王 輝, 王淑湘, 崔國(guó)利, 盧春鳳， 劉 蕾， 劉君星， 馬小茹, 王芳芳， 梁衍鋒， 吳佳梅， 毛金軍， 王淑秋△

(1佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007; 2佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江 佳木斯154002)

甜菜堿對(duì)戊四氮致癇大鼠海馬GFAP、甘氨酸和甘氨酸受體表達(dá)的影響*

王 輝1, 王淑湘1, 崔國(guó)利2, 盧春鳳1， 劉 蕾1， 劉君星1， 馬小茹1, 王芳芳1， 梁衍鋒1， 吳佳梅1， 毛金軍1， 王淑秋1△

(1佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007;2佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江 佳木斯154002)

目的研究甜菜堿對(duì)癲癇大鼠海馬膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(GFAP)、甘氨酸(Gly)及甘氨酸受體(GlyR)表達(dá)的影響。方法將健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為：正常對(duì)照組(腹腔注射生理鹽水，1.0 mL生理鹽水灌胃);癲癇組(腹腔注射戊四氮，1.0 mL生理鹽水灌胃);甜菜堿高、中、低濃度組(腹腔注射戊四氮，甜菜堿灌胃);丙戊酸鈉組(腹腔注射戊四氮，丙戊酸鈉灌胃)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后大鼠眼眶取血檢測(cè)血清中同型半胱氨酸的含量；在低溫條件下迅速取腦組織，分析Gly含量的變化，免疫熒光檢測(cè)GFAP的水平，兔疫熒光和Western bloting檢測(cè)海馬區(qū)GlyR表達(dá)的變化。結(jié)果各組大鼠大發(fā)作潛伏期無顯著差異(P>0.05)，但是甜菜堿治療組較癲癇組的首次大發(fā)作持續(xù)時(shí)間顯著縮短(P<0.01)。癲癇組同型半胱氨酸的含量與正常組比較顯著降低(P<0.01)，甜菜堿高、低濃度組同型半胱氨酸含量與癲癇組比較明顯降低(P<0.05)。癲癇組甘氨酸的含量與正常對(duì)照組相比顯著下降(P<0.01)。甜菜堿高、中、低濃度組甘氨酸的含量與癲癇組比較顯著增高(P<0.01)。免疫熒光檢測(cè)GFAP結(jié)果，癲癇組與正常組比較顯著增高(P<0.01)，而甜菜堿高中低濃度與癲癇組相比顯著降低(P<0.01)。免疫熒光與Western bloting檢測(cè)GlyR結(jié)果，癲癇組GluR的表達(dá)與正常對(duì)照組相比顯著降低(P<0.01)，甜菜堿高、中、濃度組較癲癇組顯著升高(P<0.01)。結(jié)論甜菜堿具有較好的抗癲癇作用。

甜菜堿； 癲癇; 同型半胱氨酸； 膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白； 甘氨酸； 甘氨酸受體

癲癇(epilepsy)是神經(jīng)系統(tǒng)疾病中僅次于腦血管疾病的第二頑癥，具有長(zhǎng)期性、反復(fù)發(fā)作性和難治性的特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人類的健康。癲癇發(fā)生機(jī)制是由于人腦皮層神經(jīng)細(xì)胞過度興奮和(或)過度同步化引起的一系列短暫腦功能失常，是種慢性腦部疾病，具有反復(fù)發(fā)作、突然發(fā)生、突然終止、臨床癥狀表現(xiàn)多樣等特點(diǎn)。日前癲癇的治療仍以藥物為主，但是抗癲癇藥發(fā)展非常緩慢[1]。甜菜堿(betaine)對(duì)人體的心血管類、神經(jīng)類、肝臟類和高半胱氨酸尿癥有一定的治療作用[2]。本實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)甜菜堿對(duì)戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)所致癲癇大鼠血清中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)含量以及對(duì)海馬膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、甘氨酸(glycine,Gly)和甘氨酸受體(glycine receptor，GlyR)表達(dá)的影響，旨在闡明甜菜堿的抗癲癇作用。

