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        系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的臨床分析

        2013-09-19 06:44:22蔡茂文
        實用醫(yī)院臨床雜志 2013年2期
        關(guān)鍵詞:風(fēng)濕病學(xué)活動期紅斑狼瘡

        蔡茂文,張 晶,周 彬

        (1.四川省寧南縣人民醫(yī)院內(nèi)科,四川 寧南 615400;2.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科,四川 成都 610072)

        為了解系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血T淋巴細(xì)胞的變化,探討T淋巴細(xì)胞與SLE疾病活動指標(biāo)的關(guān)系,本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測了76例SLE患者(低度活動組與高度活動組)外周血 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+細(xì)胞百分率及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值,并與同期36例健康體檢女性(健康對照組)比較,同時與SLE疾病活動指數(shù)(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)評分(SLEDAI)、24 小時尿蛋白、血沉(SER)、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4進(jìn)行相關(guān)性分析,現(xiàn)報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 76例SLE患者均為女性,均為四川省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2011年11月至2012年10月的住院患者,年齡17 ~79 歲[(34.67±10.67)歲],其中20~40歲48例。所有病例均符合2009系統(tǒng)性紅斑狼瘡國際臨床合作組(Systemic Lupus International Collaborating Clinic,SLICC)修定的美國風(fēng)濕病學(xué)會(American College of Rheumatology,ACR)系統(tǒng)性紅斑狼瘡分類標(biāo)準(zhǔn)[1]。疾病活動性參照中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會《系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷及治療指南》[2],SLEDAI 0~4 分為穩(wěn)定期,5~9 分為低度活動期,≥10分為高度活動期。76例SLE分為低度活動組(36例)和高度活動組(40例)。健康對照組年齡16 ~76 歲[(35.50±12.12)歲],性別和年齡與低度活動組、高度活動組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05)。

        1.2 標(biāo)本采集和檢測方法 采集外周血標(biāo)本2 ml,EDTA-K2抗凝,EDTA-K2抗凝血 100 μl加入實驗管和空白對照管。于實驗管加入20μl CD3-Per-CP、CD4-FITC和CD8-PE鼠抗人單克隆抗體,4℃避光孵育30分鐘。染色后將實驗管和空白對照管在室溫下分別加入紅細(xì)胞裂解液2 ml,混勻后室溫孵育15分鐘。裂解后兩個試管分別在轉(zhuǎn)速1500 r/min條件下離心3分鐘,棄去上清液,得到白細(xì)胞沉淀。使用磷酸鹽緩沖液洗滌后,在轉(zhuǎn)速1500 r/min離心3分鐘,反復(fù)兩次。最后分別加入600μl 4%多聚甲醛固定液混勻,制成單細(xì)胞懸液上機(jī)分析。

        1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS 18.0統(tǒng)計軟件處理。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較用t檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義;用Pearson積差相關(guān)原理進(jìn)行兩兩比較,判斷指標(biāo)間相關(guān)性。

        2 結(jié)果

        2.1 外周血T淋巴細(xì)胞的變化 76例SLE患者中57例存在T淋巴細(xì)胞亞群異常,占75.0%。分組比較:低度活動組與高度活動組間 CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+/CD3+CD4+差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);兩組SLE患者與健康對照組比較,CD3+差異均無統(tǒng)計學(xué)意義;而CD3+CD4+細(xì)胞均減低,CD3+CD8+細(xì)胞均增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P< 0.01),CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均降低,且多數(shù)(34/57,占59.6%)比值倒置(即:比值< 1),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果見表1。

        表1 SLE患者與健康對照組淋巴細(xì)胞亞群比較

        2.2 SLE患者T細(xì)胞亞群與疾病活動指標(biāo)的相關(guān)性分析 SLE患者CD3+CD4+與SLE疾病活動指標(biāo)SLEDAI評分、24 h尿蛋白存在顯著的負(fù)相關(guān),與補(bǔ)體C3、C4存在顯著的正相關(guān);CD3+CD8+與C4存在顯著負(fù)相關(guān),與 SER存在顯著的正相關(guān);CD3+CD4+/CD3+CD8+比值與SLEDAI存在顯著的負(fù)相關(guān);而CD3+則無明顯相關(guān)性。結(jié)果見表2。

        表2 SLE患者淋巴細(xì)胞亞群與疾病活動指標(biāo)的相關(guān)性分析 (r值)

