樊凱芳 趙建平 馮振宇

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030024；2.山西中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，山西 太原 030013）

湯劑作為傳統(tǒng)中藥劑型，雖具有吸收快、療效好、隨證加減等優(yōu)點(diǎn)，但亦有服用攜帶不便、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不明等缺點(diǎn)。中藥配方顆粒是以符合炮制規(guī)范的優(yōu)質(zhì)藥材為原料，采用現(xiàn)代高新技術(shù)提取、濃縮、制粒而成的產(chǎn)品，具有可直接沖服、使用及攜帶方便等優(yōu)點(diǎn)，在臨床使用逐漸增多。玉屏風(fēng)散具有益氣固表、祛風(fēng)止汗、扶正固本功效，能促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖分化，對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫均有增強(qiáng)作用［1］。為給中藥配方顆粒替代中藥飲片提供依據(jù)，本研究通過實(shí)驗(yàn)，將玉屏風(fēng)散配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)飲片湯劑對(duì)免疫抑制小鼠的CD4+T，CD8+T的影響進(jìn)行了比較。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 昆明種小白鼠，6～8周，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄各半，由中國食品藥品檢定研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源研究所提供，許可證號(hào)：scxk20090017。

1.2 藥物 玉屏風(fēng)散由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)組成，中藥飲片、配方顆粒（由同批次相應(yīng)飲片制備而成），均由廣州一方制藥有限公司提供。傳統(tǒng)飲片湯劑：黃芪30 g，白術(shù)30 g，防風(fēng)15 g，共計(jì)75 g/d，按傳統(tǒng)煎煮法制成水煎液，并濃縮至含生藥0.5、1 g/mL兩種濃度。配方顆粒湯劑：取與飲片劑量相當(dāng)?shù)呐浞筋w粒（黃芪顆粒6 g，白術(shù)顆粒9 g，防風(fēng)顆粒3 g），加水（80～100 ℃）配制成相應(yīng)的濃度（同傳統(tǒng)飲片）。

1.3 儀器與試劑 JA5003型電子分析天平（上海精科天平廠）；DDL-5冷凍離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；電熱恒溫培養(yǎng)箱 （上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；Facscalibur流式細(xì)胞儀（BD公司）；酶標(biāo)儀（Laysystems Multiskan As-cent）。環(huán)磷酞胺（上海華聯(lián)制藥有限公司）；生理鹽水（山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)1D07091609）；FITC標(biāo)記的大鼠抗小鼠CD8單克隆抗體 （美國EB公司）；PE標(biāo)記的大鼠抗小鼠CD4單克隆抗體 （美國EB公司）。

1.4 分組與造模 72只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組、模型組、玉屏風(fēng)散傳統(tǒng)飲片湯劑低、高劑量組和配方顆粒湯劑低、高劑量組，每組12只。動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng)1周后進(jìn)行造模，采用腹腔注射環(huán)磷酰胺制備免疫低下模型，除正常對(duì)照組外，各組均腹腔注射環(huán)磷酰胺80 mg/kg，連續(xù)7 d，復(fù)制免疫低下模型，正常對(duì)照組腹腔注射等量的生理鹽水。

1.5 給藥方法 藥物劑量按人鼠體表面積折算等效比率劑量表［2］，計(jì)算出小鼠的等效劑量。傳統(tǒng)飲片湯劑低、高劑量組分別為 5、10 g/（kg·d），配方顆粒湯劑低、高劑量組同傳統(tǒng)飲片湯劑組，正常對(duì)照組和模型組對(duì)照組小鼠給予20 g/（kg·d）的生理鹽水溶液。各組于造模后均為每日灌胃1次，連續(xù)10 d。

1.6 標(biāo)本采集與檢測 末次給藥24 h后，每組小鼠摘眼球收集血液。將血置于抗凝管中（含肝素），加入抗小鼠CD4單克隆抗體 （PE）和抗小鼠CD8單克隆抗體（FITC）各10μL，置4℃避光20min。加染色洗滌液1mL混勻，離心洗滌3次后棄上清。加入0.5 mL的固定液固定，置4℃存放30 min，流式細(xì)胞儀測定。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

