癌達(dá)90.69%，與CyclinD1及HBME-1結(jié)果相似，三者在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)特異性較高，聯(lián)合應(yīng)用效果更好。

TPO是甲狀腺激素合成通道中的重要物質(zhì)，在T3、T4合成中起重要催化作用。在正常甲狀腺及甲狀腺良性病變中高表達(dá)，而在甲狀腺惡性腫瘤中低表達(dá)。鄧敏等[6]研究示TPO在PTC的鑒別診斷中敏感性89.7%，特異性99.8%，準(zhǔn)確度達(dá)94%，在PTC與良性病變比較差異具有顯著性。陳云[7]在對甲狀腺結(jié)節(jié)性病變中甲狀腺過氧化物酶(TPO)mRNA表達(dá)的研究結(jié)果示良性病變組明顯高于惡性病變組(P<0.01)。本組結(jié)果顯示濾泡性腺瘤90%中等到強(qiáng)陽性，只有1例陰性；PTC強(qiáng)陽性僅2.33%。TPO在PTC與濾泡性腺瘤之間表達(dá)差異有顯著性。

Galectin-3是半乳糖凝集素家族中的一員，多數(shù)研究顯示galectin-3可作為甲狀腺惡性腫瘤的一個標(biāo)記。galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中有強(qiáng)表達(dá)，而在部分良性病變中也可灶性表達(dá)。僅部分研究提示不同的意見，Bernet等[8]研究發(fā)現(xiàn)GL-3mRNA在PTC與濾泡狀甲狀腺腺瘤及正常甲狀腺組織中表達(dá)的差異統(tǒng)計學(xué)意義不大。本研究galectin-3在甲狀腺癌強(qiáng)陽性僅23.25%，在腺瘤的強(qiáng)陽性表達(dá)10.00%，我們認(rèn)為galectin-3表達(dá)與PTC關(guān)系仍不十分清楚，對良惡性的鑒別無統(tǒng)計學(xué)差異。

本研究中2例非典型腺瘤，1例CyclinD1+++、HBME-1+++，是否提示有癌變的趨勢，有待探討。CK19在甲狀腺乳頭狀癌的表達(dá)率高但與腺瘤的表達(dá)無顯著差異。galectin-3表達(dá)與甲狀腺惡性腫瘤的的關(guān)系仍不明確。CyclinD1、HBME-1和34βE12表達(dá)具有較高的特異性，三者聯(lián)合應(yīng)用對甲狀腺乳頭狀癌的診斷及鑒別診斷具有較高的實用價值。TPO表達(dá)與CyclinD1、HBME-1和34βE12呈負(fù)相關(guān)，4種指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用再結(jié)合臨床及形態(tài)學(xué)有助于提高甲狀腺腫瘤的確診率。

[1] 鞏 雷，陳 萍，劉憲軍，等.D2-40，CK19，galectin-3，VEGF和EGFR在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國普通外科雜志,2011,20(11):1203.

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[5] 趙麗華，林 競，石 柏，等.P53，Ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12，CK19在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，32(10):1202.

[6] 鄧 敏，葉顧萍，馬建中，等.甲狀腺乳頭狀癌中CK19、Galectin-3、HBME-1和TPO的表達(dá)及意義〔J〕.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2011,27(8):843.

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