李艷麗

(佳木斯大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154002)

抑郁癥是各種原因引起的以抑郁為主要癥狀的心境障礙或情感障礙[1]。臨床表現(xiàn)為情緒低落、思維遲鈍、言語動作減少、自罪感、工作失去興趣、自覺無用、常有自殺傾向,與癌癥及艾滋病并駕齊驅(qū),被公認(rèn)為是新世紀(jì)的三大疾病。中醫(yī)認(rèn)為其病因是肝失疏泄、肝氣不舒;心神失常、心氣不足。臨床常用疏理肝臟氣機(jī),恢復(fù)肝功能,安神養(yǎng)心、補(bǔ)心脾,滋補(bǔ)肝腎的中藥復(fù)方制劑為主。中藥復(fù)方制劑由于化學(xué)成分多,相互之間起協(xié)同作用可以彌補(bǔ)西藥易產(chǎn)生耐藥性和副作用明顯的缺點,在治療抑郁癥等精神疾病中有著不可替代的作用和廣泛的前景。逍遙散主要功效為疏肝解郁,在臨床上廣泛應(yīng)用于抑郁癥的治療,但實驗研究甚少,本實驗通過慢性應(yīng)激和隔離孤養(yǎng)復(fù)制抑郁癥大鼠模型,來探討逍遙散治療抑郁癥的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

①實驗動物:健康雄性清潔級 SD大鼠 72只 ,體重(200±30)g,由佳木斯大學(xué)實驗中心提供,合格證號:SCXK-(黑)2010-0008。實驗過程中動物自由攝食和飲水 (禁食、禁水應(yīng)激除外 ),室溫18～24℃(冷、熱應(yīng)激除外),相對濕度60%～

70%。②實驗藥品:處方飲片均購自北京同仁堂制藥集團(tuán)哈爾濱藥店,經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院陳孝忠副教授鑒定。遵照《太平惠民和劑局方》原文,逍遙散的制備方法為:準(zhǔn)確稱取柴胡15g,當(dāng)歸15g,白芍 15g,白術(shù) 15g,茯苓 15g,甘草7.5g,于中草藥粉碎機(jī)中粉碎成最粗粉,加水1500 mL煮沸,保持沸騰 20min,加入 5g煨姜和5 g薄荷,再保持沸騰煎煮10 min,煎煮液過 5層紗布,濾液濃縮至 2g/mL(按生藥量計)。陽性對照藥氯丙咪嗪購于同泰藥店(湖南洞庭藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn) ,批號:99026)。③實驗儀器及試劑:TGL-16G-C型高速臺式冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);電子天平(沈陽龍騰電子公司);電擊箱(北京醫(yī)科院藥研所);石蠟切片機(jī)(萊卡2135型 德國);顯微攝影系統(tǒng)(OlymPus B×60日本);醫(yī)學(xué)數(shù)碼圖像分析系統(tǒng) (麥克奧迪廈門公司)。DAB濃縮型試劑盒(中杉試劑有限公司);兔抗人 TNF-α抗體、兔抗 c-fos抗體(中杉試劑有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組

Wistar大鼠40只,佳木斯大學(xué)實驗動物中心提供,飼養(yǎng)7d后 ,參考體重和 open-field評分,分為空白組、模型組、陽性對照組,逍遙散組,共計4組,每組10只。于造模 7d后,連續(xù)灌胃21d。大鼠給藥量參考成人體表面積與大鼠體表面積比例換算,以成人1日生藥量為準(zhǔn)。陽性對照組:給予0.36mg·kg-1·d-1氯丙咪嗪 ,逍遙散藥液給予 5mL·kg-1·d-1。正常組、模型組給予等體積生理鹽水。每日1次 ,連續(xù)給藥21d。每7d復(fù)測體重1次,根據(jù)體重變化更新灌胃劑量。

1.2.2 模型制備[3]

正常對照組每籠飼養(yǎng)5只,在實驗中不接受任何刺激。其余各組每籠1只。在實驗的 28d內(nèi) ,接受 7種不同的慢性應(yīng)激,每天隨機(jī)選取 1種,同種刺激不連續(xù)出現(xiàn),使大鼠不能預(yù)料將發(fā)生的刺激,包括:足底電擊、4℃ 冰水游泳、傾斜鼠籠、潮濕飼養(yǎng)、晝夜顛倒、禁水 12h、禁食 12h。

1.2.3 觀測指標(biāo)

1.2.3.1 糖水消耗量[4]:在實驗開始第0天、28天進(jìn)行,實驗開始前24h對各組大鼠禁食,禁水,用含1%濃度的蔗糖水作為大鼠的飲用水,每瓶 150mL,實驗當(dāng)天晚 7點開始,做好標(biāo)記,次日早7點記錄所有瓶中剩余蔗糖水量,計算出糖水消耗量。

1.2.3.2 大鼠海馬 TN F-α和 c-fos的表達(dá):實驗第28天,大鼠稱得體重及行為學(xué)測試后,立即斷頭取雙側(cè)海馬,置于10%甲醛中固定,石蠟包塊,進(jìn)行免疫組化測定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)均采用 SPSS 15.0軟件進(jìn)行單因素方差分析統(tǒng)計學(xué)處理,結(jié)果均以 (±s)表示。

