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        兒童馬爾尼菲青霉感染1例

        2013-11-19 02:53:58李勝濤徐桂珍史文元郴州市第一人民醫(yī)院兒童醫(yī)院檢驗科湖南郴州423000
        檢驗醫(yī)學與臨床 2013年11期
        關鍵詞:涂片菌體革蘭

        李勝濤,徐桂珍,史文元(郴州市第一人民醫(yī)院/兒童醫(yī)院檢驗科,湖南郴州 423000)

        馬爾尼菲青霉?。≒SM)由馬爾尼菲青霉(PM)感染所致。PM 作為一種少見的真菌,主要流行于東南亞和國內(nèi)廣東、廣西地區(qū),多分離自艾滋病患者。人體感染PM 后無明顯特殊癥狀,但病情發(fā)展快,若不及時治療,病死率較高。筆者從1例兒童患者中檢出PM,現(xiàn)報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 男性患兒,3歲,因“反復發(fā)熱1個月,咳嗽10 d,體溫最高達42.0 ℃”入院,入院查體:體溫39.3 ℃,心率180次/分,呼吸60次/分,體質(zhì)量10kg,神志清醒,精神反應差,皮膚黏膜稍蒼白,皮膚未見明顯黃染,無明顯出血點,頸部可捫及黃豆大小淋巴結(jié),質(zhì)軟,可移動,無觸痛,無粘連,肝肋下約4cm處可捫及,質(zhì)地較硬,脾肋下未捫及,未捫及明顯包塊,腸鳴音尚可,臀部可見瘀斑,四肢肌張力正常,肢體末端暖,足背動脈搏動有力。血常規(guī)檢查:白細胞2.60×109/L,中性粒細胞70.4%,淋巴細胞24.6%,血紅蛋白67g/L,血小板25×109/L,總蛋白52.5g/L,清蛋白24.1g/L,球蛋白28.4g/L,清蛋白、球蛋白比值0.8,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶20.1U/L,天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶219.6U/L,超敏C反應蛋白83mg/L,紅細胞沉降率38mm/h,人類免疫缺陷病毒初篩試驗提示可能為陽性,但尚未得到本地區(qū)疾病預防與控制中心的證實。

        1.2 方法 采集患兒靜脈血3mL,注入兒童專用血培養(yǎng)瓶(美國BD)及真菌血培養(yǎng)專用瓶(湖南天地人),采用Bact/Alert-3D240血培養(yǎng)儀進行培養(yǎng),待其生長后移種于沙氏平板、哥倫比亞血瓊脂平板各2份,分別于25、35℃進行培養(yǎng),挑取單克隆菌落片,革蘭染色后鏡檢。同時采集患兒骨髓標本,制備血涂片及骨髓涂片標本,瑞氏及糖原染色后鏡檢。

        2 結(jié) 果

        2.1 血涂片瑞氏染色 三系細胞明顯減少,中性粒細胞及單核細胞內(nèi)可見吞噬的圓形菌體,菌體中間有隔橫將其分成2段,兩端鈍圓(見圖1)。

        圖1 血涂片瑞氏染色(指針所示為PM 菌體)

        2.2 骨髓片瑞氏染色 中性粒細胞可見吞噬的菌體,形態(tài)與血涂片鏡檢結(jié)果類似(見圖2)。

        圖2 骨髓片瑞氏染色(指針所示為PM 菌體)

        2.3 骨髓片糖原染色 可見糖原染色陽性菌體,中間有紅色間隔(見圖3)。

        圖3 骨髓片糖原染色(指針所示菌體中央有一紅色橫隔)

        2.4 普通血培養(yǎng)標本檢測 普通血培養(yǎng)標本涂片染色未見與血涂片一致的菌體,可見大量革蘭陰性桿菌。

        圖4 35℃真菌培養(yǎng)染色(革蘭陰性粗大臘腸樣有間隔的桿菌)

        圖5 25℃真菌培養(yǎng)(真菌相產(chǎn)生紅色色素滲入平板

        圖6 35℃真菌培養(yǎng)染色(革蘭陰性掃帚狀,孢子近似球形)

