趙宗峰 張艷君 王慧琴 依布拉音

抑郁癥是常見精神性疾病,具有高發(fā)病、高復(fù)發(fā)、高致殘和高自殺率的特點(diǎn)[1]。遺傳學(xué)發(fā)現(xiàn) 5-羥色胺(5-HT)以及參與其代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)的某些基因多態(tài)性與抑郁癥存在相關(guān)性[2],TPH1是 5-HT合成的限速酶,可能參與情感障礙的起病[3]。TPH1T3804A(rs623580)多態(tài)性位點(diǎn)距離外顯子 1C有 3個(gè)單核苷酸,T-A的變異可影響 TPH1轉(zhuǎn)錄活性,導(dǎo)致5-HT的濃度下降,因此可能引發(fā)抑郁癥[4]。目前國內(nèi)對(duì)于此位點(diǎn)乃至位點(diǎn)民族差異的研究仍不多見,本研究旨在探討新疆維吾爾族群體 TPH1基因 rs623580位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與抑郁癥的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 104例維吾爾族抑郁癥患者 (男性 43例,女性 61例)來自我院臨床心理科,90例維吾爾族正常體檢者(男性 37例,女性 53例)來自我院體檢中心,正常對(duì)照組與研究組男女比例相近。抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)同時(shí)符合《中國精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn) (第 3版 )》(CCMD-3)和《美國精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(第 4版 )》(DSM-Ⅳ ),既往無精神病史,排除嚴(yán)重軀體疾病和其他精神疾病等情況。對(duì)照組樣本二系三代無精神疾病家族史。入組成員對(duì)研究知情同意。104例研究組年齡 19～ 61歲 ,平均 (37.62± 8.92)歲 ,病程 1～ 37月 ,90例對(duì)照組年齡 18～ 61歲,平均(36.14± 8.21)歲,兩組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 基因組 DN A的提取及特定片段的 PCR擴(kuò)增 采集空腹外周靜脈血 3～ 4ml,放置于 5ml的 EDTANa2抗凝管中,-80℃冰箱儲(chǔ)存。用 TIANGEN血液基因組 DNA提取試劑盒提取樣本 DN A。PCR引物序列由北京鼎國生物技術(shù)工程有限責(zé)任公司合成,上游引物為 5’-TAAT TATCCTCCCTCCAAGT-3’,下 游 引 物 為 5’-CT TACCCATTCA ATTACCAC-3’。 PCR反應(yīng)總體系為40μL,反應(yīng)液為:10xbuffer(含 Mg2+,20μM/μL)4μL,dNT P(10 μM/μL)1 μL,TaqDNA 聚合 酶 (2U/μL)1μL,模板 DNA 1μL,上下游引物各 1μL(10μM/μL),加 ddH2O至 40μL,在PTC-100 PCR擴(kuò)增儀上擴(kuò)增。反應(yīng)程序:95℃預(yù)變性 5min,進(jìn)入循環(huán),95℃變性 45s,51℃退火 1min,72℃延伸 45s,共 30個(gè)循環(huán);72℃延伸 10min,4℃保存。反應(yīng)結(jié)束后取 5 μL擴(kuò)增產(chǎn)物于 1?TAE緩沖液中用 1%瓊脂糖凝膠電泳 20min(恒壓150V),電泳結(jié)果在凝膠成像系統(tǒng)下拍照并保存。

1.2.2 測(cè)序分型 擴(kuò)增產(chǎn)物由北京鼎國生物技術(shù)工程有限責(zé)任公司進(jìn)行目的片段測(cè)序,結(jié)果返回后對(duì)相應(yīng)位點(diǎn)分型并記錄。

1.3 統(tǒng)計(jì)處理 應(yīng)用擬合優(yōu)度檢驗(yàn),計(jì)算基因型分布是否符合 Hardy-Weinberg平衡。應(yīng)用 SPSS10.0分析基因型以及等位基因頻率的分布差異。

2 結(jié) 果

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn) 研究組 (i2=1.710,P=0.425)與對(duì)照組 (i2=1.662,P=0.436)的 rs623580位點(diǎn)基因型頻率分布符合 Hardy-Weinberg平衡法則。按性別分亞組后,男性研究組 (i2=0.071,P=0.965)與對(duì)照組(i2=0.078,P=0.962)的 rs623580位點(diǎn)基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡法則。女性研究組(i2=2.212,P=0.331)與對(duì)照組 (i2=2.258,P=0.323)的 rs623580位點(diǎn)基因型頻率分布亦符合 Hardy-Weinberg平衡法則。