材 料 和 方 法

1動(dòng)物

健康雄性清潔級(jí)Wistar大鼠，初始體重(200±20) g,由大連醫(yī)科大學(xué)提供。

2主要試劑

PTZ、甜菜堿、丙戊酸鈉和磺基水楊酸購(gòu)自Sigma；兔抗GlyR購(gòu)于Santa Cruz；PVDF膜購(gòu)于Millipore；FITC標(biāo)記的羊抗兔lgG購(gòu)于北京中衫；Tween 20購(gòu)于Americo；多聚賴氨酸處理過的防脫片、辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔lgG、BSA、抗體稀釋液、PBS和枸櫞酸鹽購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司；L-8900氨基酸分析儀購(gòu)自HITACHI; EPS-300電泳儀購(gòu)自上海天能科技有限公司。

3主要方法

3.1動(dòng)物模型的建立 健康雄性清潔級(jí)Wistar大鼠48只，隨機(jī)分為:正常對(duì)照組;癲癇組;甜菜堿高、中、低濃度組；丙戊酸鈉組。癲癇組、甜菜堿組和丙戊酸鈉組每天腹腔注射PTZ(35 mg/kg)，連續(xù)注射28 d后停止給藥，1周后再次以上述劑量的PTZ點(diǎn)燃，選擇點(diǎn)燃后連續(xù)出現(xiàn)5次Ⅱ級(jí)以上癥狀并存活的動(dòng)物做后續(xù)實(shí)驗(yàn)；正常對(duì)照組每天腹腔注射相同體積的生理鹽水。從腹腔注射PTZ當(dāng)天開始，甜菜堿高、中、低濃度組用甜菜堿灌胃，劑量分別為450 mg·kg-1·d-1、225 mg·kg-1·d-1和112.5 mg·kg-1·d-1。丙戊酸鈉組用丙戊酸鈉灌胃，劑量為200 mg·kg-1·d-1。正常對(duì)照組和癲癇組用生理鹽水灌胃，1.0 mL·d-1。大鼠癲癇發(fā)作采用Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)，無發(fā)作反應(yīng)；Ⅰ級(jí)，節(jié)律性口角、耳或面部肌肉抽動(dòng)陣攣；Ⅱ級(jí)，點(diǎn)頭并伴隨更嚴(yán)重的面部肌肉抽動(dòng)陣攣；Ⅲ級(jí)，出現(xiàn)前肢陣攣但不伴隨直立；Ⅵ級(jí)，前肢陣攣伴隨直立；Ⅴ級(jí)，全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作而跌倒。

3.2血清中Hcy的含量檢測(cè) 大鼠眼眶取血，血液室溫放置1 h，4 000 r/min離心10 min，取上清，-80 ℃冰箱保存。待送佳木斯大學(xué)附屬醫(yī)院送檢。

3.3氨基酸分析儀檢測(cè)甘氨酸的含量 大鼠麻醉后斷頭，迅速取出海馬，精確稱重。置樣品于冰鎮(zhèn)玻璃管中，加入10%磺基水揚(yáng)酸(100 mg/ 4 mL)，冰浴下以玻璃勻漿器乎動(dòng)勻漿并離心(4 ℃、15 000 r/min, 20 min)，取上清液，-40 ℃冰箱凍存。

3.4免疫熒光法檢測(cè)海馬區(qū)GFAP和GlyR表達(dá) 切片脫蠟及水化，微波爐抗原熱修復(fù)，5%BSA封閉，分別滴加Ⅰ抗，4 ℃孵育過夜，PBS沖洗，熒光Ⅱ抗染色37 ℃，2 h。滴加PI 10 min。PBS洗片，封片。用Image-Pro Plus圖像處理軟件系統(tǒng)分析。