        2.5 真菌血培養(yǎng)標本檢測 真菌血培養(yǎng)標本轉(zhuǎn)種平板,35℃培養(yǎng)24h后沙氏平板、哥倫比亞血瓊脂平板上均可見灰褐色菌落,表面突起呈腦回狀,染色后可見革蘭陰性臘腸樣粗大菌絲(見圖4)。25℃培養(yǎng)后可見真菌樣菌落,菌落最初呈淺灰褐色,膜樣,中央可見白色絨毛狀氣生菌絲呈,向周圍擴展,逐漸呈微紅灰青色,4d后可見菌落周圍有紅色色素滲入沙氏平板(見圖5),涂片染色鏡檢可見革蘭陰性的分枝、分隔、無色透明菌絲,分生孢子梗光滑,部分菌絲有帚狀枝生成,頂端可見單鏈分生孢子(見圖6)。

        3 討 論

        PM 最早分離自野生中華竹鼠的肝臟,是青霉菌屬中已知的惟一雙相型真菌,易感者主要是免疫力低下者及艾滋病患者[1]。PM 的主要特征是具有雙相性,在自然界以菌絲形式存在,在組織中則可形成小的圓形或橢圓形細胞。PM 感染患者常合并多重感染,所以采取不同的培養(yǎng)方式可有效補充單一檢測方法的缺陷。本例患兒普通血培養(yǎng)標本涂片染色為檢出PM,可能與其他細菌生長速度大大超過PM,導致PM 生長受抑有關。真菌血培養(yǎng)則有利于PM 的生長和檢出。真菌培養(yǎng)是診斷PMS的金標準。PM 作為雙相性致病真菌,其雙相性轉(zhuǎn)變呈溫度依賴性,25 ℃時呈菌絲相生長,37 ℃時呈酵母相生長。沙氏培養(yǎng)基25℃培養(yǎng)2~3d可見淡黃色絨狀菌落,并產(chǎn)生紅色色素滲入平板。多種其他檢測方法的應用有助于PSM 的早期診斷,包括血清學檢測及基于PM 58S、18SrRNA和特殊寡聚核苷酸引物的分子診斷技術,但目前尚未廣泛應用于臨床[2-3]。

        人體主要通過細胞免疫清除經(jīng)呼吸道或消化道感染的PM,但艾滋病患者因CD4+細胞數(shù)量減少,無法經(jīng)細胞免疫將其清除,極易因全身感染而死亡。PSM 如未得到及時診治,患者病死率高達91.3%[4]。早期使用敏感的抗真菌藥物進行治療,PSM 可被治愈。然而,關于PSM 的治療方案尚無統(tǒng)一意見。國內(nèi)多聯(lián)合應用兩性霉素B和伊曲康唑治療嚴重感染患者,對中度感染患者多單用伊曲康唑或酮康唑,治愈后應長期口服伊曲康唑維持治療,并在整個療程中同時采用免疫輔助治療[5]。艾滋病患者應同時行高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療[6]。

        PM 感染所致PSM 好發(fā)于免疫功能受損者,特別是艾滋病患者。由于艾滋病患者不斷增多,PM 感染者亦呈增多趨勢。因此,對PM 進行深入研究并探索合理的治療方案,在PSM 診治方面具有十分重要的意義。

        [1]Vanittanakom N.Penicillium marneffei infection and recent advances in the epidemiology and molecular biology aspects[J].Clin Microbiol Rev,2006,19(1):95-110.

        [2]Desakorn V.Development and evaluation of rapid urinary antigen detection tests for diagnosis of penicilliosis marneffei[J].J Clin Microbiol,2002,40(9):3179-3183.

        [3]Thirach S,Cooper CR,Vanittanakom N.Molecular analysis of the Penicillium marneffei glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase-encoding gene(gpdA)and differential expression of gpdA and the isocitrate lyase-encoding gene(acuD)upon internalization by murine macrophages[J].J Med Microbiol,2008,57(11):1322-1328.

        [4]Cooper CR,McGinnis MR.Pathology of Penicillium marneffei.An emerging acquired immunodeficiency syndrome-related pathogen[J].Arch Pathol Lab Med,1997,121(8):798-804.

        [5]Fisher MC,Akom NV.A highly discriminatory multilocus microsatellite typing(MLMT)system for Penicillium marneffei[J].Mol Ecol Notes,2004,4(3):515-518.

        [6]李凌華,唐小平,蔡衛(wèi)平.101例艾滋病合并馬爾尼菲青霉病的臨床研究[J].中國艾滋病性病,2008,14(1):12-15.

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