王桂英 李學(xué)軍

子宮內(nèi)膜異位癥是目前最常見的婦科疾病之一，其形態(tài)多樣、病變廣泛，通常按臨床病理類型分為［1］：腹膜型、卵巢型和深部結(jié)節(jié)型、特殊部位型或盆腔外型，按1985年美國生殖學(xué)會(huì)(AFS)提出的修正子宮內(nèi)膜異位癥分期法(r-AFS)分為四期。VEGF、Epo均為血管生成促進(jìn)因子，我們采用免疫組化S-P法檢測(cè)了VEGF、Epo在內(nèi)異癥組織的表達(dá)，并與r-AFS分期的關(guān)系進(jìn)行了探討，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2004年7月至2010年3月在我科因內(nèi)異癥行腹腔鏡或開腹手術(shù)，切除標(biāo)本術(shù)后經(jīng)病理檢查確診為卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的患者共30例，根據(jù)r-AFS分期法進(jìn)行分期［2］，Ⅰ期4例，Ⅱ期7例，Ⅲ期11例，Ⅳ期8例。年齡23～48歲，平均年齡(40±6)歲。所有入選對(duì)象均月經(jīng)周期規(guī)則，術(shù)前6個(gè)月內(nèi)未使用過甾體類激素或?qū)m內(nèi)節(jié)育器。標(biāo)本獲取后，立即用10%甲醛固定，乙醇脫水，石蠟包埋，并制成3～5μm厚切片備用。鼠抗人VEGF單克隆抗體、鼠抗人Epo多克隆抗體濃縮液(工作濃度1∶100)，均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。

1.2 VEGF、Epo的檢測(cè) 嚴(yán)格按試劑盒說明操作。免疫組化用微波枸櫞酸鹽修復(fù)抗原，DAB顯色，用已知陽性切片作陽性對(duì)照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 采用半定量記分標(biāo)準(zhǔn)［3］，即在低倍鏡下每張切片觀察5個(gè)視野，取其平均值為每張切片的觀察結(jié)果，根據(jù)染色強(qiáng)度和范圍計(jì)算出每張切片的得分。陽性效應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色顆粒，分布于胞漿或胞核，以著色強(qiáng)度(淺，中，深)及記數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)來判斷。具體如下：著色強(qiáng)度：淺，1分;中，2分;深，3分。陽性細(xì)胞數(shù)記分：＜1%，0分;1% ～10%，1分;11% ～50%，2分;51% ～80%，3分;＞80%，4分。最終結(jié)果判定：兩個(gè)值相加，1分，為陰性;2～3分，為弱陽性;4～5分，為陽性;6～7分，為強(qiáng)陽性。其中陰性、弱陽性、陽性、和強(qiáng)陽性分別表示不表達(dá)、弱表達(dá)、中度表達(dá)和強(qiáng)表達(dá)。結(jié)果的判定在雙盲下進(jìn)行，每張切片由兩位病理醫(yī)師分別計(jì)算得分，取其平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，并作Spearman相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

VEGF、Epo在異位內(nèi)膜組織中均呈陽性表達(dá)，VEGF主要表達(dá)于腺上皮細(xì)胞的胞漿中，少量位于周圍間質(zhì)細(xì)胞中。Epo染色陽性細(xì)胞主要集中于腺上皮細(xì)胞，在胞漿中表達(dá)明顯，周圍間質(zhì)中未見表達(dá)。

2.1 VEGF在內(nèi)異癥不同r-AFS分期中的表達(dá) 內(nèi)異癥患者不同r-AFS分期VEGF的表達(dá)不同，即Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ～Ⅳ期相比，Ⅲ～Ⅳ期稍高于Ⅰ～Ⅱ期，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 VEGF在內(nèi)異癥不同r-AFS分期中的表達(dá)±s

表1 VEGF在內(nèi)異癥不同r-AFS分期中的表達(dá)±s

Ⅲ～Ⅳ(n=21)4.0±1.8

2.2 Epo在內(nèi)異癥不同r-AFS分期中的表達(dá) Epo在內(nèi)異癥患者r-AFS分期中的表達(dá)與VEGF不同，Ⅰ～Ⅱ期Epo的表達(dá)強(qiáng)度比Ⅲ～Ⅳ期高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 Epo在內(nèi)異癥不同r-AFS分期中的表達(dá)±s

表2 Epo在內(nèi)異癥不同r-AFS分期中的表達(dá)±s

Ⅲ～Ⅳ(n=21)2.2±1.9

2.3 VEGF、Epo的表達(dá)與r-AFS分期的相關(guān)關(guān)系 VEGF、Epo的表達(dá)與r-AFS分期無明顯相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)。見表3。

表3 VEGF、Epo的表達(dá)與r-AFS分期的相關(guān)關(guān)系

3 討論

關(guān)于VEGF的表達(dá)在內(nèi)異癥的不同r-AFS分期中是否有變化，目前尚無一致的意見，劉木彪等［4］研究發(fā)現(xiàn)，VEGF在血清中的含量與內(nèi)異癥的r-AFS分期有關(guān)，r-AFS分期越高，VEGF的含量越高，二者呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，VEGF在內(nèi)異癥組織中的表達(dá)Ⅲ～Ⅳ期稍高于Ⅰ～Ⅱ期，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，這可能與本研究選擇的病理類型均為卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫有關(guān)，因?yàn)槁殉沧訉m內(nèi)膜異位囊腫病程比較長(zhǎng)，病灶纖維化使局部血供不足，導(dǎo)致腺上皮萎縮，使間質(zhì)血供減少，與早期病灶相比VEGF的表達(dá)并未見明顯升高。

Matsuzaki等［5］研究證實(shí)，內(nèi)異癥患者腹腔液中Epo的含量隨r-AFS分期的增高而減少，Epo的表達(dá)與r-AFS的分期呈負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，內(nèi)異癥患者不同r-AFS分期其表達(dá)強(qiáng)度不同，Ⅰ～Ⅱ期稍高于Ⅲ～Ⅳ期，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，支持上述觀點(diǎn)。說明Epo在內(nèi)異癥的發(fā)病早期起作用，可能是內(nèi)異癥發(fā)病過程中的始動(dòng)因素。

VEGF、Epo的表達(dá)與內(nèi)異癥的r-AFS分期無明顯相關(guān)性。但這并不說明和內(nèi)異癥的活性無相關(guān)性，因?yàn)閞-AFS分期是根據(jù)內(nèi)異癥病變的嚴(yán)重程度，粘連和囊腫進(jìn)行評(píng)分，并不包括病灶的活性和病理特點(diǎn)，r-AFS評(píng)分高并不代表異位灶的活性高。因此一些學(xué)者認(rèn)為目前r-AFS評(píng)分系統(tǒng)還有待進(jìn)一步完善。

1 郎景和.子宮內(nèi)膜異位癥的研究與設(shè)想.中華婦產(chǎn)科雜志，2003，38：478-480.

2 樂杰主編.婦產(chǎn)科學(xué).第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004.354-361.

3 Zagzag D，Zhong H，Scalzitti JM，etal.Expression of hypoxia-inducible factor 1α in brain tumors.Association with angiogenesis invasion，and progression.Cancer，2000，88：2606-2618.

4 劉木彪，何援利，彭冬先.子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與內(nèi)抑素的表達(dá).第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，24：69-71.

5 Matsuzaki S，Murakami T，Uehara S，etal.Erythropoietin concentrations are elevated in the peritoneal fluid of women with endometriosis.Hum Reprod，2001，16：945-948.