3.5Western bloting法檢測(cè)海馬區(qū)GlyR表達(dá) 4 ℃條件裂解30 min，12 000 r/min離心15 min，取上清；測(cè)定樣品蛋白含量；SDS聚丙烯酸胺凝膠電泳；4 ℃轉(zhuǎn)膜2 h，TBST漂洗3次；室溫封閉孵育1 h TBST,Ⅰ抗4 ℃孵育過夜,TBST漂洗3次,Ⅱ抗37 ℃平緩搖動(dòng)孵育1 h,TBST漂洗3次,ECL發(fā)光顯影,CIS凝膠圖像處理系統(tǒng)分析。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，組間均數(shù)比較用單因素方差分析，應(yīng)用IBM SPSS Statistics 21.00統(tǒng)計(jì)軟件處理。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1動(dòng)物模型復(fù)制

甜菜堿各濃度組和癲癇組所有動(dòng)物均點(diǎn)燃成功，并經(jīng)測(cè)試均可發(fā)生連續(xù)5次Ⅱ級(jí)以上癲癇發(fā)作，主要發(fā)生在PTZ腹腔注射后4 min內(nèi)，且發(fā)作程度不一。大發(fā)作的典型癥狀為首先出現(xiàn)耳部和嘴部的陣攣、點(diǎn)頭、甩尾，進(jìn)而發(fā)生前肢的陣攣抽搐并逐漸加重，最終導(dǎo)致四肢抽搐、不能站立、摔倒翻滾。正常對(duì)照組動(dòng)物整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中未出現(xiàn)任何級(jí)別的癇樣發(fā)作。

首次大發(fā)作的潛伏時(shí)間各組之間無差異，而持續(xù)時(shí)間各用藥組均小于癲癇組(P<0.01)，見表1。

表1各組大鼠大發(fā)作潛伏期和首次大發(fā)作持續(xù)時(shí)間

Table 1. Latency and duration of the first grand mal seizure in various groups(Mean±SD)

GroupnLatency(min)Duration(s)PTZ530.43±0.71240.58±10.42PTZ+betian(450mg·kg-1·d-1)730.68±0.83180.94±9.75##PTZ+betian(225mg·kg-1·d-1)733.00±0.67160.11±4.11##PTZ+betian(112.5mg·kg-1·d-1)632.75±0.82180.39±4.03##PTZ+sodiumvalproate630.12±0.48133.00±3.15##

##P<0.01vsPTZ.

2大鼠血清中同型半胱氨酸的含量

癲癇組同型半胱氨酸的含量與正常組比較顯著降低(P<0.01)；甜菜堿高、低濃度組同型半胱氨酸含量與癲癇組比較明顯降低(P<0.05)。而甜菜堿中濃度與癲癇組相比雖然也有所降低但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；甜菜堿高、低濃度組與丙戊酸鈉組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

表2各組大鼠血清中同型半胱氨酸含量

Table 2. Level of homocysteine (Hcy) in serum of rats in various groups(μmol/L.Mean±SD)

GroupnHcyControl611.90±1.07PTZ59.30±1.24**PTZ+betian(450mg·kg-1·d-1)77.91±0.64#PTZ+betian(225mg·kg-1·d-1)78.67±1.13PTZ+betian(112.5mg·kg-1·d-1)67.47±0.89#PTZ+sodiumvalproate67.45±0.97#

**P<0.01vscontrol；#P<0.05vsPTZ.

3大鼠海馬中甘氨酸的含量

癲癇組Gly的含量與正常組比較顯著降低(P<0.01)；甜菜堿高、中、低濃度組和丙戊酸納組Gly含量與癲癇組比較明顯增高(P<0.01);甜菜堿高、中、低濃度組Gly含量與丙戊酸鈉組相比亦明顯增高(P<0.01)，見表3。

表3各組大鼠海馬中Gly含量

Table 3. Hippocampal Gly level of rats in various groups(μmol/L.Mean±SD)

GroupnGlyControl62.60±0.27PTZ51.67±0.10**PTZ+betian(450mg·kg-1·d-1)72.20±0.11##△△PTZ+betian(225mg·kg-1·d-1)72.27±0.08##△△PTZ+betian(112.5mg·kg-1·d-1)62.37±0.09##△△PTZ+sodiumvalproate62.00±0.13##