2 結(jié)果

逍遙散對大鼠糖水消耗的影響見表1。逍遙散對大鼠海馬 TNF-α和 c-fos表達(dá)水平的影響,見表2。

表1 逍遙散對大鼠糖水消耗的影響(mL,±s,n=12)

表1 逍遙散對大鼠糖水消耗的影響(mL,±s,n=12)

注:與模型組比較,★★P ＜0.01。

組別 第0天 第28天空白組 59.5±3.45 58.05±3.87★★模型組 60.83±6.81 30.53±3.09陽性對照組 61.08±5.76 46.52±2.73★★逍遙散組 59.92±4.34 51.70±2.95★★

表2 逍遙散對大鼠海馬 TNF-α和 c-fos表達(dá)水平的影響(±s,n=12)

表2 逍遙散對大鼠海馬 TNF-α和 c-fos表達(dá)水平的影響(±s,n=12)

注:與模型組相比,★★P ＜ 0.01;★P ＜ 0.05。

組別 TNF-α陽性細(xì)胞面密度×100陽性細(xì)胞面密度×100空白組 0.84±0.12★★ 0.52±0.09模型組 1.55±0.18 0.96±0.11★★陽性對照組 1.14±0.16★★ 0.61±0.13★★高劑量組 1.02±0.13★★ 0.58±0.20★

3 討論

抑郁癥是一種常見的精神疾病,主要表現(xiàn)為情緒低落、興趣減低、悲觀、思維遲緩、缺乏主動性、自責(zé)自罪、飲食、睡眠差、擔(dān)心自己患有各種疾病、感到全身多處不適、嚴(yán)重者可出現(xiàn)自殺念頭和行為。其發(fā)病機(jī)制尚無定論,主要有單胺假說[5]、神經(jīng)遞質(zhì)受體假說[6]、神經(jīng)內(nèi)分泌功能學(xué)說[7]、免疫系統(tǒng)假說[8]等。本實驗通過慢性應(yīng)激和隔離孤養(yǎng)復(fù)制抑郁癥大鼠模型,來探討逍遙散治療抑郁癥的作用機(jī)制和抑郁癥的發(fā)病機(jī)制。與空白組相比,模型組大鼠體重減輕、垂直、水平測試得分明顯減少、糖水消耗減少;同時模型組大鼠出現(xiàn)類似抑郁癥的癥狀,說明抑郁癥模型較理想。

越來越多的研究推測與免疫激活相關(guān)的細(xì)胞因子分泌可能引起抑郁癥。TNF-α等前炎癥性細(xì)胞因子通過激活下丘腦室旁核中含促腎上皮質(zhì)激素釋放激素神經(jīng)元,促使腺垂體釋放促腎上腺皮質(zhì)激素,從而活化 HPA軸,導(dǎo)致抑郁癥。有研究顯示[9],當(dāng)機(jī)體遭受疼痛、缺氧、寒冷等刺激時,使大腦海馬的痛感受性神經(jīng)元被激活,從而導(dǎo)致海馬神經(jīng)元細(xì)胞過度增殖,c-fos蛋白的表達(dá)增加,啟動 CasPase級聯(lián)反應(yīng),最終激活 CasPase-3,導(dǎo)致海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。本實驗結(jié)果表明逍遙散可增加模型大鼠體重增長速度、糖水消耗及行為學(xué)運動得分,有顯著性差異。逍遙散能降低海馬 TNF-α和 c-fos的表達(dá),其抗抑郁機(jī)制可能是與調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能、抑制海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡和減少腦損傷有關(guān)。

[1]龔紹麟.抑郁癥 [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003,5

[2]許濟(jì)群.方劑學(xué) [M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1985,118

[3]張均田.現(xiàn)代藥理實驗方法(上冊)[M].北京:北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1998,1061-1062

[4]Winner P.Validity reliability and utility of the chronic mild stress model of depresson:a 10-year review and evaluation[J].Psychophar-macology(Berl),1997,134(4):319-329

[5]Schildkraut J J.The catecholamine hypothesis of affective disorders:areview of supporting evidence[J].Am J Psychiatry,1965,122(5):509-512

[6]Sargent P A,Kjaer K H,Bend C J,et al.Brain serotonergic neurotransmission in depression,hippocampusal pathophysiology,mirrorglobal brain alteration[J].Bio Psychiatry,2008,48(7):801-812

[7]Steiger A,Holsboer F.Nocturnal Secretion of prolactin and cortisol and the sleep EEC in patients with major endogenous depression during an acute episode and after full remission[J].Psychiatry Res,1997,72(2):81-88

[8]Maes M,Bosmans E,Meltzer H Y,et al.Intertlekin-1β /αput active mediator of HPA axis hyperactivity in major depression[J].Am J Psychiatry,1993,150(10):1189-1192

[9]盧靜戴,體俊,曾因明.c-fos基因表達(dá)的相關(guān)機(jī)制和意義 [J].國外醫(yī)學(xué),2005,25(5):273-275