王 元，杜久斌，范紅燕，賀 筍，劉宏杰*,蘇曉月，沈亞安，張會萍

（1.新疆天康食品養(yǎng)殖事業(yè)部技術(shù)中心，新疆 昌吉 831100；2.巴音郭楞職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆 庫爾勒 841000；3.瑪納斯縣蘭州灣獸醫(yī)站，新疆 瑪納斯 832201）

豬病毒性腹瀉是由病毒引起的急性消化道傳染病，該病主要由豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬輪狀病毒(RV)等單一或混合感染[1-2]。目前，有報(bào)道稱庫伯病毒(Kubovirus)也可感染導(dǎo)致類似臨床癥狀[3-4]。2011 年11 月—2012 年12 月，新疆部分規(guī)?；i場10 日齡以內(nèi)仔豬發(fā)生以急性腹瀉為主要病癥的傳染病,傳播迅速,發(fā)病率高，造成了較嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。為查明發(fā)生該病的流行情況，并制定快速、有效的防控措施控制疫情，我們對新疆部分規(guī)?；i場進(jìn)行了該病的流行病學(xué)和病原學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 調(diào)查豬場

新疆南疆 4 個(gè)發(fā)病豬場，北疆 6 個(gè)發(fā)病豬場。

1.1.2 病料采集與處理

共采集259 份腸及內(nèi)容物和糞便樣品。取1 mL 小腸研磨上清液或腹瀉糞便上清液樣品置1.5 mL 離心管中，8 000 r/min 離 心2 min , 吸 取 上 清 放置-20 ℃保存。

1.1.3 引物

根據(jù)GeneBank 上公布的TGEV、PEDV、RV、 Kubovirus 序 列， 應(yīng) 用Primer5.0 軟件設(shè)計(jì)了4 對特異性引物，其目的基因分別為548 bp 、1 592 bp、314 bp、967 bp，均由上海生工生物工程有限公司合成。

1.1.4 試劑

Totoal RNA 提取盒購自大連寶生物Mini Viral RNA/DNA Extraction Kit，Taq 酶、dNTP Mixture、AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNase Inhibitor 及DNA 標(biāo)準(zhǔn)DL 2000 購自寶生物(大連)工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 流行病學(xué)調(diào)查

對調(diào)查豬場的豬病毒性腹瀉流行情況進(jìn)行了現(xiàn)場調(diào)查,臨床病例檢查及病理剖檢。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)室檢測

10 家調(diào)查豬場送檢的259 份臨床病料分別進(jìn)行了TGEV、 PEDV、RV、 Kubovirus 的RT-PCR 檢測。

1.2.3 動物試驗(yàn)

取6 頭未吃初乳仔豬，試驗(yàn)組4 頭口服4 mL 病料上清液，對照組2 頭口服生理鹽水。觀察仔豬的臨床癥狀，連續(xù)觀察3 d。

2 結(jié)果

2.1 豬病毒性腹瀉流行病學(xué)調(diào)查

本病主要發(fā)生于規(guī)模化豬場，無明顯季節(jié)性，發(fā)病豬多為10 日齡以內(nèi)，表現(xiàn)嘔吐、水樣腹瀉、病程持續(xù)1～3 d，發(fā)病豬最終嚴(yán)重脫水死亡（見圖1）。剖檢癥狀為胃內(nèi)積聚大量白色乳糜，小腸腸壁變薄、充血，其他臟器未發(fā)現(xiàn)明顯病理變化（見圖2）。

圖1 仔豬嘔吐、腹瀉物

圖2 腸絨毛脫落，腸壁變薄，腸出血

2.2 實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果

RT-PCR檢測259份臨床病料，檢出PEDV 陽性163 份，Kubovirus 陽性97 份，PEDV 、Kubovirus 混 合 感染96 份。

2.3 動物試驗(yàn)

攻毒后24 h 出現(xiàn)腹瀉、嘔吐等典型臨床癥狀，持續(xù)48～72 h 后4 頭試驗(yàn)仔豬全部脫水死亡，2 頭對照仔豬均未出現(xiàn)上述癥狀。

