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        健脾益腸散對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的作用研究*

        2013-11-12 07:20:26劉杰民藺曉源紀(jì)云西
        中國中醫(yī)急癥 2013年3期
        關(guān)鍵詞:吡啶低劑量健脾

        劉杰民 藺曉源 王 敏 紀(jì)云西

        (1.貴州省人民醫(yī)院,貴州 貴陽 550002;2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,湖南 長沙 410007;3.貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,貴州 貴陽 550001;4.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,廣西南寧 530023)

        潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種發(fā)病機制尚未完全明了的非特異性炎癥性腸病,病情輕重不等,多呈反復(fù)發(fā)作。近年來UC 發(fā)病率呈逐年上升趨勢,其治愈難度大,并有癌變傾向,已被世界衛(wèi)生組織(WHO)列為現(xiàn)代難治病之一[1]。健脾益腸散是貴州省名老中醫(yī)董菲洛教授的經(jīng)驗方,前期臨床研究表明健脾益腸散治療UC 可有效緩解臨床癥狀,其機制之一可能是通過改善機體的免疫功能而發(fā)揮療效[2]。本研究觀察健脾益腸散對實驗性UC 模型大鼠的影響,以進(jìn)一步探討健脾益腸散的作用機制。

        1 材料與方法

        1.1 動物 SPF 級健康雄性SD 大鼠60 只,體質(zhì)量(200±20)g,由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司提供,動物許可證號:SCXK(湘)2009-004。

        1.2 藥物 健脾益腸散,組方:黃芪、太子參各15 g,焦白術(shù)、茯苓、芡實各12 g,敗醬草30 g,木香、白豆蔻、炙甘草各6 g,補骨脂20 g。藥材購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)林藥號,按傳統(tǒng)方法煎煮熬制,濃縮至每毫升含15、10、5 g 生藥的藥液,放入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩A沁拎つc溶片(維柳芬,上海中西三維藥業(yè)有限公司,國藥準(zhǔn)字:H31020450,批號:20120519,規(guī)格:0.25 g/片),用蒸餾水配制成22.1 mg/mL的藥液備用。

        1.3 試劑與儀器 2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS,Sigma公司,批號:111M5001V,規(guī)格:10 mL,5%)由上海寶曼生物科技有限公司代購;無水乙醇(天津市大茂化學(xué)試劑廠,批號:2011120)。FA 型電子天平(上海臺之衡電子衡器有限公司);SZ-93 自動雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)。

        1.4 分組與造模 將60 只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后,隨機選取10 只作為正常組,其余大鼠參考文獻(xiàn)[3]造模。禁食不禁水24 h,10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉,用大鼠直灌胃針從肛門插入腸道約8 cm,用2 mL 注射器以4 mL/kg(相當(dāng)于TNBS 100 mg/kg)劑量緩慢(1 min)注入造模劑(5%TNBS 與50%乙醇以1∶1體積配成的混合液),提起大鼠尾部持續(xù)倒置5 min,然后使大鼠頭部傾斜向下躺至自然清醒,自由飲食。正常組注入等量的生理鹽水。2~3 d 出現(xiàn)黏液膿血便即為模型復(fù)制成功。將造模成功的大鼠隨機分為模型組、健脾益腸散高、中、低劑量組及柳氮磺吡啶組,每組10 只。

        1.5 給藥方法 造模第3日起開始灌胃給藥。健脾益腸散高、中、低劑量組大鼠每日根據(jù)臨床等效劑量的15、10、5 倍(204、136、68 g/kg)給藥,柳氮磺吡啶組每只給予劑量為0.3 g/(kg·d)的柳氮磺吡啶溶液,模型組給予等體積量蒸餾水13.6 mL/(kg·d)灌胃,正常組常規(guī)飼養(yǎng),連續(xù)21 d。

        1.6 觀察指標(biāo)

        1.6.1 一般情況和疾病活動指數(shù)(DAI)自造模后每日觀察各組大鼠精神狀態(tài)、毛發(fā)狀態(tài)、飲水量、進(jìn)食量等一般情況。記錄大鼠體質(zhì)量下降情況、大便性狀和便血(大便潛血檢測試紙法)情況,參考文獻(xiàn)[4]按表1 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行DAI 積分評定。DAI=(體質(zhì)量下降分?jǐn)?shù)+大便性狀分?jǐn)?shù)+便血分?jǐn)?shù))/3。