**P<0.01vscontrol;##P<0.01vsPTZ;△△P<0.01vsPTZ+sodium valproate.

4大鼠海馬區(qū)GFAP免疫熒光結(jié)果

癲癇組大鼠海馬區(qū)GFAP熒光強(qiáng)度與正常組比較顯著增高(P<0.01)；甜菜堿高、中、低濃度組和丙戊酸鈉組大鼠海馬區(qū)GFAP熒光強(qiáng)度與癲癇組比較明顯降低(P<0.01)；甜菜堿高、中、低濃度組與丙戊酸鈉組相比顯著增高(P<0.01)，見圖1、表4。

Figure 1. Expression of GFAP in the of hippocampus of rats (×400).A：control；B：PTZ；C：PTZ+betian(450 mg·kg-1·d-1)；D:PTZ+betian(225 mg·kg-1·d-1)；E：PTZ+betian(112.5 mg·kg-1·d-1)；F：PTZ+sodium valproate.

圖1各組大鼠海馬區(qū)GFAP的表達(dá)

表4各組大鼠海馬區(qū)GFAP熒光強(qiáng)度

Table 4. Fluorescence intensity of GFAP in the hippocampus of rats in various groups(Mean±SD)

GroupnFluorescenceintensityControl6197.00±0.21PTZ5250.07±0.65**PTZ+betian(450mg·kg-1·d-1)7220.00±0.03##△△PTZ+betian(225mg·kg-1·d-1)7229.05±14.69##△△PTZ+betian(112.5mg·kg-1·d-1)6230.86±0.01##△△PTZ+sodiumvalproate6217.67±3.72##

**P<0.01vscontrol；##P<0.01vsPTZ；△△P<0.01vsPTZ+sodium valproate.

5大鼠海馬區(qū)GlyR免疫熒光結(jié)果

癲癇組大鼠海馬區(qū)GlyR熒光強(qiáng)度與正常組比較顯著降低(P<0.01)；甜菜堿高、中、低濃度組和丙戊酸鈉組大鼠海馬區(qū)GlyR熒光強(qiáng)度與癲癇組比較明顯增高(P<0.01);甜菜堿高、中、低濃度組與丙戊酸鈉組相比亦顯著增高(P<0.01),見圖2、表5。

Figure 2. Expression of GlyR in the hippocampus of rats (×200).A：control；B：PTZ；C：PTZ+betian(450 mg·kg-1·d-1)；D:PTZ+betian(225 mg·kg-1·d-1)；E：PTZ+betian(112.5 mg·kg-1·d-1)；F：PTZ+sodium valproate.

圖2各組大鼠海馬區(qū)甘氨酸受體的表達(dá)

表5各組大鼠海馬區(qū)甘氨酸受體熒光強(qiáng)度

Table 5. Fluorescence intensity of GlyR in the hippocampus of rats in various groups(Mean±SD)

GroupnFluorescenceintensityControl6253.82±19.00PTZ5127.18±21.51**PTZ+betian(450mg·kg-1·d-1)7240.38±10.60##△△PTZ+betian(225mg·kg-1·d-1)7226.71±14.00##△△PTZ+betian(112.5mg·kg-1·d-1)6235.86±18.60##△△PTZ+sodiumvalproate6187.67±21.70##

**P<0.01vscontrol；##P<0.01vsPTZ；△△P<0.01vsPTZ+sodium valproate.

6Westernbloting結(jié)果

癲癇組大鼠海馬區(qū)GlyR表達(dá)與正常組比較顯著降低(P<0.01)；甜菜堿高、中、低濃度組大鼠海馬區(qū)GlyR蛋白表達(dá)與癲癇組比較明顯增高(P<0.01)，與丙戊酸鈉組比較亦明顯增高(P<0.01)，見圖3、表6。

討 論

癲癇是一組由大腦神經(jīng)元反復(fù)、異常、過度同步化放電所引起的短暫中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征的慢性腦部疾病，腦內(nèi)抑制性神經(jīng)系統(tǒng)功能減弱，而神經(jīng)元興奮性增加及過度同步化發(fā)放是產(chǎn)生癲癇的基本條件。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示甜菜堿治療組可以顯著減少大鼠癲癇大發(fā)作的持續(xù)時(shí)間，表明甜菜有抗癲癇作用。但是仍然不如經(jīng)典抗癲癇藥物丙戊酸鈉效果顯著。

