榮立新，魯 爽，劉詠梅

(中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京 100053)

北沙參又名海沙參、野沙參、萊陽沙參、遼沙參等，為傘形科植物珊瑚菜 Glehnia littoralis Fr.Schmidt ex Miq.的干燥根，具有養(yǎng)陰清肺、益胃生津之功效，主要用于肺熱燥咳、勞嗽痰血、熱病津傷口渴。北沙參主要分布于山東、河北、內(nèi)蒙，在遼寧、江蘇、廣東、福建等省區(qū)也有分布，其中以山東萊陽栽培歷史最為悠久、產(chǎn)量大、質(zhì)量好，故又名“萊陽沙參”。傳統(tǒng)的藥材加工方法是在夏秋兩季采挖，除去須根，洗凈，稍晾，置沸水中燙后除去外皮，或洗凈直接干燥［1］。研究表明，多糖是其中主要成分，可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能［2，3］。本實驗分別對去皮北沙參和未去皮北沙參中的粗多糖提出，得去皮北沙參粗多糖(GLP1)和未去皮北沙參粗多糖(GLP2)。并以甲亢型陰虛小鼠為研究對象，比較GLP1和GLP2對陰虛小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫功能的影響，揭示其滋陰作用的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，以此改進(jìn)北沙參炮制工藝，為今后北沙參的炮制加工和臨床應(yīng)用開發(fā)提供實驗依據(jù)［4］。

1 材料與儀器

1.1 動物

6～8周齡雄性昆明種小鼠，體質(zhì)量20±2g，購于濰坊醫(yī)學(xué)院實驗動物中心(動物合格證號魯動環(huán)字200007001號)。

1.2 藥物

北沙參采自于山東省萊陽市胡城北沙參種植基地，經(jīng)鑒定為傘形科植物珊瑚菜(Glehnia littoralis F.Schmidt ex Miq.)的根。去皮北沙參:取新鮮北沙參根略晾、理順，先將根細(xì)端置沸水中略燙，再將整體置沸水中煮約5～10 min，至根皮易撥離時取出，刮去皮、干燥。不去皮北沙參:取新鮮北沙參根，用清水洗凈、理順、干燥。

1.3 試劑

小牛血清(杭州四季青生物材料公司)，甲狀腺素片(萊陽生物化學(xué)制藥廠)，利血平(上海醫(yī)科大學(xué)紅旗制藥廠)，PRMI-1640培養(yǎng)液(美國Gibico公司)，MTT、ConA(華美生物工程公司)，羊抗小鼠IgM-生物素(北京中山生物公司)，所用試劑均為分析純。

1.4 主要儀器

J2-MC BECKMAN高速冷凍離心機(jī)(Bechman公司)，HH型電熱恒溫水浴鍋(江蘇金壇市宏凱儀器廠)，Model450型酶標(biāo)儀(美國BIO-RAD公司)，CO2培養(yǎng)箱(丹麥HETO公司)，超凈工作臺(蘇州凈化設(shè)備廠)。

2 方法

2.1 GLP的提取及含量測定

圖1顯示，分別稱取去皮和不去皮北沙參根250g，采用文獻(xiàn)法［5］分別制得去皮北沙參粗多糖(GLP1)和不去皮北沙參粗多糖(GLP2)，檢測GLP1和GLP2含量分別為63.88%和47.17%。

圖1 去皮和不去皮加工GLP的含量測定

2.2 動物分組及給藥

小鼠64只隨機(jī)分為正常對照組(生理鹽水20 mL/kg)、模型組(生理鹽水20 mL/kg)、GLP1高劑量組(800mg/kg)、GLP1中劑量組(600 mg/kg)、GLP1低劑量組(400 mg/kg)、GLP2高劑量組(800 mg/kg)、GLP2中劑量組(600 mg/kg)、GLP2低劑量組(400mg/kg)8組，每組8只。每日上午除正常對照組灌服生理鹽水外，其余各組均灌胃給予甲狀腺素片150 mg/kg和利血平1 mg/kg，下午GLP各劑量組分別灌胃給予受試藥物，連續(xù)6d，各組動物實驗前后各稱量體質(zhì)量1次，計算體質(zhì)量增加值并觀察其外觀變化。

2.3 檢測各組小鼠脾臟NK細(xì)胞殺傷活力

將各組動物于給藥后第7天處死，取脾臟組織制備脾細(xì)胞懸液，參照文獻(xiàn)［6］采用MTT比色法檢測各組小鼠NK細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷率(%)。

2.4 檢測各組小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能

將各組小鼠給藥后第7天處死，取脾臟組織制備脾細(xì)胞懸液，參照文獻(xiàn)［6］采用MTT比色法檢測各組小鼠刺激指數(shù)(SI)。

2.5 檢測各組小鼠血清抗綿羊紅細(xì)胞抗體IgM含量

將各組小鼠給藥后第7天處死，取小鼠血清，參照文獻(xiàn)［6］采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)檢測抗綿羊紅細(xì)胞抗體IgM的含量。

