蔡茂文，張 晶，周 彬

(1.四川省寧南縣人民醫(yī)院內(nèi)科，四川 寧南 615400;2.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，四川 成都 610072)

為了解系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)患者外周血T淋巴細(xì)胞的變化，探討T淋巴細(xì)胞與SLE疾病活動指標(biāo)的關(guān)系，本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測了76例SLE患者(低度活動組與高度活動組)外周血 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+細(xì)胞百分率及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值，并與同期36例健康體檢女性(健康對照組)比較，同時與SLE疾病活動指數(shù)(systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)評分(SLEDAI)、24 小時尿蛋白、血沉(SER)、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4進(jìn)行相關(guān)性分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 76例SLE患者均為女性，均為四川省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2011年11月至2012年10月的住院患者，年齡17 ～79 歲［(34.67±10.67)歲］，其中20～40歲48例。所有病例均符合2009系統(tǒng)性紅斑狼瘡國際臨床合作組(Systemic Lupus International Collaborating Clinic，SLICC)修定的美國風(fēng)濕病學(xué)會(American College of Rheumatology，ACR)系統(tǒng)性紅斑狼瘡分類標(biāo)準(zhǔn)［1］。疾病活動性參照中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會《系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷及治療指南》［2］，SLEDAI 0～4 分為穩(wěn)定期，5～9 分為低度活動期，≥10分為高度活動期。76例SLE分為低度活動組(36例)和高度活動組(40例)。健康對照組年齡16 ～76 歲［(35.50±12.12)歲］，性別和年齡與低度活動組、高度活動組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞ 0.05)。

1.2 標(biāo)本采集和檢測方法 采集外周血標(biāo)本2 ml，EDTA-K2抗凝，EDTA-K2抗凝血 100 μl加入實驗管和空白對照管。于實驗管加入20μl CD3-Per-CP、CD4-FITC和CD8-PE鼠抗人單克隆抗體，4℃避光孵育30分鐘。染色后將實驗管和空白對照管在室溫下分別加入紅細(xì)胞裂解液2 ml，混勻后室溫孵育15分鐘。裂解后兩個試管分別在轉(zhuǎn)速1500 r/min條件下離心3分鐘，棄去上清液，得到白細(xì)胞沉淀。使用磷酸鹽緩沖液洗滌后，在轉(zhuǎn)速1500 r/min離心3分鐘，反復(fù)兩次。最后分別加入600μl 4%多聚甲醛固定液混勻，制成單細(xì)胞懸液上機(jī)分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS 18.0統(tǒng)計軟件處理。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義;用Pearson積差相關(guān)原理進(jìn)行兩兩比較，判斷指標(biāo)間相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 外周血T淋巴細(xì)胞的變化 76例SLE患者中57例存在T淋巴細(xì)胞亞群異常，占75.0%。分組比較:低度活動組與高度活動組間 CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+/CD3+CD4+差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);兩組SLE患者與健康對照組比較，CD3+差異均無統(tǒng)計學(xué)意義;而CD3+CD4+細(xì)胞均減低，CD3+CD8+細(xì)胞均增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜ 0.01)，CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均降低，且多數(shù)(34/57，占59.6%)比值倒置(即:比值＜ 1)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)果見表1。

表1 SLE患者與健康對照組淋巴細(xì)胞亞群比較

2.2 SLE患者T細(xì)胞亞群與疾病活動指標(biāo)的相關(guān)性分析 SLE患者CD3+CD4+與SLE疾病活動指標(biāo)SLEDAI評分、24 h尿蛋白存在顯著的負(fù)相關(guān)，與補(bǔ)體C3、C4存在顯著的正相關(guān);CD3+CD8+與C4存在顯著負(fù)相關(guān)，與 SER存在顯著的正相關(guān);CD3+CD4+/CD3+CD8+比值與SLEDAI存在顯著的負(fù)相關(guān);而CD3+則無明顯相關(guān)性。結(jié)果見表2。

表2 SLE患者淋巴細(xì)胞亞群與疾病活動指標(biāo)的相關(guān)性分析 (r值)

