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        人乳頭瘤病毒基因型在宮頸細(xì)胞病變中的分布

        2013-11-20 11:41:24陳志新陳建森
        中國人獸共患病學(xué)報 2013年1期
        關(guān)鍵詞:感染率分型婦女

        陳志新,陳建森

        宮頸癌目前仍是婦科最常見的惡性腫瘤之一,定期進行宮頸癌篩查,及早發(fā)現(xiàn)和治療是降低宮頸癌發(fā)病率、減少死亡率的重要手段。業(yè)已證實人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)持續(xù)感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宮頸癌的主要病因,隨著HPV感染與宮頸癌病因關(guān)系的明確,HPV-DNA及其基因分型檢測越來越受到重視[1]。HPV檢測聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢查應(yīng)用于宮頸癌及癌前病變的篩查,為有效地預(yù)防宮頸癌的重要方法之一[2-3]。本研究采用 PCR-膜斑點雜交法對1 591例女性子宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本進行HPV-DNA分型檢測和液基薄層細(xì)胞學(xué)(thinprep cytology test,TCT)檢測,旨在探討 HPV感染狀況、型別分布及其與子宮頸細(xì)胞學(xué)異常和年齡的關(guān)系,并評價PCR-膜斑點雜交法檢測HPV對宮頸病變的臨床診斷性能,現(xiàn)報道如下

        1 材料與方法

        1.1 一般資料 2011年1月至2012年6月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院門診接受宮頸細(xì)胞涂片檢查者2020例中選取1 591例,年齡20~74歲,平均年齡38.1歲,全部入院對象均無妊娠、子宮切除及子宮頸手術(shù)史者,分別進行HPV基因分型和TCT檢查。

        1.2 主要儀器和試劑 HPV基因分型試劑采用凱普生物科技公司的21種人乳頭狀瘤病毒分型檢測試劑盒及其配套的醫(yī)用核酸分子快速雜交儀(HHM-2),PCR擴增采用美國BIO-RAD PTC-200 PCR儀。

        1.3 檢測方法 用宮頸脫落細(xì)胞采樣刷按要求采集宮頸脫落細(xì)胞,置細(xì)胞保存液中-20。C以下保存,1周內(nèi)用常規(guī)堿裂解法提取DNA。采用PCR-膜雜交法進行HPV-DNA PCR擴增及其分型檢測,PCR擴增HPV-DNA,擴增產(chǎn)物分型檢測和結(jié)果判讀等按HPV基因分型試劑盒說明書進行,該試劑盒可同時檢測21種 HPV基因型別,包括 HPV6、11、42、43、44和 CP8304等5種低危型別(low risk HPV,LR-HPV),HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68 等16種高危型別(high risk HPV,HR-HPV)。TCT 檢查由我院病理科按TBS分類法進行診斷。即正常范圍(within normal limits,WNL);不明意義的非典型鱗狀細(xì)胞(atypical squamous cells of undetermined significance,ASCUS);低度鱗狀上皮內(nèi)增生(low grades squamous intraepithelial lesion,LSIL)和高度鱗狀上皮內(nèi)增生(high grades squamous intraepithelial lesion,HSIL)。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)分析應(yīng)用SAS 6.12軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析,計數(shù)資料采用χ2檢驗,多組級聯(lián)相關(guān)資料采用Wilcoxon秩和檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié) 果

        2.1 HPV感染及其型別分布 1 591例女性中檢出HPV陽性619例,感染率為38.90%,其中受感染者中HR-HPV陽性469例,感染率為29.47%;LR-HPV陽性87例,感染率為5.47%;HR-HPV和LR-HPV混合感染陽性63例,混合感染率為3.96%。

        除HPV43型別外,其余20種HPV型別均被檢出,按單一型別檢出率高低分別為HPV16、52、58、CP8304、33、53、18、31、11、68、66、6、39、56、HPV35、59、44、45、42和51。

        單一型別HPV感染459例,感染率為28.85%;2個型別HPV混合感染128例,感染率為8.05%;3型別 HPV混合感染23例,感染率為1.45%;4個型別以上 HPV感染9例,感染率為0.57%。

        2.2 HPV感染與宮頸病變程度的關(guān)系 在338例TCT檢出子宮頸病變的女性中HPV感染率為68.64%,HR-HPV 感染率為63.02%,二者其在ASCUS、LSIL和HSIL中感染率均隨著宮頸病變級別遞增而升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.46,P<0.05),見表1。用 Wilcoxon秩和檢驗分析HPV和HR-HPV感染與宮頸疾病級別之間的關(guān)系,結(jié)果表明HPV和HR-HPV感染率在不同宮頸疾病組中具有顯著差異(χ2=22.42,P<0.01);除HPV51外,HR-HPV其它型別在不同宮頸疾病組中具有極顯著差異(χ2=18.60,P<0.01);除HPVCP8304外,其它型別LR-HPV在不同宮頸疾病組中無顯著差異(χ2=2.44,P>0.05)。