2.6 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，采取兩均數(shù)比較t檢驗。

3 結(jié)果

3.1 GLP1、GLP2滋陰作用的整體效應(yīng)觀察

表1顯示，小鼠給予甲狀腺素和利血平造模4 d后，開始出現(xiàn)體質(zhì)量減輕、身體瘦長、躁動不安，部分出現(xiàn)兩眼不張、行動遲緩甚至死亡。GLP1和GLP2各劑量組動物各種虛象較輕，正常對照組動物外觀和行為均正常。模型組動物體質(zhì)量增加值顯著低于正常對照組，GLP1和GLP2各劑量組的體質(zhì)量增加顯著高于模型組，表明陰虛動物體質(zhì)量降低，而GLP1和GLP2均能顯著增加其體質(zhì)量且呈量效關(guān)系，其中GLP1和GLP2高劑量組接近正常水平，2種北沙參粗多糖(GLP1、GLP2)各同劑量之間的作用比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3.2 GLP1、GLP2對模型小鼠脾臟NK細(xì)胞殺傷活力的影響

表1顯示，模型小鼠脾臟NK細(xì)胞殺傷活力明顯低于正常對照組(P＜0.01)，GLP1和GLP2的高劑量組均可顯著提高陰虛小鼠的NK殺傷率(P＜0.05)，接近正常值。2種北沙參粗多糖(GLP1、GLP2)同劑量之間的作用比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3.3 GLP1、GLP2對模型小鼠T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響

表1顯示，小鼠造模后，其刺激指數(shù)明顯降低(P＜0.01)，GLP1和GLP2高、中劑量組對陰虛小鼠的脾臟T細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能均有顯著增強(qiáng)的作用(P＜0.01，P＜0.05)，接近正常水平。2種北沙參粗多糖(GLP1、GLP2)各同劑量之間的作用比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3.4 GLP1、GLP2對模型小鼠血清抗綿羊紅細(xì)胞抗體IgM含量的影響

表2顯示，模型小鼠血清IgM抗體水平與正常組比較明顯降低(P＜0.05)，2種北沙參多糖的中劑量和低劑量組對IgM抗體的生成有顯著增強(qiáng)作用(P＜0.05)。2種北沙參粗多糖(GLP1、GLP2)的各同劑量之間的作用比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

4 討論

經(jīng)調(diào)查，北沙參沸水燙后去皮的加工方法距今已有二三百年的生產(chǎn)加工歷史。目前北沙參加工方法只是在民間使用，并沒有經(jīng)科學(xué)驗證。去皮的原因和目的，一般認(rèn)為一是為了外觀好看，去皮北沙參外表黃白色，像生曬人參一樣;二是減少氣味;三是不易生蟲。1960年衛(wèi)生部藥政局復(fù)湖北商業(yè)廳中西藥管理處的電文中指出:“北沙參可不刮皮使用?！苯?jīng)研究證明，北沙參帶皮使用可提高療效，并可省工省時、減少因加工造成的藥材損失，這在《中華人民共和國藥典》1990年版及以后的各版藥典中均有記載［7］。李峰等［8］也證實，在北沙參的醇溶性浸出物和水溶性浸出物中，去皮北沙參與帶皮北沙參的浸出物含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明“去皮”對北沙參浸出物含量無明顯影響。因此2010版《中華人民共和國藥典》收錄北沙參項下既保留了這種傳統(tǒng)的加工方法，又提出不去外皮的產(chǎn)地加工方法，即洗凈直接干燥后使用［9］。

表1 GLP干預(yù)對各組小鼠體質(zhì)量變化和各項免疫功能指標(biāo)的影響(±s)

表1 GLP干預(yù)對各組小鼠體質(zhì)量變化和各項免疫功能指標(biāo)的影響(±s)

注:與模型組比較:＊＊P＜0.01，*P ＜0.05;與正常組比較:△P＜0.05

組別 例數(shù) 給藥劑量/(mg/kg) 體質(zhì)量增加值/g NK細(xì)胞殺傷率(%)T細(xì)胞轉(zhuǎn)化指數(shù)(SI) IgM(lgR)正 常 對 照 組 8 5.25±1.04＊＊ 30.01±0.05＊＊ 2.30 ±0.58＊＊ 4.10±0.02*陰 虛 模 型 組 8 2.57±1.07 18.73±0.03 1.08±0.15 3.60±0.04模 型 +GLP 1高 劑 量 組 7 800 4.71±1.11＊＊ 27.52±0.44＊＊ 1.67±0.36＊＊ 4.05±0.03模 型 +GLP 1中 劑 量 組 8 600 3.75±0.89* 22.10±0.09 1.46±0.32＊＊ 3.35±0.05＊△模 型 +GLP 1低 劑 量 組 7 400 3.43±1.40 20.47±0.17 1.03±0.18 3.15±0.03＊△模 型 +GLP 2高 劑 量 組 8 800 4.03±1.30＊＊ 25.6±0.02＊＊ 1.39±0.20＊＊ 3.95±0.02模 型 +GLP 2中 劑 量 組 8 600 3.89±0.99* 20.89±0.06 1.24±0.07* 3.25±0.05＊△模 型 +GLP 2低 劑 量 組 8 400 3.00±1.20 21.57±0.11 1.02±0.17 3.10±0.02＊△

文獻(xiàn)記載，北沙參可增強(qiáng)細(xì)胞免疫、體液免疫功能［10～12］。本實驗分別從去皮加工北沙參和未去皮加工北沙參的根藥材中提取粗多糖GLP1和GLP2，觀察其對陰虛癥小鼠免疫功能的影響。結(jié)果表明，GLP1和GLP2均可使陰虛小鼠體質(zhì)量顯著增加;顯著增強(qiáng)甲亢型陰虛小鼠脾臟NK細(xì)胞殺傷率和T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能，提高血清IgM含量，且2種北沙參粗多糖(GLP1、GLP2)各相同劑量組之間的作用比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，說明北沙參的加工過程可省略“去皮”這道工序。

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