張秀榮,孫德一,崔佰吉

(吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院,吉林 吉林 132013)

·論 著·

SchB-SLN中五味子乙素含量的方法學(xué)研究

張秀榮,孫德一,崔佰吉

(吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院,吉林 吉林 132013)

目的進行五味子乙素固體脂質(zhì)納米粒(SchB-SLN)中五味子乙素的含量測定的方法學(xué)研究。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent TC-2 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫40 ℃，流速0.8 mL/min。流動相為甲醇-水(85∶15)，檢測波長為220 nm。結(jié)果五味子乙素的線性范圍分別為0.005～0.4 μg(r=0.999 7)；平均加樣回收率(n=9)為100.89%。結(jié)論本方法簡便易行，結(jié)果準確可靠，適用于本制劑中五味子乙素的含量測定。

五味子乙素；固體脂質(zhì)納米粒；高效液相色譜法

五味子固體脂質(zhì)納米粒(SchB-SLN)是以單硬脂酸甘油酯為脂質(zhì)材料，卵磷脂和Pluronic F-68為乳化劑，采用超聲法制備的新型納米給藥系統(tǒng)，可以改善五味子乙素在體內(nèi)釋放行為，從而提高五味子乙素的生物利用度。本研究采用HPLC色譜法對SchB-SLN中五味子乙素進行含量測定，并進行相應(yīng)的方法學(xué)研究，經(jīng)實驗表明本方法操作簡便、專屬性強、重現(xiàn)性好，可作為該制劑效標物質(zhì)含量測定的方法，為制定其質(zhì)量標準提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20A系列高效液相色譜儀；日本島津UA1800紫外分光光度儀；IKA-RCT磁力加熱攪拌器；塞多利斯CPA2250電子天平；MILLIPORE(Synergy185)超純水制備儀；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器。甲醇為色譜純，水為超純化水，其他試劑為分析純；對照品五味子乙素(110765-200609)購自中國藥品生物制品檢定所；SchB-SLN(批號：110301，110302，110303)為本實驗室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1檢測波長的選擇

稱取SchB-SLN適量，加甲醇適量，超聲20 min，放冷至室溫，制備每1 mL中約含五味子乙素0.1 mg的溶液，取溶液置高速離心機中，12 000 r/min，離心10 min，取上清液，以甲醇溶液為空白，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描；同時按照相同的方法進行空白固體脂質(zhì)納米粒的光譜掃描，掃描結(jié)果可見五味子乙素在220 nm處有最大吸收，且所有輔料在該波長處的紫外吸收對測定結(jié)果無干擾，故選220 nm為檢測波長。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取五味子乙素對照品適量，加甲醇制備成每1 mL含有五味子乙素0.01 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

稱取SchB-SLN適量，加甲醇適量，稱定重量，超聲20 min，放冷至室溫，稱定重量，并補足減失重量，制備成每1 mL中約含五味子乙素0.01 mg的溶液，取1 mL溶液置高速離心機中，12 000 r/min，離心30 min，取上清液，即得。

2.4陰性樣品溶液

按本品的處方制備空白的固體脂質(zhì)納米粒。按“2.3”項下方法制備操作，即得。

2.5色譜條件

色譜柱：Agilent TC-2 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(85∶15)；流速：0.8 mL/min；檢測波長：220 nm；柱溫：40 ℃；進樣量：20 μL。五味子乙素與相鄰雜峰分離度大于1.5；理論塔板數(shù)按五味子乙素計算大于4 000，對照品、樣品、陰性樣品色譜圖見圖1。由圖可見，樣品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時間的色譜峰，而陰性樣品無相同保留時間的色譜峰，分離效果良好。

