★ 萬(wàn)歡 虞金寶 林森

（1.南昌大學(xué)理學(xué)院 南昌 330031；2.江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046；3.江西省醫(yī)藥學(xué)校 南昌 330200）

健脾顆粒收載于中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)?中藥成方制劑第2冊(cè)，具有健脾開(kāi)胃功效，用于脾胃虛弱所致脘腹脹滿、食少便溏等證。處方由黨參、白術(shù)（炒）、陳皮、枳實(shí)（炒）等組成，有文獻(xiàn)報(bào)道[1，2]對(duì)該制劑中橙皮苷進(jìn)行含量測(cè)定，由于橙皮苷為陳皮、枳實(shí)共有成分[3-5]，該方法專屬性不強(qiáng)，且文獻(xiàn)[3]報(bào)道新橙皮苷僅在少數(shù)地方產(chǎn)陳皮（如浙江）中含有，而江西、廣西產(chǎn)陳皮中未檢測(cè)到新橙皮苷，經(jīng)試驗(yàn)證明，陳皮不干擾枳實(shí)中新橙皮苷的測(cè)定。中國(guó)藥典2010年版枳殼藥材標(biāo)準(zhǔn)顯示，新橙皮苷含量高于柚皮苷，且分離度好，因此本實(shí)驗(yàn)采用HPLC測(cè)定制劑中新橙皮苷含量，并進(jìn)行了方法學(xué)研究。

1 儀器與藥品

HP-1100高效液相色譜儀（美國(guó)：包括1322A在線脫氣機(jī)、G1311A四元梯度泵、G1315A二極管陣列檢測(cè)器、HP化學(xué)工作站）；SimplicityTM個(gè)人型超純水系統(tǒng)（Millipore公司），定量毛細(xì)管（美國(guó)Drummond公司），CQ-250超聲波清洗儀（上海船舶電子設(shè)備研究所），新橙皮苷對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào)：111857-201102，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙腈（色譜純），其它試劑均為分析純。健脾顆粒（批號(hào)：20120601、20120602、20120603、20120701、20120702、20120703（自制））。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

色譜柱：Dikma Diamonsil C18（2）（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-水（23：77），流速：1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm，柱溫：30℃。在此條件下對(duì)照品、供試品在約14 min相同時(shí)間有一色譜峰，且陰性無(wú)干擾，見(jiàn)圖1、2、3。

圖1 新橙皮苷對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對(duì)照色譜圖

2.2 供試品溶液的制備

取健脾顆粒適量，研細(xì)，稱取約1.4 g，精密稱定，置50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲（功率250w，頻率33kHz）處理30 min，放冷，再次稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察

精密稱取新橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含新橙皮苷0.42 mg的對(duì)照品溶液。取此對(duì)照品溶液適量，加甲醇分別稀釋每1 mL含新橙皮苷濃度為10.10，25.25，42.08，75.74，126.24，210.40 μg的對(duì)照品溶液，分別吸取10 μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定，將樣品濃度與峰面積進(jìn)行回歸，得新橙皮苷回歸方程為：Y=36521.35969X-27347.84，r=0.9999（n=6），在10.10-210.40 μg/mL范圍內(nèi)新橙皮苷濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液10 μL，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定供試品溶液中新橙皮苷峰面積值，計(jì)算供試品峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為1.38%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液10 μL，按上述色譜條件，分別在0、1、2、4、8、12 h進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得供試品中新橙皮苷峰面積的RSD為1.12%。表明本品中對(duì)新橙皮苷采用的提取方法穩(wěn)定可行。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品共6份，照供試品溶液制備項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，RSD為1.47%。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取本品適量，研細(xì)，取約0.70 g，共6份，精密稱定，置具塞三角瓶中，各精密加入新橙皮苷對(duì)照品溶液（0.025 mg/mL）25 mL，按照含量測(cè)定項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)，吸取10 μL注入液相色譜儀中進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 新橙皮苷回收率測(cè)定結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定

取本品，按供試品溶液的制備方法制備各供試品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算，即得。測(cè)定6批樣品中新橙皮苷的含量，結(jié)果為每袋含新橙皮苷為13.37，13.51，12.26，13.27，14.05，14.46 mg。

3 討論

3.1 枳實(shí)中含有揮發(fā)油、黃酮類、生物堿等成分，其中黃酮類成分為其主要成分之一，主要有橙皮苷、橙皮素、柚皮苷、柚皮素、新橙皮苷、柚皮蕓香苷等；黃酮苷對(duì)大鼠離體腸平滑肌的收縮呈抑制作用，且可對(duì)抗氯化鋇、乙酰膽堿、組織胺引起的痙攣性收縮，但對(duì)大鼠血壓和小鼠化學(xué)性疼痛及自發(fā)活動(dòng)無(wú)明顯影響。揮發(fā)油主要有鎮(zhèn)靜作用，中樞抑制作用[7]。枳實(shí)可使胃底平滑肌的張力明顯升高，有促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)、加速胃排空的作用等，該藥理作用進(jìn)一步證明了枳實(shí)具有破氣除脹、消積導(dǎo)滯的作用[8]，因此，本次實(shí)驗(yàn)選取枳實(shí)中的新橙皮苷為檢測(cè)指標(biāo)。

3.2 有文獻(xiàn)[1，2]以橙皮苷為指標(biāo)對(duì)健脾顆粒進(jìn)行含量測(cè)定研究，由于橙皮苷為陳皮、枳實(shí)共有成分[3-5]，該方法專屬性不強(qiáng)，且橙皮苷難溶于水，微溶于甲醇[9]，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，水煎煮工藝中橙皮苷的轉(zhuǎn)移率多在10%以下；而新橙皮苷則易溶于熱水，溶于熱乙醇，本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)新橙皮苷的轉(zhuǎn)移率約為40%，因此，以新橙皮苷作為該制劑的含量測(cè)定指標(biāo)更為科學(xué)、合理。

3.3 實(shí)驗(yàn)中還分別對(duì)提取溶劑（甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇）、提取方法（超聲和回流）、提取時(shí)間（20、30、45、60 min）和溶劑用量（15、25、50 mL）等條件進(jìn)行考察，結(jié)果表明，新橙皮苷以25 mL甲醇超聲提取30 min效果最好。

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