        表1 HPV感染與宮頸病變程度的關(guān)系[n(%)]Tab.1 The prevalence of HPV infection among the different cervical lesions

        2.3 HPV感染與年齡的關(guān)系 將患者按年齡分成≤40歲和>40歲兩組,經(jīng)Wilcoxon秩和檢驗,結(jié)果表明年齡分組在不同疾病組具有顯著差異(χ2=20.46,P<0.01),即隨著年齡的增加 HPV感染罹患宮頸相關(guān)疾病的機會大大增加。經(jīng)χ2檢驗,表明年齡分組與HR-HPV和LR-HPV感染亦具有顯著的差異(χ2=13.69,P<0.01和χ2=4.98,P<0.05),即年齡≤40歲婦女 HR-HPV 和 LR-HPV感染的機率高于年齡>40歲婦女(表2,3)。

        表2 不同年齡組婦女HR-HPV感染率的比較Tab.2 Comparison of the prevalence HR-HPV in women at different age groups

        表3 不同年齡組婦女LR-HPV感染率的比較Tab.3 Comparison of the prevalence LR-HPV in women at different age groups

        3 討 論

        HPV是一類具有高度組織和宿主特異性的嗜上皮細(xì)胞病毒,在自然界廣泛存在可致人類皮膚和黏膜異常增生,引起宿主組織疣狀病變及乳頭狀瘤病變。HPV具有多種型別,不同型別感染對子宮頸上皮的致病力不同。隨著HPV感染與宮頸癌病因關(guān)系的明確,HPV-DNA及其基因分型檢測越來越受到重視[4-6]。歐洲生殖道感染和腫瘤組織(EUROGIN)提出的宮頸癌篩查方案中優(yōu)先推薦 HPV基因檢測作為宮頸癌篩查的首選方法[7];美國陰道鏡和宮頸病理學(xué)會(ASCCP)發(fā)布的《子宮頸癌篩查異常婦女處理共識指南》亦明確指出30歲以上的婦女應(yīng)進行HPV基因分型檢測[8]。

        本研究采用PCR-膜斑點雜交法對1 591例標(biāo)本進行HPV基因分型,結(jié)果顯示HPV總感染率為38.90%,與國內(nèi)相關(guān)文獻報道結(jié)果基本一致[3,7-8]。除HPV43亞型外,其余20種HPV型別均被檢出,其中感染居前5位的基因型分別是HPV16、52、58、CP8304和33,除HPV16外,其余型別分布與國內(nèi)外報道有所不同。其原因可能與地域差異、研究對象和檢測方法等不同有關(guān)[9]。HPV16是各地最為常見的感染型別,一項多中心的研究中 HPV16在所有HPV陽性的子宮頸癌患者的平均感染率為57.4%,本研究HPV16檢出率亦最高。CP8304通常被認(rèn)為是與宮頸細(xì)胞病變發(fā)生關(guān)系不大的低危型[10],然而本研究CP8304感染率居第四位,秩和檢驗表明其與宮頸疾病的進展密切相關(guān)(P<0.001),與部分學(xué)者認(rèn)為CP8304與宮頸疾病發(fā)生發(fā)展具有較密切的結(jié)論一致[1],因而CP8304可作為中國婦女HPV感染的獨立危險因素之一。除HPV51外,其它型別HR-HPV在LSIL以上病變中均有一定優(yōu)勢,提示HR-HPV具有較高的致癌性,因此臨床上在制定相應(yīng)的治療方案時應(yīng)加以注意。因而,為消除地域差異,方法不同造成的結(jié)果不同,需進一步加強多中心合作并擴大研究范圍以明確HPV感染型別與宮頸疾病之間的關(guān)系。

        HPV感染可發(fā)生于各年齡組,年齡是感染和子宮頸癌發(fā)生的相關(guān)因素,有研究表明年輕婦女更易感染高危型,進而發(fā)展為子宮頸癌且預(yù)后較差。本研究結(jié)果顯示不論HPV總感染率或是HR-HPV和LR-HPV感染率均在40歲以下婦女均高于40歲以上的年長婦女,與文獻報道[11]亞洲國家不同年齡婦女感染HPV較為一致,其原因可能是40歲以下婦女處于性活躍期,特別是性工作者,不同HPV基因型別的多重感染較為常見,因而可間接證實HPV可通過性接觸而傳播。而與歐美國家和非洲國家婦女HPV感染呈“U”字型分布不同[12],其原因可能與地域差別,人種和文化傳統(tǒng)等不同有關(guān)。另一方面,本研究結(jié)果表明40歲以上婦女HPV感染罹患宮頸相關(guān)疾病的機會顯著高于40歲以下婦女,表明HPV的持續(xù)感染是宮頸病變發(fā)生的必要條件。

        總之,本研究采用PCR-膜雜交法檢測宮頸HPV感染,具有較高的敏感性和特異性,婦女感染HR-HPV能較好地反映宮頸病變的風(fēng)險,從而為防治宮頸癌的發(fā)生提供一種良好的篩查手段。

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