        3 討論

        SLE是一種好發(fā)于育齡期女性的累及多系統(tǒng)的自身免疫性疾?。?],機(jī)體在多種因素作用下,正常的自身免疫耐受機(jī)制被破壞,B細(xì)胞功能亢進(jìn),過度增殖,產(chǎn)生多克隆免疫球蛋白和多種自身抗體,從而損傷自身組織。T細(xì)胞亞群異常在SLE發(fā)病中的作用一直是國內(nèi)外風(fēng)濕病學(xué)專家研究的熱點問題,但結(jié)果不太一致。多數(shù)人認(rèn)為B細(xì)胞的高度活化是以T細(xì)胞異常為基礎(chǔ)且在其誘導(dǎo)下產(chǎn)生的。T淋巴細(xì)胞亞群對機(jī)體免疫功能的穩(wěn)定起著重要的調(diào)節(jié)作用,而CD4、CD8亞群的數(shù)量和功能異常則是T細(xì)胞免疫功能異常的重要體現(xiàn)。過去多數(shù)研究認(rèn)為[4]在SLE活動期,CD4+(輔助/誘導(dǎo) T細(xì)胞)升高,CD8+(抑制/殺傷T細(xì)胞)下降,CD4+/CD8+比值升高,尤其是CD8+下降引起B(yǎng)細(xì)胞多克隆抗體激活及體液免疫異常。但近年研究[4]顯示,活動期SLE患者外周血CD4+細(xì)胞及CD4+/CD8+T細(xì)胞比值降低,而CD8+T細(xì)胞正?;蛏?。本研究結(jié)果也顯示活動期SLE患者的CD8+細(xì)胞與健康對照組比較明顯升高(P<0.01),CD4+細(xì)胞數(shù)明顯降低(P<0.01);CD4+/CD8+比值降低(P < 0.01);CD3+差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),表明SLE患者存在T細(xì)胞平衡紊亂[5,6]。

        有進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CD8+細(xì)胞亞群具有明顯的異質(zhì)性,活動期SLE患者的CD8+細(xì)胞幾乎全部被反抑制性T細(xì)胞(CD8+VV+)取代,不能顯示抑制功能,而阻斷了 CD8+細(xì)胞對 CD4+細(xì)胞的抑制作用[7],而其中CD8+VV+的增加可以直接作用于Th細(xì)胞,發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用使CD8+細(xì)胞增多。另一方面CD4+細(xì)胞減少,主要原因是CD4+亞群中的抑制誘導(dǎo)T細(xì)胞降低,T細(xì)胞不能誘導(dǎo)CD8+細(xì)胞對B細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用[8],因此活動期SLE患者CD4+細(xì)胞降低,CD8+細(xì)胞正?;蛏?,仍然表現(xiàn)為體液免疫的亢進(jìn),B細(xì)胞增殖并產(chǎn)生大量的自身抗體。但關(guān)于SLE患者T淋巴細(xì)胞的變化與疾病活動度(SLEDAI評分、血沉、補(bǔ)體)及腎臟損害之間的關(guān)系,報道較少。

        本研究中活動期SLE患者有75.0%存在T淋巴細(xì)胞亞群異常,與相關(guān)報道有所差異[9]。而SLE高活動期組與低活動期組比較,CD3+CD4+細(xì)胞數(shù)降低與CD3+CD8+細(xì)胞數(shù)升高均更明顯 (均P<0.05),二者比值也明顯降低(P<0.05)。提示活動期SLE患者體內(nèi)T細(xì)胞亞群數(shù)量分布存在異常,并且與疾病活動度有密切相關(guān)性,這與Maeda等[10]的研究結(jié)果一致。

        本研究中CD3+CD4+與SLEDAI評分、24 h尿蛋白存在顯著的負(fù)相關(guān),與補(bǔ)體C3、C4顯著正相關(guān);CD3+CD8+與C4存在顯著負(fù)相關(guān),與SER正相關(guān);CD3+CD4+/CD3+CD8+比值與SLEDAI評分存在負(fù)相關(guān)。故監(jiān)測T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)對SLE的治療及評估有一定指導(dǎo)意義。

        總之,SLE患者存在T淋巴細(xì)胞的異常表達(dá),檢測外周血淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量變化,有助于全面了解患者的免疫狀態(tài),對正確判斷病情和指導(dǎo)臨床治療有重要意義。

        [1]呂良敬,鮑春德.系統(tǒng)性紅斑狼瘡分類標(biāo)準(zhǔn)的變遷與啟示[J].診斷學(xué)理論與實踐,2010,9(4):304-305.

        [2]中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會.系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷及治療指南[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2010,14(5):343.

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        [4]Raziuddin S,Nur MA,Wabel AA.Increased circulating HLA-DR+CD4+T cells in systemic lupus erythematosus:alterations associatedwith prednisolone therapy[J].Scand J Immunol,1990,31(2):139.

        [5]陳捷,王蘭蘭,劉瑾.SLE患者T細(xì)胞亞群功能紊亂與Th1、Th2細(xì)胞因子偏移的研究[J].華西醫(yī)學(xué),2004,19(3):409-411.

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        [10]Maeda N,Sekigawa I,Iida N,et al.Relat ions hip between CD4+/CD8+T cell ratio and T cellactivation in systemic lupuserythematosus[J].Scand JRheumatol,1999,28:166-170.

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