        表1 DAI 評分標(biāo)準(zhǔn)

        1.6.2 結(jié)腸組織損傷程度評分(CMDI)灌胃結(jié)束后處死大鼠,將距肛門10 cm 長末端結(jié)腸取出,沿腸系膜縱行切開,用生理鹽水漂洗。將黏膜向上展開,肉眼觀察結(jié)腸組織缺損、皺襞排列、黏膜色澤、充血水腫、糜爛、潰瘍等情況。并參考文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)[5]評價CMDI。0 分:無損傷。l 分:輕度充血、水腫,表面光滑,無糜爛或潰瘍。2 分:充血水腫,黏膜粗糙呈顆粒狀,有糜爛或腸粘連。3 分:高度充血水腫,黏膜表面有壞死及潰瘍形成,潰瘍最大縱徑<1 cm,腸壁增厚或表面有壞死及炎癥。4分:在3 分基礎(chǔ)上潰瘍最大縱徑1 cm,或全腸壁壞死。

        1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以表示,組間比較采用t 檢驗和單因素方差分析。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 各組大鼠一般情況和DAI 評分情況 見表2。正常組大鼠活動如常,毛光色澤,反應(yīng)敏捷,飲食正常,體質(zhì)量增長,大便呈顆粒狀;模型組大鼠開始即見精神萎靡,毛發(fā)蓬松無澤、飲食減少、體質(zhì)量下降、肛周污穢、臭穢難聞、陰囊下垂,均出現(xiàn)不同程度的腹瀉、黏液便、膿血便,2 周后逐漸有所好轉(zhuǎn),糞便質(zhì)稀不成形一直持續(xù)至實驗結(jié)束。模型組死亡2 只,其中1 只腹部脹大如球,未見排便,另1 只死因不明。健脾益腸散高、中劑量組,柳氮磺吡啶組經(jīng)用藥后約l 周時間癥狀即有不同程度的緩解,飲食逐漸增多,體質(zhì)量恢復(fù),便血例數(shù)逐漸減少;2 周后黏液血便明顯減少,糞便成形。健脾益腸散中、低劑量組、柳氮磺吡啶組各死亡1 只,其中健脾益腸散中劑量組因灌胃不當(dāng)死亡,余死因不明。模型組DAI 評分顯著高于正常組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);健脾益腸散高、中劑量組和柳氮磺吡啶組DAI評分均較模型組明顯降低(P<0.05 或0.01);健脾益腸散高劑量組與中劑量組、柳氮磺吡啶組差異不顯著(P>0.05),但明顯優(yōu)于健脾益腸散低劑量組(P<0.05)。

        表2 各組大鼠DAI 評分、結(jié)腸CMDI 比較(分,±s)

        表2 各組大鼠DAI 評分、結(jié)腸CMDI 比較(分,±s)

        與正常組比較,*P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01;與健脾益腸散高劑量組比較,▲P<0.05。

        2.2 各組大鼠結(jié)腸CMDI 比較 見表2。結(jié)腸組織肉眼觀正常組結(jié)腸黏膜表面光滑,黏膜皺襞清晰完整,未見糜爛及潰瘍。模型組大鼠結(jié)腸黏膜可見充血、水腫及潰瘍形成。健脾益腸散低劑量組也可見少量潰瘍點,仍有較明顯的充血水腫。健脾益腸散高劑量組和柳氮磺吡啶組潰瘍較少并可見已愈合的潰瘍組織,組織水腫和充血明顯減輕。模型組大鼠結(jié)腸CMDI 明顯高于正常組,差異顯著(P<0.01);健脾益腸散高劑量組和柳氮磺吡啶組CMDI 均較模型組下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);健脾益腸散高劑量組與柳氮磺吡啶組差異不顯著(P>0.05),但明顯優(yōu)于健脾益腸散中、低劑量組(P<0.05)。