3 討論

SLE是一種好發(fā)于育齡期女性的累及多系統(tǒng)的自身免疫性疾?。?］，機(jī)體在多種因素作用下，正常的自身免疫耐受機(jī)制被破壞，B細(xì)胞功能亢進(jìn)，過度增殖，產(chǎn)生多克隆免疫球蛋白和多種自身抗體，從而損傷自身組織。T細(xì)胞亞群異常在SLE發(fā)病中的作用一直是國內(nèi)外風(fēng)濕病學(xué)專家研究的熱點問題，但結(jié)果不太一致。多數(shù)人認(rèn)為B細(xì)胞的高度活化是以T細(xì)胞異常為基礎(chǔ)且在其誘導(dǎo)下產(chǎn)生的。T淋巴細(xì)胞亞群對機(jī)體免疫功能的穩(wěn)定起著重要的調(diào)節(jié)作用，而CD4、CD8亞群的數(shù)量和功能異常則是T細(xì)胞免疫功能異常的重要體現(xiàn)。過去多數(shù)研究認(rèn)為［4］在SLE活動期，CD4+(輔助/誘導(dǎo) T細(xì)胞)升高，CD8+(抑制/殺傷T細(xì)胞)下降，CD4+/CD8+比值升高，尤其是CD8+下降引起B(yǎng)細(xì)胞多克隆抗體激活及體液免疫異常。但近年研究［4］顯示，活動期SLE患者外周血CD4+細(xì)胞及CD4+/CD8+T細(xì)胞比值降低，而CD8+T細(xì)胞正?；蛏?。本研究結(jié)果也顯示活動期SLE患者的CD8+細(xì)胞與健康對照組比較明顯升高(P＜0.01)，CD4+細(xì)胞數(shù)明顯降低(P＜0.01);CD4+/CD8+比值降低(P ＜ 0.01);CD3+差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，表明SLE患者存在T細(xì)胞平衡紊亂［5，6］。

有進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CD8+細(xì)胞亞群具有明顯的異質(zhì)性，活動期SLE患者的CD8+細(xì)胞幾乎全部被反抑制性T細(xì)胞(CD8+VV+)取代，不能顯示抑制功能，而阻斷了 CD8+細(xì)胞對 CD4+細(xì)胞的抑制作用［7］，而其中CD8+VV+的增加可以直接作用于Th細(xì)胞，發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用使CD8+細(xì)胞增多。另一方面CD4+細(xì)胞減少，主要原因是CD4+亞群中的抑制誘導(dǎo)T細(xì)胞降低，T細(xì)胞不能誘導(dǎo)CD8+細(xì)胞對B細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用［8］，因此活動期SLE患者CD4+細(xì)胞降低，CD8+細(xì)胞正?；蛏?，仍然表現(xiàn)為體液免疫的亢進(jìn)，B細(xì)胞增殖并產(chǎn)生大量的自身抗體。但關(guān)于SLE患者T淋巴細(xì)胞的變化與疾病活動度(SLEDAI評分、血沉、補(bǔ)體)及腎臟損害之間的關(guān)系，報道較少。

本研究中活動期SLE患者有75.0%存在T淋巴細(xì)胞亞群異常，與相關(guān)報道有所差異［9］。而SLE高活動期組與低活動期組比較，CD3+CD4+細(xì)胞數(shù)降低與CD3+CD8+細(xì)胞數(shù)升高均更明顯 (均P＜0.05)，二者比值也明顯降低(P＜0.05)。提示活動期SLE患者體內(nèi)T細(xì)胞亞群數(shù)量分布存在異常，并且與疾病活動度有密切相關(guān)性，這與Maeda等［10］的研究結(jié)果一致。

本研究中CD3+CD4+與SLEDAI評分、24 h尿蛋白存在顯著的負(fù)相關(guān)，與補(bǔ)體C3、C4顯著正相關(guān);CD3+CD8+與C4存在顯著負(fù)相關(guān)，與SER正相關(guān);CD3+CD4+/CD3+CD8+比值與SLEDAI評分存在負(fù)相關(guān)。故監(jiān)測T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)對SLE的治療及評估有一定指導(dǎo)意義。

總之，SLE患者存在T淋巴細(xì)胞的異常表達(dá)，檢測外周血淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量變化，有助于全面了解患者的免疫狀態(tài)，對正確判斷病情和指導(dǎo)臨床治療有重要意義。

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