3 討論

通過對南北疆10 家規(guī)模化豬場流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀觀察以及臨床病理剖檢，初步診斷發(fā)病豬是病毒性腹瀉。后經(jīng)實(shí)驗(yàn)室對病料的檢測，送檢的259份臨床病料中有163 份PEDV 陽性，17份Kubovirus 陽性；TGEV 、RV 均為陰性。PEDV 陽性場有6 個(gè)，Kubo 病毒陽性場2 個(gè)。結(jié)果表明，此次引起新疆部分規(guī)?；i場10 日齡以內(nèi)仔豬腹瀉脫水死亡的主要致病因是PEDV 和Kubovirus,未檢出TGE、RV。

在免疫程序的調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)受調(diào)查豬場均免疫了傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)滅活苗，但對此次病毒性腹瀉感染幾乎不能有效預(yù)防。分析原因，主要有：1）通過實(shí)驗(yàn)室檢測已經(jīng)證實(shí)主要由PEDV 和Kubovirus 混合感染引起發(fā)病，而商品化疫苗不能保護(hù)Kubovirus的感染；2）已有國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道[5]稱我國PEDV 發(fā)生了變異，與商品疫苗中傳統(tǒng)PEDV 毒株存在抗原差異，不能保護(hù)目前流行毒株，因此造成該病的暴發(fā)。

通過對發(fā)病全過程的跟蹤調(diào)查，此次腹瀉疫情呈階段性流行，一波流行結(jié)束2～3 個(gè)月后又會暴發(fā)，呈持續(xù)流行。原因有：1）規(guī)?；i場不斷產(chǎn)仔，病毒持續(xù)感染，造成了腹瀉的持續(xù)流行。2）發(fā)過病的基礎(chǔ)母豬經(jīng)過一個(gè)生產(chǎn)周期或一段時(shí)間（主要取決于場內(nèi)腹瀉病毒載量），自然感染產(chǎn)生的抗體會慢慢降低，當(dāng)不能抵抗腹瀉病毒的感染時(shí)，新一輪的腹瀉又開始流行。

綜上所述，提出以下防控措施：1）對發(fā)病場的產(chǎn)房進(jìn)行封閉隔離管理；未發(fā)病豬場要嚴(yán)格執(zhí)行生物安全制度，并控制人員和運(yùn)輸車輛的隨意進(jìn)出[6]。2）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，控制圈舍溫度和保持圈舍衛(wèi)生和干燥，不給病毒創(chuàng)造利于生存和繁殖的條件；3）有條件的規(guī)模豬場可免疫滅活自家苗，使哺乳母豬的腹瀉病毒抗體能夠保護(hù)至仔豬斷奶；4）對發(fā)病仔豬進(jìn)行補(bǔ)液鹽口服，并預(yù)防繼發(fā)大腸桿菌感染引起細(xì)菌性腹瀉；5）避免給母豬飼喂發(fā)霉飼料，防止霉菌毒素中毒；6）徹底清洗、消毒空圈舍，并留一定的時(shí)間使圈舍徹底干燥；7）母豬上產(chǎn)床前進(jìn)行適當(dāng)?shù)那逑矗绕涮悴考S便要清洗干凈。

[1] 林初文,莊金秋,謝印乾.我國主要豬病毒性腹瀉疾病的特點(diǎn)及其防治對策[J].中國畜牧獸醫(yī),2007,34(5):121-123.

[2] 和平，田建云，周宏生，等.豬病毒性腹瀉病的防治措施[J].云南畜牧獸醫(yī),2007(4):9-10.

[3] 沈素芳,湯賽冬,孫泉云.豬Kobu 病毒感染概況[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2012,33(1)：115-116.

[4] 楊德全，葛菲菲，鞠厚斌. 嵴病毒(Kobuvirus)研究進(jìn)展[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012(12): 1006-1009.

[5] 劉孝珍,陳建飛,時(shí)洪艷,等.2011 年豬流行性腹瀉病毒的遺傳變異分析[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2012，34(3)：180-183.

[6] 衛(wèi)秀余.關(guān)于“豬流行性腹瀉”的一些認(rèn)識誤區(qū)[J].豬業(yè)科學(xué) 2012，(4)：132.