        3 討論

        UC 屬中醫(yī)學(xué)“腸辟”、“休息痢”等病的范疇,本病以脾氣虧虛為本,氣滯、血瘀、濕熱為標(biāo)。脾氣虛弱,無力防衛(wèi)邪氣侵犯,邪留腸間,氣滯、血瘀、濕熱諸邪,腐膜化膿為瘍。病程日久,傷及腎元而病難愈。如《景岳全書》中所說“病里急后重者,病在廣腸最下處,其病本不在廣腸而在脾腎”。治療當(dāng)以扶正祛邪、標(biāo)本同治。董菲洛教授深諳其理,自擬健脾益腸散治療本病,臨床應(yīng)用30 余年,取得了滿意療效。健脾益腸散方用黃芪、太子參、焦白術(shù)、茯苓、芡實、甘草重在健脾益氣,資助衛(wèi)氣,防御外邪,平衡免疫;木香健脾行氣、和血止痛;白豆蔻化濕行氣;敗醬草祛除濕熱;用補骨脂培腎,使脾壯有源。諸藥并用,扶正御邪,標(biāo)本同治。

        TNBS/乙醇復(fù)合灌腸法制作大鼠UC 模型簡單,致炎效果好、造模時間短、病變持續(xù)時間長(可達(dá)8 周),模型的病理組織學(xué)改變等諸多特點與人類炎癥性腸病相似,也比較符合人類UC 發(fā)生的免疫學(xué)機制[6]。因此,本研究采取此種UC 動物模型。實驗結(jié)果顯示,模型組大鼠神態(tài)萎靡、飲食減少、出現(xiàn)黏液膿血便等,結(jié)腸黏膜可見充血、水腫及潰瘍形成,DAI 評分和CMDI 與正常對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。給予健脾益腸散治療后,其高、中劑量組和柳氮磺吡啶組大鼠一般情況均明顯改善,DAI 評分降低,說明健脾益腸散高、中劑量和柳氮磺吡啶均能有效改善UC 大鼠體質(zhì)量下降、大便性狀和便血情況,且健脾益腸散高劑量優(yōu)于其低劑量,而與柳氮磺吡啶療效無差別。健脾益腸散高劑量組和柳氮磺吡啶組CMDI 均較模型組下降,表明其能有效減輕大鼠結(jié)腸黏膜充血、水腫及潰瘍形成,促進(jìn)結(jié)腸黏膜糜爛和潰瘍愈合。且健脾益腸散高劑量組明顯優(yōu)于中、低劑量組,說明藥物劑量與效果之間有一定相關(guān)性,以健脾益腸散高劑量組效果最佳。同時結(jié)合大鼠一般狀況和DAI 評分結(jié)果,表明健脾益腸散可通過促進(jìn)結(jié)腸黏膜修復(fù),對UC 模型大鼠有較好的治療作用。其作用機制以及健脾益腸散對于免疫炎癥因子的影響如何,還有待于下一步探討。

        [1]陳曉,王啟之.Toll 樣受體4的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與潰瘍性結(jié)腸炎的研究進(jìn)展[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2010,19(1):87-89.

        [2]劉杰民,黃盛文,董菲洛,等.健脾益腸散合固本保元腹袋治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效及機制[J].吉林中醫(yī)藥,2011,31(1):42-43.

        [3]張亞利,唐志鵬,李凱,等.清腸栓對三硝基苯磺酸誘導(dǎo)結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜地址素細(xì)胞黏附分子-1 表達(dá)的影響[J].世界華人消化雜志,2008,16(3O):3381-3386.

        [4]陳遲,冉志華,蕭樹東,等.普伐他汀對乙酸誘導(dǎo)大鼠結(jié)腸炎的治療作用及其機制的研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2006,86(18):1284-1288.

        [5]Myers KJ,Murthy S,F(xiàn)lanigan A,et a1.Antisense oligonucleotide blockade of tumor necrosis factor -alpha in two murine models of colitis[J].Pharmacol Exp Ther,2003,304(1):411.

        [6]賴象權(quán),何本求,肖成,等.侗藥五味止瀉湯對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織學(xué)改變的影響[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012,3(3):14-17.

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