張文進(jìn)

乳腺癌是性激素依賴性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后都與性激素受體有著密切的關(guān)系。研究證明雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要的促進(jìn)作用，成為乳腺癌的獨立預(yù)后因子，用于指導(dǎo)內(nèi)分泌治療及判斷預(yù)后。絕經(jīng)后女性雌激素水平大量減少，但是研究發(fā)現(xiàn)女性乳腺癌的發(fā)病率并未減少。這是因為女性體內(nèi)不光有ER，還有雄激素受體(AR)，特別是絕經(jīng)后女性，雌激素大量減少，而AR沒有受到明顯影響或者僅有少量下降。雄激素在一些研究中顯示對乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有重要作用，但目前的研究結(jié)果不盡相同［1，2］。此外內(nèi)分泌治療對ER、PR陰性患者是無效的，是否還有其他途徑可走，一直是許多學(xué)者研究的熱點。因此我們運用免疫組化法，對乳腺癌組織進(jìn)行AR檢測，進(jìn)一步了解AR與乳腺癌的關(guān)系，為乳腺癌的治療及預(yù)測預(yù)后積累資料，提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院乳腺中心2008年6月至2009年6月確診為乳腺癌的320例患者的臨床資料，均為女性，術(shù)前均未行任何治療，無其他合并惡性腫瘤，均為第一次發(fā)病，年齡28～75歲，平均年齡51.3歲;其中浸潤性導(dǎo)管癌257例，浸潤性小葉癌32例，髓樣癌13例，黏液腺癌10例，其他8例。術(shù)后切除標(biāo)本送我院病理科行石蠟病理及免疫組化檢測。

1.2 方法 以10%甲醛溶液固定標(biāo)本，切4μm厚的石蠟切片，同時保留1張連續(xù)切片作HE染色觀察;用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶法(SP法)檢測乳腺癌組織中AR、ER、PR、Ki-67、Her-2蛋白的表達(dá)。用已知陽性染色切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照，省去一抗作為空白對照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 AR陽性表達(dá)為棕黃色細(xì)顆粒位于細(xì)胞核內(nèi)。根據(jù)染色強度及陽性細(xì)胞數(shù)量來分級：陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為(-)，10% ～25%為(+)，26% ～50%為(++)，＞50%為(+++)。最后將(-)為陰性，(+)～(+++)為陽性。

1.3.2 ER和PR陽性表達(dá)為棕黃色顆粒位于細(xì)胞核內(nèi)。陽性程度按整張切片中陽性腫瘤細(xì)胞所占所有腫瘤細(xì)胞的比例分級：陽性細(xì)胞數(shù) ＜5%為(-)，5% ～30%為(+)：30% ～60%為(++)，＞60%為(+++)。最后將(-)為陰性，(+)～(+++)為陽性。

1.3.3 Ki-67陽性表達(dá)為黃棕色顆粒位于細(xì)胞核內(nèi)。陽性程度按整張切片中陽性腫瘤細(xì)胞所占所有腫瘤細(xì)胞的比例分級：陽性細(xì)胞數(shù) ＜5%為(-)，5% ～25%為(+)，25% ～50%為(++)，＞50%為(+++)。最后將(-)為陰性，(+)～(+++)為陽性。

1.3.4 C-erbB-2陽性表達(dá)為棕黃色顆粒位于細(xì)胞膜上。陽性標(biāo)準(zhǔn)及陽性強度參照FDA推薦的Hercep Test結(jié)果評分，根據(jù)陽性物質(zhì)著色程度及陽性細(xì)胞數(shù)分為4級：(-)為0～數(shù)個細(xì)胞的細(xì)胞膜呈淺黃色;(+)為超過10%的癌細(xì)胞胞膜染色，染色間斷分布，未環(huán)繞胞膜(可見細(xì)胞膜散在淺黃或棕黃色細(xì)顆粒);(++)為超過10%的癌細(xì)胞胞膜弱到中度陽性，染色連續(xù)并環(huán)繞整個胞膜(可見細(xì)胞膜上棕黃色細(xì)顆粒及粗顆粒);(+++)超過10%的癌細(xì)胞胞膜強陽性，染色連續(xù)并環(huán)繞整個胞膜(大部分陽性細(xì)胞的細(xì)胞膜可見深棕色或褐色團塊)。最后將(-)為陰性，(+)～(+++)為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，采用秩和檢驗和Spearman相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AR表達(dá)率 AR主要定位于乳腺癌細(xì)胞核中，也有一部分AR在細(xì)胞漿中，AR在乳腺癌中的陽性表達(dá)率為69.38%(222/320)。

2.2 AR與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 AR表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)分級呈負(fù)相關(guān)(r=-0.403，P ＜0.05;r=-0.447，P ＜0.05)。與腫瘤大小有關(guān)聯(lián)(腫瘤≤2 cm者，AR陽性率92.5%，腫瘤大小2～5 cm者AR陽性率為72.2%，腫瘤≥5 cm者AR陽性率為53.3%。三者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000);與年齡、是否絕經(jīng)、病理學(xué)類型、有無脈管瘤栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P ＞0.05);與ER、PR、Her-2、Ki-67的表達(dá)無相關(guān)性(P ＞0.05)。見表1。

