程艷艷，張志剛，劉本君，高 利

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱150030）

奶牛乳房炎通過影響牛奶的產(chǎn)出率和質(zhì)量對奶業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。乳房炎是源于細(xì)菌感染或擠奶方式不正確造成機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答［1］，有報(bào)道稱，機(jī)體的免疫反應(yīng)會導(dǎo)致機(jī)體氧自由基的產(chǎn)生增多［2］及許多相關(guān)因子的變化［3－4］。自由基在體內(nèi)有很強(qiáng)的氧化反應(yīng)能力，一旦體內(nèi)的自由基產(chǎn)生過多，易對蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸等產(chǎn)生傷害，從而引起機(jī)體的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化［5］。過氧化物酶被認(rèn)為是細(xì)胞內(nèi)抵御氧化損傷的第一道防線，因此它的活性直接體現(xiàn)了機(jī)體抗氧化能力［6］。但是目前關(guān)于不同程度奶牛乳房炎和奶牛抗氧化能力關(guān)系的報(bào)道非常有限，本試驗(yàn)通過研究二者的相關(guān)性并探討所測定的指標(biāo)是否可以作為判定乳腺損傷的依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)動(dòng)物分組 利用乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測法對40頭試驗(yàn)?zāi)膛＿M(jìn)行分組，分為4組：C組（SCC＜5×105個(gè)／mL）、Ⅰ組（5×105＜SCC＜1．5×106個(gè)／mL）、Ⅱ組（1．5×106＜SCC＜5×106個(gè)／mL）和Ⅲ組（SCC＞5×106個(gè)／mL）。

1．2 血樣的采集 選擇阿城區(qū)某奶牛示范基地的荷斯坦奶牛40頭（年齡和泌乳期相近）。頸靜脈采集C組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組各10頭奶牛的血液，采樣前消毒取血部位，對每頭牛約取15mL血液。對采集血樣的奶牛和試管進(jìn)行號碼標(biāo)記，將采集的血樣室溫下靜止。

1．3 乳樣的采集 采集C組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組各10頭奶牛的乳汁，采樣前對乳區(qū)進(jìn)行清洗，然后用70%酒精消毒乳區(qū)，棄掉頭2把乳汁，進(jìn)行全天采樣，從早上6點(diǎn)開始，每間隔5h進(jìn)行取樣，取樣3次，每次20mL，最后混入無菌奶瓶中。將采集的乳樣放到有冰塊的泡沫箱中，將乳樣帶回實(shí)驗(yàn)室檢測。

1．4 血樣的處理及測定 頸靜脈采集血液，在室溫下自然凝固1～2h，冰浴30min，然后3 000r／min離心10min，分離血清，4℃保存，待測。樣品采用南京建成生物工程研究所超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH－Px）和丙二醛 （malonal－dehyde，MDA）試劑盒進(jìn)行測定。

1．5 乳樣的處理及測定 將乳樣3 000r／min離心5min，除去上層乳脂，然后于16 000r／min高速離心機(jī)中離心10min，收集上清，4℃保存，待測。如檢測時(shí)間較長，要將樣品置于－80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。樣品采用南京建成生物工程研究所SOD、GSH－Px和MDA的試劑盒進(jìn)行測定。

1．6 數(shù)據(jù)分析 利用軟件SPSS 13．0軟件統(tǒng)計(jì)分析進(jìn)行分析處理，數(shù)據(jù)用±SD表示。

2 結(jié)果

2．1 血清中SOD、GSH－Px活性及MDA水平 見圖1～3。

圖1 血清各組中SOD活性

圖2 血清各組中GSH－Px活性

由圖1、2可看出，本試驗(yàn)中Ⅰ、Ⅱ、ⅲ組相比于對照組SOD、GSH－Px酶活性依次降低，且P＜0．05。由圖3可得出，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組相比于對照組MDA水平依次升高，且P＜0．05。

圖3 血清各組中MDA含量

2．2 乳清中SOD、GSH－Px活性及MDA水平 見圖4～6。

圖4 乳清各組中SOD含量

圖5 乳清各組中GSH－Px含量

圖6 乳清各組中MDA含量

由圖4、5可看出，與對照組相比，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組SOD、GSH－Px酶活性依次降低（P＜0．05）。圖6顯示，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組相比于對照組MDA水平依次升高（P＜0．05）。

3 討論

在試驗(yàn)中奶?；加腥橄傺讜r(shí)，血清及乳清中SOD、GSH－Px的活性顯著低于對照組，且隨著炎癥程度的加重，SOD、GSH－Px的活性也逐漸降低，說明奶牛在患有乳腺炎時(shí)，機(jī)體內(nèi)抗氧化酶活力顯著降低。這主要是因?yàn)槟膛０l(fā)生乳腺炎時(shí)，體內(nèi)大量的自由基異常生成并超過了機(jī)體的清除能力，于是機(jī)體內(nèi)的SOD和GSH－Px被大量消耗［7］。

MDA水平的增加可能源于自由基產(chǎn)生過多，SOD和GPX－Px酶活性降低，致使機(jī)體產(chǎn)生氧化損傷，細(xì)胞內(nèi)的自由基受內(nèi)源性的過氧化物酶如SOD和GPX－Px等控制，然而自由基產(chǎn)生突破抗氧化防線，細(xì)胞內(nèi)則發(fā)生氧化應(yīng)激，MDA是氧化應(yīng)激引起的脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物［8］。本試驗(yàn)結(jié)果提示，奶牛在患有乳腺炎時(shí)過氧化物和自由基參與了乳腺炎的發(fā)生過程，并且使機(jī)體組織細(xì)胞受到氧化損傷。

奶牛發(fā)生乳腺炎時(shí)，動(dòng)物機(jī)體和乳腺組織均產(chǎn)生了過多的自由基，機(jī)體的總抗氧化能力下降，抗氧化系統(tǒng)活性物質(zhì)嚴(yán)重不足，已經(jīng)不能有效地清除體內(nèi)過多的自由基，導(dǎo)致乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜無法有效防御自由基的攻擊，以至于過多的自由基使乳腺上皮細(xì)胞細(xì)胞膜的通透性異常，從而引起乳腺細(xì)胞分泌異常乳。因此，檢測血液中和乳汁中SOD和GSH－Px酶活性和MDA的含量變化可以指示乳房炎的嚴(yán)重程度，這些指標(biāo)也可以作為判定乳腺炎奶牛乳腺損傷的依據(jù)。

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