★ 張倫 劉蔚 戈焰 榮尚一

（1.廣東省第二中醫(yī)院 廣州 510095；2.南方醫(yī)科大學公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學學院 廣州 510515）

慢性萎縮性胃炎屬于中醫(yī)學“胃脘痛”、“胃痞”等范疇[1]。中醫(yī)學認為本病病因不外乎飲食不節(jié)、情志所傷與脾胃虛弱。慢性萎縮性胃炎患者久病脾虛，加之調(diào)養(yǎng)失當，外邪侵襲等因素，使中氣更虛不足以行血，漸致壅滯成瘀。脾虛血瘀證是慢性萎縮性胃炎中醫(yī)學臨床最常見證型，萎胃湯驗之臨床屢獲良效，本研究通過動物實驗研究萎胃湯可能的作用機制，為今后更深一步的研究工作打下基礎，現(xiàn)將動物實驗研究報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 SPF級SD大鼠，雌雄各半，體重180-220g，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2003-0002。動物飼養(yǎng)環(huán)境：廣東省中醫(yī)研究所SPF級實驗室，實驗動物使用許可證號：SCXK（粵）2005-0059，溫度20℃-25℃，濕度60%-70%，SPF級大鼠飼料，飲用無菌水。

1.1.2 藥品 試驗藥：萎胃湯（黃芪、黨參、當歸、白術(shù)、甘草、枳殼、石斛、雞內(nèi)金、山楂、三七、莪術(shù)），由廣東省第二中醫(yī)院中藥房提供，單味顆粒劑由廣東省一方制藥廠生產(chǎn)；對照藥：胃復春片（成分為紅參、香茶菜、炒枳殼等），杭州胡慶余堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準字：Z200040003，批號：090604。

1.2 方法

1.2.1 MNNG飲用液配制 用滅菌自來水將MNNG配制成10mg/L濃度的儲存液，避光冷藏保存，用時將其配成1 500 μg/mL的飲用液，裝入200mL的飲水瓶中，外貼黑色避光紙，整個配制過程全部避光操作。

1.2.2 劑量設置 以藥品說明書標示臨床日用量作為基礎，參考《中藥藥理研究方法學》中的劑量換算方法“體表面積比”換算動物試驗劑量作為臨床等效劑量。換算后，胃復春片為0.54g/kg（2倍臨床等效劑量），萎胃湯高劑量為20.8 g生藥/kg、中劑量為10.4 g生藥/kg、低劑量為5.2 g生藥/kg（分別為4倍臨床等效劑量、2倍臨床等效劑量、臨床等效劑量）。

1.2.3 動物造模 取SPF級SD大鼠70只，雌雄各半，常規(guī)喂養(yǎng)1周后，隨機抽取雌雄各5只作為空白對照組，其余大鼠采用1 500 μg/mL的MNNG飲水加饑飽失常的方法復制CAG模型[2-3]，連續(xù)3個月。具體操作如下。

（1）MNNG溶液自由飲用：濃度為1 500 μg/mL的MNNG溶液，裝入外涂黑色的飲水瓶中，每天更換并給足量，自由飲用。

（2）饑飽失常：2d足量喂食，1d停食，循環(huán)實施。

3個月后，隨機抽取5只動物，脫頸椎處死動物，迅速取胃。經(jīng)病理組織學檢查，判斷動物造模情況。造模成功標準：參照《中藥（新藥）臨床研究指導原則》（2002）中GAG的病理診斷標準，經(jīng)病理確診：①固有腺體萎縮；②黏膜肌層增厚；③可有腸上皮化生或假幽門腺上皮化生；④固有膜炎癥；⑤可有淋巴濾泡形成。

CAG動物模型復制成功后，稱重，10只/組，將造模動物按體重隨機均分為模型組、胃復春組（0.54g/kg）、萎胃湯高（20.8 g生藥/kg）、中（10.4 g生藥/kg）、低（5.2 g生藥/kg）劑量組（分別為4、2、1倍臨床等效劑量）。

1.2.4 給藥方法 各組大鼠按劑量灌胃給藥，10mL/kg，1次/d，空白對照組給予等體積蒸餾水。連續(xù)12周。

1.2.5 指標檢測與標本采集 測定胃酸、血清SOD活性、MDA、胃泌素含量。

胃酸測定：于末次給藥后，大鼠禁食24 h，禁水8 h，眼眶采血；用25%烏拉坦腹腔注射麻醉，剖腹，結(jié)扎幽門、賁門，取出全胃，沿胃大彎剖開胃腔，傾出內(nèi)容物，用5.0 mL生理鹽水沖洗，收集于沖洗液于離心管中，3 000 rpm離心20 min，吸取上清液1.0 mL，用PH計測量pH值，計算原胃液PH值；二步滴定法[4]測胃液總酸度。將血液于3 000rmp離心10min，吸取血清。嚴格按照試劑盒說明書，測定血清中的SOD活性、胃泌素、MDA含量。