表1 AR蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理的關(guān)系 例

3 討論

AR屬于核受體超家族成員，位于Xq11.2-q12，是乳腺癌的4個遺傳敏感性基因之一［3］。大部分乳腺癌組織都表達(dá)AR，尤其在乳腺癌細(xì)胞中，AR的表達(dá)比ER還要廣泛［4］。目前越來越多的證據(jù)表明雄激素可能通過與雄激素受體結(jié)合而直接發(fā)揮抑制乳腺組織以及乳腺癌細(xì)胞的增殖作用［5，6］。而AR的突變則導(dǎo)致雄激素通過AR對乳腺癌細(xì)胞生長產(chǎn)生的抑制作用減弱或喪失。反之雄激素的一些具雌激素活性的代謝產(chǎn)物和雌激素可通過ER刺激乳腺癌細(xì)胞生長，為導(dǎo)致乳腺癌進(jìn)一步發(fā)生發(fā)展的原因［7］。本研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中的AR的表達(dá)與組織學(xué)分級、TNM分期呈負(fù)相關(guān)，提示隨著AR表達(dá)程度的增高，預(yù)示腫瘤的惡性程度較低，患者預(yù)后越好，與文獻(xiàn)報道［8，9］相同。AR表達(dá)還與腫瘤大小有關(guān)聯(lián)，腫瘤≤2 cm者，AR陽性率79.9%，腫瘤大小在2～5 cm者AR陽性率為66.9%，腫瘤≥5 cm者AR陽性率為63.6%。三者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)提示體積越小的腫瘤中AR表達(dá)的越多。Agoff等［10］的研究也顯示AR在較小的腫瘤中有更高的表達(dá)率。推測AR可能是乳腺癌預(yù)后良好的一個指標(biāo)。

本研究還發(fā)現(xiàn)，AR的表達(dá)與ER、PR的陽性表達(dá)率呈正相關(guān)。乳腺癌中AR大多與ER、PR同時表達(dá)，只有少于10%的癌組織單獨表達(dá)AR。Kuenen-Boumeester等［11］應(yīng)用AR的單克隆抗體經(jīng)免疫組化法測定100例乳腺癌患者腫瘤組織中的AR，發(fā)現(xiàn)76%為AR陽性，該結(jié)果與我們的研究結(jié)果相近，其中，53%表現(xiàn)為AR、ER、PR全部陽性，只有9%只表達(dá)AR，另外，13%的腫瘤不表達(dá)AR、ER、PR的任何受體，全部為III期腫瘤。提示若腫瘤表達(dá)AR則預(yù)后較好。1935年Murlin等報道引用雄激素對晚期乳腺癌有一定療效，對絕經(jīng)后晚期的患者有效率為20%～30%。激素受體陽性者有效率為46%，陰性者僅為8%［12］。因此，AR成為激素治療的一個重要指標(biāo)。

AR在乳腺癌組織中廣泛表達(dá)，其基本結(jié)構(gòu)與功能，及其與疾病關(guān)系的研究已有很大進(jìn)展，但如何與其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用，參與雄激素的各個生理過程，其各種突變與疾病的關(guān)系，如何影響乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及治療，均有待于進(jìn)一步深入研究。

1 Agoffs N，Swanson PE，Linden H，et al.Androgen receptor expression in estrogen receptor-negative breast cancer.Immunohistochemical，clinical，and prognostic associations.Am J Clin Pathol，2003，120：725-731.

2 Moinfar F，Okcu M，Tsybrovskyy O，et al，Androgen receptors frequetly are expressed in breast carcinomas：potential relevance to new therapeutic strategies.Cancer，2003，98：703-711.

3 VihkoR，Apter D.Endogenous steroids in the pathophysiology of breast cancer.CritRev Oncol Hematol，1989，9：1-16.

4 Ando S，De Amicis F，Rago V，et al.Breast cancer：from estrogen to androgen receptor，Mol Cell Endocer，2002，193：121-128.

5 Labrie F，Dupont A，Belanger A.complete androgen blockade for the treatment of prostate cancer.New York：Lippincott，1985.193-217.

6 王平.乳腺癌雄激素受體的研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊，1998，25：297-299.

7 Riva C，dainese E，Caprara G.Immunohistochemical study of angrogen receptors in breast carcinoma.Evidence of their frequent expression in lobular carcinoma.Virchows Arch，2005，447：695-700.

8 Yoshinari O，Eishu H.Androgen receptor expression in breast cancer：relationship with clinicopathological factors and biomarker.Int J Clin Oncol，2008，13：431-435.

9 Isola JJ.Immunohistochemical demonstration of androgen recepter in breast cancer and its relationship to other prognostic factors.J Pathol，1993，170：31-35.

10 Agoff SN，Swanson PE，Linden H，et al.Androgen Receptor Expression in Estrogen Receptor Negative Breast cancer：Immunohistochemical，Clinical，and Prognostic Associations.Am Jclin Pathol，2003，120：725-731.

11 Kuenen-Boumeester V.Vander kwast TH，van Putten WL，et al.Immunhistochemical determin ation of cntrogen receptors in relation to oestrogen and progesterone receptors in female breast Cancer.Int J Cancer，1992，52：581-584.

12 李樹玲主編.乳腺腫瘤學(xué).第1版.北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2007.130.