Figure 3. Expression of GlyR in the hippocampus of rats in va-rious groups. A：control ；B：PTZ；C：PTZ+betian(450 mg·kg-1·d-1)；D:PTZ+betian(225 mg·kg-1·d-1)；E：PTZ+betian(112.5 mg·kg-1·d-1)；F：PTZ+sodium valproate.

圖3各組大鼠海馬區(qū)甘氨酸受體蛋白的表達(dá)

表6各組大鼠海馬區(qū)甘氨酸受體蛋白表達(dá)

Table 6. Expression of GlyR in the hippocampus of rats in various groups(Mean±SD)

GroupnGlyRControl60.89±0.11PTZ50.63±0.04**PTZ+betian(450mg·kg-1·d-1)70.88±0.14##△△PTZ+betian(225mg·kg-1·d-1)70.86±0.12##△△PTZ+betian(112.5mg·kg-1·d-1)60.83±0.08##△△PTZ+sodiumvalproate60.73±0.02▲

**P<0.01vscontrol；##P<0.01vsPTZ；▲P<0.05vsPTZ;△△P<0.01vsPTZ+sodium valproate.

研究證實(shí)，Hcy為興奮性氨基酸，過度積聚能導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞興奮性增加和神經(jīng)細(xì)胞損害，在癲癇病理形成中扮演關(guān)鍵角色。Hcy作為一種興奮性物質(zhì)，通過刺激N-甲基-D-天門冬氨酸受體對(duì)神經(jīng)元發(fā)揮毒性作用，導(dǎo)致神經(jīng)損傷，并認(rèn)為高Hcy血癥可能是癲癇發(fā)作的致病因素之一[3]。本實(shí)驗(yàn)癲癇模型是經(jīng)典方法PTZ點(diǎn)燃，各組Hcy均在正常值內(nèi)，癲癇組大鼠血清中Hcy的含量降低說明在最后一次復(fù)燃大鼠后，機(jī)體本身會(huì)有抗癲癇作用；維持了4周的甜菜堿灌胃后，高、低濃度甜菜堿可顯著的降低了Hcy的含量，使其達(dá)到很好的抗癲癇效果。但中濃度甜菜堿對(duì)Hcy的降低作用不明顯，可能是由于研究樣品過小導(dǎo)致的。

星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)腦細(xì)胞外環(huán)境的控制中起關(guān)鍵作用，具有限制胞外鉀離子和興奮性氨基酸谷氨酸鹽堆積的作用[4]。而GFAP是星形膠質(zhì)細(xì)胞特有的一種中間絲蛋白，常被作為星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，它代表了大多數(shù)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。它的激活常出現(xiàn)在神經(jīng)元受損的部位，并被認(rèn)為是神經(jīng)元受損的結(jié)果。隨著癲癇發(fā)生，神經(jīng)元的損傷，星形膠質(zhì)細(xì)胞顯著增殖，神經(jīng)膠質(zhì)瘢痕形成[5]。本實(shí)驗(yàn)GFAP免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)癲癇組熒光強(qiáng)度增加，而用藥組均能緩解癲癇對(duì)神經(jīng)元的破壞。

GlyR是一種經(jīng)典的位于神經(jīng)細(xì)胞突觸后膜的配體門控氯離了通道型受體，與Gly結(jié)合后開放，促進(jìn)Cl-流入，因此也被稱為Gly門控氯離子通道。Cl-內(nèi)流可使突觸后膜超極化，因此中和了興奮性神經(jīng)遞質(zhì)引起的去極化，發(fā)揮抑制效應(yīng)。GlyR介導(dǎo)的抑制性神經(jīng)傳遞在哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)反射活動(dòng)、隨意運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)和感覺信號(hào)的處理中具有重要作用[6]。Gly為抑制性氨基酸可提高神經(jīng)元的保護(hù)性抑制，繼而減少海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡[7]。因此Gly和GlyR減少會(huì)誘發(fā)癲癇。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出甜菜堿治療組其Gly和GlyR均會(huì)增加。而丙戊酸鈉在增加GlyR的方面并不是很強(qiáng)，說明甜菜堿的抗癲癇機(jī)制可能與GlyR信號(hào)有關(guān)而丙戊酸鈉的作用與GlyR無關(guān)。