1.3 統(tǒng)計方法

計量資料多組間均數(shù)的比較先采用單因素方差分析，方差齊時，以均值加減標準差（±s）表示，組間的均數(shù)兩兩比較用SNK法；方差不齊時，以平均秩次、下四分位數(shù)、中位數(shù)和上四分位數(shù)（P25，P50，P75）表示，多組間平均秩次比較用Kruskal-Wallis秩和檢驗，組間平均秩次的兩兩比較用Mann-Whitney U法。以上數(shù)據(jù)均由SPSS15.0完成，α=0.05。

2 研究結(jié)果

2.1 一般情況

CAG模型大鼠精神萎靡、眼睛無神、活動緩慢，毛發(fā)色澤枯稿、疏松粗糙、豎毛、易脫落，食量減少，常有便溏、形體偏小，耳色淡白，拱背，喜扎堆，消瘦、體重增加緩慢。治療期間，空白組未發(fā)現(xiàn)上述表現(xiàn)，各治療組大鼠經(jīng)治療后，其毛色、精神狀態(tài)、食欲、大便、活動情況等均有不同程度的改善，而以萎胃湯高、中劑量組最好、萎胃湯低劑量組和胃復春組次之，模型組最差。

2.2 對CAG大鼠胃液PH值、胃泌素的影響

與空白對照組比較，各組大鼠胃液PH顯著升高（均P＜0.01）；與模型組相比，胃復春組、萎胃湯高、中、低3個劑量組大鼠胃液PH均顯著性降低（P＜0.01）；與胃復春組相比，萎胃湯高、中劑量組大鼠胃液PH有顯著性降低（均P＜0.01），萎胃湯低劑量組大鼠胃液PH降低不明顯（P＞0.05）。

與空白對照組相比較，模型組大鼠胃液總酸度和血清胃泌素含量顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，萎胃湯高、中、低3個劑量組和胃復春組大鼠胃液總酸度和血清胃泌素含量顯著升高（均P＜0.01）；與胃復春組相比，萎胃湯低劑量組大鼠胃液胃液總酸度無顯著性差異（P＞0.05），萎胃湯低劑量組大鼠血清胃泌素含量有顯著性升高（P＜0.01），萎胃湯高、中劑量組大鼠胃液胃液總酸度和血清胃泌素含量均顯著性升高（均P＜0.01）。

表1 萎胃湯對CAG大鼠PH值、總酸度、胃泌素含量的影響（±s）

表1 萎胃湯對CAG大鼠PH值、總酸度、胃泌素含量的影響（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組#P＜0.05，##P＜0.01；與胃復春組比較，§P＜0.05，§§P＜0.01.

分組血清胃泌素/pg?mL-1 145.58±7.38##§§73.89±8.71**§§95.17±7.21**##129.85±5.27##§§120.53±13.18**##§§112.89±7.17**##§§空白組模型組胃復春組高劑量組中劑量組低劑量組胃液pH值2.11±0.52##§§5.17±0.52**§§4.48±0.45**##2.99±0.49**##§§3.43±0.43**##§§4.27±0.57**##總酸度/mmol?L-1 150.60±14.87##§§75.45±4.53**§§95.86±3.84**##132.56±12.92**##§§120.64±10.84**##§§105.45±8.90**##

2.3 對大鼠血清SOD（超氧化物歧化酶）活性和MDA（丙二醛）含量的影響

與空白對照組相比較，模型組CAG大鼠血清SOD活性顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比較，胃復春組和萎胃湯高、中、低3個劑量組SOD活性顯著升高（均P＜0.01）；與胃復春組相比較，萎胃湯高劑量組SOD活性顯著升高（P＜0.01），萎胃湯中、低劑量組SOD活性亦有升高但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

與空白對照組相比較，模型組CAG大鼠MDA顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比較，胃復春組和萎胃湯高、中、低3個劑量組MDA顯著降低（均P＜0.01）；與胃復春組相比較，萎胃湯高劑量組MDA顯著降低（P＜0.01），萎胃湯中、低劑量組MDA亦有降低但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表2 萎胃湯對CAG大鼠血清SOD和MDA的影響（±s）

表2 萎胃湯對CAG大鼠血清SOD和MDA的影響（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組#P＜0.05，##P＜0.01；與胃復春組比較，§P＜0.05，§§P＜0.01.

