樊秦娥，吳立兵

康婦涌泉顆粒(批準(zhǔn)文號(hào):鄂藥制字Z2011148)是湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院研制的一種婦產(chǎn)科用口服顆粒劑，具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、去瘀生新、通經(jīng)下乳的功效。用于產(chǎn)后氣血虛弱、四肢無力、乳汁稀少或乳腺炎初期，乳腺脹痛，防治清宮后盆腔感染等癥［1］?？祴D涌泉顆粒由黃芪、當(dāng)歸、黨參、漏蘆、大棗、玄參、青皮、白芷、小通草、炒王不留行、蒲公英、甘草等12味中藥組成。漏蘆是佐藥，該藥物為菊科植物祁州漏蘆Rhaponticum uni florum(L.)DC.的干燥根，味苦、寒、平，歸胃經(jīng)。具有清熱解毒、消癰、下乳的作用，常用于乳癰腫痛、癰疽發(fā)背、癗癘瘡毒、乳汁不通、濕痹拘欒等癥［2］。其主要藥理活性成分為β-脫皮甾酮，由于受條件的限制，該制劑到目前為止尚無定量標(biāo)準(zhǔn)。為了提高該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)試驗(yàn)對(duì)該制劑中各味藥物的主要藥理活性成分進(jìn)行含量測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

戴安UItiMate3000型高效液相色譜儀(美國戴安公司);UP5200HE超聲震蕩儀(熊貓集團(tuán)南京電子計(jì)量有限公司，500 W，50 Hz);分析天平(上海精科天平廠，F(xiàn)A2004，精度 0.000 1 g);β-脫皮甾酮對(duì)照品(中國食品藥品研究院提供，批號(hào):111746-2013212);康婦涌泉顆粒(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院制備，規(guī)格:15 g/袋，10袋/盒，批號(hào):20130310、20130312、20130314)。超純水(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院新鮮制備);甲醇為色譜純;冰醋酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［3-4］色譜柱:Diamonsil-C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流 動(dòng) 相:甲 醇-水(31∶69)，檢測(cè)波長 247 nm，流速 1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，柱溫30 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取β-脫皮甾酮對(duì)照品適量，用60%甲醇溶解制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取康婦涌泉顆粒2.0 g，置100 mL圓底燒瓶中，精密加入60%甲醇20 mL，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 精密吸取不含漏蘆的康婦涌泉顆粒2.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)溶液的制備方法制備，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取“2.2”項(xiàng)下的各溶液，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果對(duì)照品溶液、供試品溶液在同一時(shí)間有相同色譜峰出現(xiàn)，陰性樣品溶液在此處無色譜峰出現(xiàn)，樣品分離度良好，表明在該色譜條件下樣品中的其他成分對(duì)β-脫皮甾酮含量測(cè)定無干擾。見圖1。

2.4 線性方程的建立 取β-脫皮甾酮對(duì)照品用60%甲醇溶解，分別制成每1 mL含 β-脫皮甾酮5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 μg 的系列溶液，分別在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣，以濃度為縱坐標(biāo)、峰面積值為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=0.093 7X+0.183 1，r=0.999 4，β-脫皮甾酮在5.0～160 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，在“2.1”色譜條件下分別進(jìn)樣5次，記錄峰面積值，結(jié)果RSD為0.74%，表明該儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，于0、3、6、12、24 h 分別取樣，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定峰面積值，結(jié)果RSD為1.05%，說明β-脫皮甾酮對(duì)照品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)(201130310)的康婦涌泉顆粒樣品6份，每份2.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的方法制備，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)定峰面積值，結(jié)果RSD為1.22%。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)(20130310)已測(cè)知含量的康婦涌泉顆粒1.0 g(含量70.0 μg/g)于100 mL圓底燒瓶中，共9份，3個(gè)樣品一組，分別精密加入“2.2.1”項(xiàng)下濃度為20.0 μg/mL 的 β-脫皮甾酮對(duì)照品溶液 1.0、2.0、3.0 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣，記錄峰面積值，按外標(biāo)法計(jì)算β-脫皮甾酮回收率，結(jié)果見表1。

表1 康婦涌泉顆粒中β-脫皮甾酮回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9 含量測(cè)定 取3批樣品，照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，在“2.1”色譜條件分別測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 康婦涌泉顆粒中β-脫皮甾酮含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

康婦涌泉顆粒系由多種中藥組成的復(fù)方制劑，成分比較復(fù)雜，制備時(shí)經(jīng)過煎煮、濃縮、干燥、制粒等過程，煎煮時(shí)不能保證所有藥理成分完全溶出，在濃縮、干燥過程中部分藥理成分可能被破壞等，因此，對(duì)其中相關(guān)成分進(jìn)行檢測(cè)尤為重要。

β-脫皮甾酮在漏蘆中含量較低，本試驗(yàn)參考2010年版中國藥典(一部)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其進(jìn)行最低限量(≥0.04%)控制。取樣2 g用60%甲醇回流提取，目的是使樣品中所含β-脫皮甾酮能充分溶出。β-脫皮甾酮在60%甲醇中的溶解效果較好，故選用60%甲醇做溶劑。在選擇流動(dòng)相時(shí)曾用乙腈-0.03%磷酸溶液(58∶42)為流動(dòng)相，但分離度較差。后改用甲醇-水(39∶61)為流動(dòng)相［5-6］，則檢出效果良好。該方法專屬性強(qiáng)，適用于康婦涌泉顆粒中β-脫皮甾酮的質(zhì)量控制。

［1］湖北省食品藥品監(jiān)督管理局.湖北省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑質(zhì)量匯編［Z］.2000年版:304-305.

［2］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:348.

［3］孫宇，卿德剛，張娟，等.鹿草根中 β-蛻皮甾酮的含量測(cè)定［J］.藥物分析雜志，2012，32(9):1614-1616.

［4］陳玉敏，曹紅，水彩紅.HPLC法測(cè)定牛膝膠囊中β-脫皮甾酮的含量［J］.中國醫(yī)藥指南，2011，9(17):212-213.

［5］林大專，王廣樹，楊曉虹，等.牛膝中新脫皮甾酮類成分的研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2006，41(17):1295-1297.

［6］李文莉，汪文濤，雷玉萍.RH-HPLC法測(cè)定脈絡(luò)寧注射液中脫皮甾酮的含量［J］.華西藥學(xué)雜志，2001，16(4):382-383.