2.6線性關(guān)系考察

精密稱取五味子乙素對照品5 mg，置25 mL的容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，作為儲備液。分別吸取上述儲備液0.125、0.25、0.5、0.15、4、7、10 mL置100 mL的容量瓶中，釋藥介質(zhì)定容至刻度。按“2.5”項條件進行HPLC測定，以峰面積(A)對質(zhì)量濃度(p)進行線性回歸，得回歸方程

y=202 421x+58 604，r=0.999 7

表明五味子乙素在0.005～0.4 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。標準曲線見圖2。

圖 1 陰性樣品溶液(A)、對照品溶液(B)和供試品溶液(C)的色譜圖(220 nm)

圖 2 標準曲線圖

2.7精密度試驗

取對照品溶液和供試品溶液連續(xù)進樣6次。測得對照品和供試品溶液中溶液中五味子乙素峰面積的RSD分別為0.64%、0.83%，結(jié)果表明精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液在0、2、4、6、8、12 h進行測定，供試品溶液中五味子乙素的RSD為1.4%。表明供試品中五味子乙素在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9重復(fù)性實驗

取SchB-SLN，按“2.3”項下供試品溶液制備方法同時制備供試品溶液6份。以“2.5”項下色譜條件測定，按外標法計算含量，結(jié)果五味子乙素的含量RSD為1.07%，表明實驗重復(fù)性良好。

2.10加樣回收率試驗

稱取五味子乙素適量。用甲醇溶解，制備20 g/mL的SchB貯備液，分別精密量取貯備液4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL于10 mL容量瓶中，另精密量取1 mL空白納米?；鞈乙?，用甲醇稀釋至約8 mL，超聲處理20 min，取出，放冷,并用甲醇定容，取1 mL 12 000 r/min離心30 min，取上清液按“2.5”項下方法進行測定，測定結(jié)果見表1。

2.11樣品含量測定

分別精密吸取按照“2.2”項及“2.3”項方法制備的混合對照品溶液及供試品溶液各20 μL注入色譜儀，測定樣品中五味子乙素的峰面積，采用外標法計算，結(jié)果見表2。

表 1 回收率測定結(jié)果表

表 2 樣品五味子乙素測定結(jié)果(n=3)

3 討 論

關(guān)于五味子乙素含量測定的報道較多，且主要以高效液相色譜法為主要測定方法，流動相主要以甲醇-水為主，洗脫方式主要以梯度洗脫為主[1-5]。本研究考察了“甲醇-水”和“乙腈-水”兩個流動相系統(tǒng)。經(jīng)過比較，2個流動相體系條件下，樣品分離結(jié)果沒有明顯的差異，所以選擇“甲醇-水”作為流動相；研究分別考察柱溫25、30、40 ℃情況下色譜結(jié)果，研究表明，提高柱溫能夠明顯提高各個色譜峰的分離度，選擇40 ℃作為本研究的實驗條件。本研究采用高效液相色譜法測定五味子固體脂質(zhì)納米粒中五味子乙素的含量，研究中選擇不同的有機溶劑進行樣品的制備工作，選擇甲醇、乙醇作為溶媒進行選擇，通過平行對比實驗研究，最終選擇甲醇作為樣品制備的溶媒。

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StudyonmethodologyfordeterminationoftheSchisandrinBinSchisandrinB-solidlipidnanoparticles

ZHANG Xiu-rong,SUN De-yi,CUI Bai-ji

(College of Pharmacy,Jilin Medical College,Jilin City,Jilin Province,132013，China)

ObjectiveTo develop a method for determination of Schisandrin B in Schisandrin B-solid lipid nanoparticles.MethodsHPLC was adopted for this study.The mobile phase was methanol-water(85∶15).The flow rate was 0.8 mL/min.The UV detection wavelength was 220 nm.ResultsThe linear ranges of Schisandrin B were 0.005～0.4 μg(r=0.999 7).The average recoveries (n=9) were 100.89%.ConclusionThe developed method is simple,accurate and suitable for determination of Schisandrin B in SchB-SLN.

Schisandrin B;solid lipid nanoparticles;HPLC

R284.1

A

2013-09-01)

1673-2995(2013)06-0422-03

張秀榮(1959-)，女(漢族)，教授，本科.