見表1。與正常對(duì)照組比，模型組小鼠外周血CD4+T，CD8+T淋巴細(xì)胞率明顯降低（P＜0.01）。與模型組比，玉屏風(fēng)散飲片、玉屏風(fēng)散顆粒高劑量組外周血CD4+T，CD8+T淋巴細(xì)胞率均顯著升高 （P＜0.05），玉屏風(fēng)散飲片、配方顆粒低劑量組外周血CD4+T，CD8+T淋巴細(xì)胞率無明顯差異（P＞0.05）。玉屏風(fēng)散飲片高劑量組和配方顆粒高劑量組間無明顯差異（P＞0.05）。

表1 各組小鼠外周血T細(xì)胞亞群細(xì)胞率比較（％，±s）

表1 各組小鼠外周血T細(xì)胞亞群細(xì)胞率比較（％，±s）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組 別 n CD4+T CD8+T正常對(duì)照組 12 62.52±1.90** 56.49±1.35**模型組 12 40.35±1.81 36.75±1.24玉屏風(fēng)散飲片低劑量組 12 47.18±2.00 39.67±1.46玉屏風(fēng)散飲片高劑量組 12 61.69±1.80* 54.58±1.64*玉屏風(fēng)散顆粒低劑量組 12 46.29±1.60 38.89±1.56玉屏風(fēng)散顆粒高劑量組 12 60.84±1.50* 53.58±1.78*

3 討論

玉屏風(fēng)散是中醫(yī)扶正固本的經(jīng)典方劑，大量的實(shí)驗(yàn)研究表明其對(duì)免疫功能低下的動(dòng)物模型具有明顯的增強(qiáng)免疫功能作用［1］。T細(xì)胞亞群中的T輔助細(xì)胞和T抑制細(xì)胞對(duì)免疫反應(yīng)起調(diào)控作用，對(duì)維持免疫穩(wěn)定起重要作用。CD4+代表輔助性T細(xì)胞，CD8+代表抑制性和細(xì)胞毒性T細(xì)胞，CD4+，CD8+彼此相互調(diào)節(jié)，表現(xiàn)出輔助和抑制的作用，是免疫系統(tǒng)的核心。因而機(jī)體CD4T，CD8+T及CD4+/CD8+可以作為評(píng)價(jià)機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的指標(biāo)［3］。

為給中藥配方顆粒替代中藥飲片提供依據(jù)，本研究通過實(shí)驗(yàn)觀察比較玉屏風(fēng)散傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒湯劑對(duì)免疫抑制模型小鼠T細(xì)胞亞群的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組較正常對(duì)照組小鼠外周血CD4+T，CD8+T細(xì)胞率顯著降低，玉屏風(fēng)散傳統(tǒng)飲片高劑量組和配方顆粒高劑量組均較環(huán)磷酰胺組小鼠外周血CD4T，CD8+T細(xì)胞率顯著升高，說明玉屏風(fēng)散傳統(tǒng)飲片高劑量組和配方顆粒高劑量均通過升高小鼠外周血CD4T，CD8+T細(xì)胞率，增強(qiáng)其T細(xì)胞免疫功能。且玉屏風(fēng)散傳統(tǒng)飲片高劑量組和配方顆粒高劑量組間比較無顯著性差異，說明兩種湯劑等劑量間增強(qiáng)小鼠T細(xì)胞免疫功能作用基本相當(dāng)，為玉屏風(fēng)散配方顆粒在臨床上替代傳統(tǒng)飲片，進(jìn)一步推廣其應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］張紅軍，張曉莉，宋寶輝，等.玉屏風(fēng)散對(duì)免疫抑制小鼠的免疫功能的調(diào)節(jié)作用［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2001，17（4）：398.

［2］陳奇，王建華.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：33.

［3］王月飛，趙紅曄，王玉閣，等.玉屏風(fēng)散生物轉(zhuǎn)化液對(duì)免疫抑制小鼠細(xì)胞免疫的干預(yù)作用［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2010，16：（14）：176-178.