Halle等[8]的研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)途運(yùn)輸前后給牛飼喂甜菜堿可明顯降低運(yùn)輸中的應(yīng)激并加快體重恢復(fù)速度。甜菜堿可以通過降低體內(nèi)高半胱氨酸含量而減輕其對(duì)谷氨酸脫羧酶活性的抑制，有利于腦內(nèi)γ-氨基丁酸的合成，使中樞抑制作用加強(qiáng)，從而起到緩和應(yīng)激的作用[2]。同時(shí)甜菜堿提供甲基后生成Gly。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甜菜堿可使Gly的含量及GlyR的表達(dá)增加，從而發(fā)揮其抗抗癲癇作用。其作用大于丙戊酸鈉。

丙戊酸鈉為廣譜抗癲癇藥其作為抗癲癇首選的地位仍不可替代，但是其作用機(jī)制并不清楚，可能是與腦內(nèi)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸濃度升高有關(guān)。但是丙戊酸鈉在抗癲癇的同時(shí)有著諸多不良反應(yīng)，包括體重增加、脫發(fā)、惡心、嘔吐、肝中毒、胰腺炎、惡血質(zhì)、骨骼的無機(jī)物脫失、閉經(jīng)、不孕和致畸。對(duì)肝臟的毒性作用發(fā)生率為萬分之一，屬特質(zhì)性反應(yīng)，與劑量無關(guān)，以不適、虛弱、思睡、面部浮腫、厭食和嘔吐為先驅(qū)癥狀。發(fā)作后有消化道和非消化道兩組癥狀，消化道癥狀包括厭食、惡心、嘔吐、腹痛和黃疸；非消化道癥狀包括嗜睡、水腫和出血傾向，此時(shí)應(yīng)停藥、查肝功能。美國(guó)的丙戊酸鈉產(chǎn)品信息己將肝中毒歸入黑匣子[9]。本實(shí)驗(yàn)中丙戊酸鈉使同型半胱氨酸降低是由于丙戊酸鈉對(duì)細(xì)胞色素P450系統(tǒng)有抑制作用，從而使血中Hcy水平降低[10]。這也可能是丙戊酸鈉抗癲癇的機(jī)制之一。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甜菜堿可以通過降低大鼠血清中同型半胱氨酸的含量，增加甘氨酸的含量及其受體的表達(dá)，而發(fā)揮抗癲癇的作用；而甜菜堿是一種無毒、無害、無污染的藥物，因此在臨床應(yīng)用上有著非常廣闊的前景。

[1] 王芳芳，王淑秋.戊四氮致癇大鼠腦神經(jīng)型鈣黏附素和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-4表達(dá)的變化及靈芝孢子粉的干預(yù)作用[J].中國(guó)病理生理雜志，2011,27(5)：1003-1007.

[2] 劉燕燕，曾新安，朱思明，等.甜菜堿的生理功能與藥物活性[J].現(xiàn)代食品科技，2008,24(1):96-100.

[4] 韓遠(yuǎn)遠(yuǎn)，劉益民，王 玉.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1降低大鼠自發(fā)性癲癇發(fā)作并抑制膠質(zhì)細(xì)胞活化[J]. 中國(guó)病理生理雜志,2012,28(12):2266-2269.

[5] 黃世楷，毋望遠(yuǎn)，楊雄里,等.神經(jīng)元形態(tài)與功能-神經(jīng)生理學(xué)手冊(cè)(3)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社,1985:187-206.