2.2 研究組與對(duì)照組 rs623580位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布的比較 研究組 104例中,3種基因型分別為 21(20.2%)例、 51(49.0%)例、 32(30.8%)例。對(duì)照組 90例中 ,3種基因型分別為 33(36.7%)例、36(40.0%)例、21(23.3%)例。兩組 rs623580多態(tài)性的各基因型和等位基因頻率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(i2=6.560,P=0.038和i2=5.517,P=0.019)。研究組 A/A基因型頻率及 A等位基因頻率均高于對(duì)照組,見表 1。

表1 兩組 rs623580位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布的比較[n(%)]

2.3 女性、男性研究組與對(duì)照組 rs623580位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布的比較 研究組與對(duì)照組按性別分亞組,分別比較 rs623580位點(diǎn)基因型與等位基因頻率,結(jié)果顯示,女性研究組與女性對(duì)照組基因型頻率差異(i2=8.026,P=0.018)和等位基因頻率差異(i2=7.154,P=0.007)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。女性研究組 A/A基因型頻率及 A等位基因頻率均高于女性對(duì)照組。男性研究組與男性對(duì)照組基因型頻率差異和等位基因頻率差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表 2。

表2 女性、男性研究組與對(duì)照組 rs623580位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布的比較[n(%)]

3 討 論

TPH基因在 5-HT的新陳代謝中具有重要作用[5],是 5-HT合成的限速酶,T PH的生理活性和表達(dá)水平正常與否影響著 5-HT的血濃度,通過增強(qiáng)或減弱 5-HT及其代謝物的作用強(qiáng)度,進(jìn)而影響它在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能,可能引發(fā)抑郁癥。本研究所選擇的多態(tài)性位點(diǎn) T3804A,位于 TPH1上1B內(nèi)含子嘧啶富足區(qū),rs623580位點(diǎn)發(fā)生 T-A的突變后,可形成 AA、AT、TT3種基因型。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果表明,研究組與對(duì)照組 TPH1基因 rs623580位點(diǎn)的基因型頻率差異和等位基因頻率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí),在研究組中 AA基因型頻率高于對(duì)照組的頻率,等位基因 A的頻率也明顯高于對(duì)照組的頻率,此與王兵[6]Jiajun Shi[7]等人的研究一致。研究組與對(duì)照組按性別分亞組,女性研究組與對(duì)照組基因型頻率差異和等位基因頻率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。男性研究組與對(duì)照組基因型頻率差異和等位基因頻率差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。女性研究組中的 AA基因型頻率高于女性對(duì)照組的頻率,女性研究組中等位基因 A的頻率也明顯高于女性對(duì)照組的頻率。因此推測(cè) TPH1基因 T3804A位點(diǎn)與抑郁癥的發(fā)病可能具有關(guān)聯(lián)性,A等位基因可能是抑郁癥的易感基因?？紤]到抑郁癥是一種多基因遺傳疾病,并且研究的結(jié)果會(huì)受到樣本容量、地區(qū)差異、種族差異、環(huán)境因素與遺傳因素的相互作用等方面的影響,仍需進(jìn)一步探討該基因與抑郁癥的關(guān)聯(lián)性。

[1]閔文蛟,孫學(xué)禮.抑郁癥致病相關(guān)基因的遺傳學(xué)研究 [J].華西醫(yī)學(xué),2007,22(4):904-905

[2]陳鵬宇,胡澤卿.5-羥色胺能系統(tǒng)在抑郁癥中的研究進(jìn)展 [J].神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生,2008,8(4):325-327

[3]楊福中,禹順英,施慎遜.國內(nèi)抑郁癥遺傳學(xué)研究 [J].上海精神醫(yī)學(xué),2008,20(4):245-248

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[6]王兵.色氨酸羥化酶基因 T3792A位點(diǎn)遺傳多態(tài)性與抑郁癥的相關(guān)性及法醫(yī)學(xué)意義[D].沈陽:中國醫(yī)科大學(xué),2008

[7]Jiajun Shi,Judith A.Badner,Eiji H attori,et al.Neurotransmission and bipolar disorder: A systematic family based association study[J].Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet,2008,147B(7):1270-1277