MDA/mmol?L-1 9.48±2.06##§§16.88±1.06**§§14.29±0.98**##10.96±1.61*##§§12.96±1.83**##13.58±1.50**##分組空白組模型組胃復春組高劑量組中劑量組低劑量組SOD/U?mL-1 152.61±10.37##§§97.84±9.95**§§132.93±11.49**##150.13±12.84##§§137.14±9.12**##137.53±6.68**##

2.4 不良事件發(fā)生率

2組大鼠于灌藥期間均無出現(xiàn)死亡、消化道出血、血尿等的不良事件，提示萎胃湯為安全的藥物。

3 討論

本研究采用以MNNG為主的加饑飽失常法復制CAG大鼠模型。造模開始后6周大鼠即開始出現(xiàn)活動量、飲食量、體重、毛色、二便等方面的異常變化，至12周時上述改變更加明顯，而且胃粘膜肉眼觀和顯微鏡鏡下觀呈不同程度的萎縮、胃壁厚變薄、彈性降低、皺壁減少、黏膜色澤發(fā)白或變暗，有出血點等情況的發(fā)生，符合人類CAG的臨床和病理特征。

近年來，超氧化物歧化酶（SOD）的防御和修復氧代謝產(chǎn)物的損傷作用得到了廣泛的重視，測定SOD可在一定程度上反映機體清除自由基能力的大小。丙二醛（MDA）是脂質(zhì)過氧化的最終分解產(chǎn)物，可與脂質(zhì)過氧化中間產(chǎn)物自由基損傷膜結(jié)構(gòu)，改變膜成分的活性及抗原性而影響膜的正常功能。因此，MDA水平是脂質(zhì)過氧化物損傷效應的特征性指標。蔣時紅等[5]在實驗中發(fā)現(xiàn)，慢性萎縮性胃炎（CAG）大鼠模型血清和胃黏膜SOD水平明顯下降，而MDA水平明顯升高，表明CAG大鼠脂質(zhì)過氧化反應增強，超出了抗氧化系統(tǒng)的抗氧化能力，使MDA增高，自由基代謝異常起著重要作用。

胃泌素主要由胃竇G細胞釋放，除存在于血液和組織中，也存在于胃液內(nèi)，具有刺激胃酸分泌，促使胃腸粘膜的蛋白質(zhì)、RNA、DNA的合成，促使胃腸粘膜的生長與更新速度加快等作用。還能引起幽門括約肌松弛，胃竇肌收縮，加快胃排空。在CAG時由于腺體萎縮，腸上皮化生，G細胞數(shù)量減少，GAS分泌下降，由于失去了激素的營養(yǎng)作用，胃粘膜進一步萎縮，腸化加劇，形成惡性循環(huán)。因此，檢測胃酸、胃蛋白酶活性及血清胃泌素含量對于CAG的診斷及藥物療效的判定，具有非常重要的意義。

本研究提示萎胃湯各劑量組均能改善CAG模型大鼠的生存質(zhì)量：即大鼠的精神狀況、飲食量、活動度、體重、毛色、二便等一般情況，且萎胃湯高、中劑量組較對照藥胃復春為好。在改善胃液PH方面，萎胃湯高、中、低3個劑量組大鼠均顯著性降低胃液PH值（P＜0.01），且萎胃湯高、中劑量組較胃復春組大鼠胃液PH值亦有顯著性降低（均P＜0.01）。在胃酸分泌功能方面，萎胃湯高、中、低3個劑量組和胃復春組均升高了胃泌素的分泌情況（均有P＜0.01），且萎胃湯高、中劑量組較胃復春組大鼠胃泌素亦有顯著性升高（均P＜0.01）。在抗氧化能力方面亦有改善，萎胃湯3個劑量組均顯著升高了SOD活性（均P＜0.01），降低MDA的含量（均P＜0.01）。通過實驗研究也可以看出，治療作用中以萎胃湯高劑量效果最好；治療劑量呈現(xiàn)了一定的劑量正相關(guān)關(guān)系。通過動物實驗研究進一步闡明了萎胃湯治療慢性萎縮性胃炎的作用機制。

[1]白兆芝，張彥敏，張潤順，等.胃安泰膠囊治療慢性萎縮性胃炎癌前病變的臨床研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，2005，39（2）：16-17.

[2]陳云逸.胃癌動物模型研究進展[J].腫瘤基礎與臨床，2006，19（1）：751.

[3]雪輝，王建國.大鼠慢性萎縮性胃炎模型的建立[J].張家口醫(yī)學院學報，2002，19（2）：11.

[4]陳奇.中藥藥理實驗方法學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：859.

[5]蔣時紅，劉旺根，王雪萍，等.黃芪建中湯對脾虛型慢性萎縮性胃炎大鼠血象、血液和胃黏膜生化指標的影響[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，2006，12（4）：279-281.