[6] 趙 雪，陸大祥，戚仁斌，等.甘氨酸受體在甘氨酸抗心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷中的 作用機(jī)制研究[J].中國(guó)病理生理雜志,2006,22(11):2113-2118.

[7] 郭建榮 ，岳 云，崔健君.異丙酚對(duì)缺血再灌注損傷大鼠海馬氨基酸遞質(zhì)水平變化及神經(jīng)元凋亡的影響[J].中國(guó)病理生理雜志,2007,23(8):1547-1550.

[8] Halle I, Jeroch H. The protein turnover of different leghorn hybirds [J].Arch Tierenachr, 1993, 43(4):319-329.

[9] Hammer MA, Baltz JM. Betain is a highly effective orga-nic osmolyte but does not appear to be transported by established organic osmolyte transporters in mouse embryos[J]. Mol Reprod Dev, 2002, 62(2):195-202.

[10] Apelan T, Mansoor MA, Strandjord RE, et al. Homocystein concentrations and methionine loading in patients on antiepileptic drugs[J]. Acta Neurol Scand, 2000,101(4):217-223.

EffectsofbetaineonexpressionofGFAP,glycineandglycinereceptorinhippocampusofpentylenetetrazole-inducedepilepticrats

WANG Hui1, WANG Shu-xiang1, CUI Guo-li2, LU Chun-feng1, LIU Lei1, LIU Jun-xing1, MA Xiao-ru1, WANG Fang-fang1, LIANG Yan-feng1, WU Jia-mei1, MAO Jin-jun1, WANG Shu-qiu1

(1DepartmentofPathophysiology,SchoolofBasicMedicalSciences,JiamusiUniversity,Jiamusi154007,China;2DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofJiamusiUniversity,Jiamusi154002,China.E-mail:wang_shuq@163.com)

AIM: To study the effects of betaine on glial fibrillary acidic protein (GFAP), glycine (Gly) and glycine receptor (GlyR) expression in the hippocampus of rats with epilepsy induced by pentylenetetrazole (PTZ).METHODSForty-eight healthy male Wistar rats were randomly divided into control group, PTZ (35 mg·kg-1·d-1, intraperitoneal injection) group, PTZ+betaine (450 mg·kg-1·d-1, intragastric administration) group, PTZ+betaine (225 mg·kg-1·d-1, intragastric administration) group, PTZ+betaine (112.5 mg·kg-1·d-1, intragastric administration) group and PTZ+sodium valproate (200 mg·kg-1·d-1, intragastric administration) group. The rats in control group were intraperitoneally injected with saline at the same volume as PTZ injection, and those in control group and PTZ group

intragastric administration of saline at 1.0 mL·d-1. Rat behavior was recorded. Serum homocysteine (Hcy) level was measured. The expression of GFAP in the hippocampus was measured by immunofluorescence. Hippocampal Gly content was measured by an amino acid analysis system. The expression of GlyR was detected by immunofluorescence and Western blotting.RESULTSThere was no difference in the latency of grand mal seizures among groups (P>0.05). However, betaine treatment significantly decreased the duration of the first grand mal seizure compared with PTZ group (P<0.01). Serum Hcy level in PTZ group was significantly lowered compared with control group (P<0.01), and further decreased after betaine treatment (P<0.05). GFAP in PTZ group was significantly higher than that in control group (P<0.01), and decreased after betaine treatment (P<0.05). Gly in PTZ group was significantly lowered compared with control group (P<0.01), and increased after betaine treatment (P<0.05). The content of GlyR among groups showed the same trend as Gly.CONCLUSIONBetaine treatment shows antiepileptic effect, which may be related to its effects on the metabolites of Hcy and Gly.

Betaine; Epilepsy; Homocysteine; Glial fibrillary acidic protein; Glycine; Glycine receptors

R363

A

1000- 4718(2013)09- 1657- 05

2013- 01- 04

2013- 07- 16

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81241112)；黑龍江省研究生創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目(No. YJSCX2011-375HLJ);黑龍江教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(No.11521276)

△通訊作者 Tel： 0454-8623638; E-mail: wang_shuq@163.com

10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.09.021