郭建極 劉 濤 陳銘伍 周 前 冼 磊 (廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530021)

目前腫瘤微轉(zhuǎn)移的各種檢測(cè)方法中，RT-PCR應(yīng)用最為廣泛，但在檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移中，并沒有確切的分子標(biāo)記物〔1〕。Iwao等〔2〕已經(jīng)證明肺特質(zhì)性X蛋白(LUNX)僅在正常肺組織及NSCLC組織中特異表達(dá)，不在其他正常組織或腫瘤表達(dá)。因此，只要在其他組織中檢測(cè)到LUNX mRNA可認(rèn)為患有NSCLC或者存在微轉(zhuǎn)移。黑色素瘤抗原(MACE)有六個(gè)亞家族，在多種實(shí)體腫瘤表達(dá)〔3〕，其中肺癌細(xì)胞檢出MAGE mRNA陽性比例約70%〔4〕。目前國(guó)內(nèi)外尚未有以MAGE和LUNX為靶基因檢測(cè)肺癌患者淋巴結(jié)中微轉(zhuǎn)移的報(bào)道。本研究探討MAGE mRNA和LUNX mRNA在NSCLC患者微小轉(zhuǎn)移診斷中的敏感性及特異性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 收集廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2011年2～7月56例 NSCLC患者淋巴結(jié)，其中男26例，女30例，年齡41～76〔平均(64.7±10.9)〕歲;腺癌33例，鱗癌23例，淋巴結(jié)123組共465枚。淋巴結(jié)陽性37組共167枚，陰性86組共298枚，選10例非肺癌患者17枚淋巴結(jié)作為對(duì)照組。肺癌患者的手術(shù)方式為標(biāo)準(zhǔn)的肺癌根治術(shù)。

1.2 標(biāo)本采集 清掃淋巴結(jié)30 min內(nèi)將其分為兩份，一份用無RNA酶水后置-80℃液氮保存，另一份送常規(guī)病理檢查。

1.3 方法 總RNA提取、cDNA合成及PCR擴(kuò)增如相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道〔5〕，MAGE 基因序列:上游:5'-CGCCCGAACGAACCTCACCCAG-3'，下游:5'-GCTGCACCCTCACTCCCITGCC-3'，擴(kuò)增長(zhǎng)度421 bp;MACE-2 上游:5'-AACTACCACCCGACCCACTG-3'，下游:5'-GAACAGCAAGAAGCCGTCTG-3'，擴(kuò)增長(zhǎng)度 233 bp;MACE-3;上游:5'-TCCACCACCAGAGGCCCCC-3';下游:5'-GCACGA-ITATCACCAGCCCTCC-3'擴(kuò)增長(zhǎng)度 725 bp;MACE-4上游:5'-CACCACACACCCCAACCC-3'，下游:5'-AACCACTCTGCGTCAGCC-3'，擴(kuò)增長(zhǎng)度 446 bp;LUNX上游:5'-CTCATTCTCTTCTACGGCCTCTTAG-3'，下 游:5'-CTTTATCCCCAGAGGCATGGT-3'，擴(kuò)增長(zhǎng)度 396 bp。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用兩個(gè)或多個(gè)樣本率的F檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 MAGE、LUNX基因在NSCLC淋巴結(jié)中的表達(dá) MAGE及LUNX基因在非肺癌的淋巴結(jié)中未見表達(dá)，123組淋巴結(jié)中至少有一種MAGE基因陽性表達(dá)占42.23%(52/123)，LUNX基因陽性表達(dá)占34.1%(42/123);MAGE和LUNX基因中至少有一種陽性表達(dá)占44.7%(55/123);應(yīng)用常規(guī)病理檢查淋巴結(jié)陽性率均為30.1%(37/123)。

2.2 MAGE、LUNX基因在NSCLC淋巴結(jié)中的表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系 NSCLC患者淋巴結(jié)MAGE和LUNX mRNA陽性表達(dá)與分化程度以及TNM分期有密切關(guān)系(P＜0.05)，與性別、年齡、腫瘤位置及吸煙組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 MAGE、LUNX mRNA在NSCLC淋巴結(jié)中的表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系(n)

2.3 PCR檢測(cè)與常規(guī)病理檢測(cè)分期結(jié)果比較 PCR檢測(cè)結(jié)果較常規(guī)病理更加精確2例結(jié)果值得注意:1例常規(guī)病理檢測(cè)是ⅢB期，PCR檢測(cè)是ⅡA期，1例常規(guī)病理檢測(cè)是ⅢB期，PCR檢測(cè)是ⅡB期。見表2。

表6 PCR檢測(cè)結(jié)果與病理分期對(duì)照(n)

3 討論

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，肺癌診治研究有了很大的進(jìn)步，然而NSCLC的治療效果仍然受限制，5年生存率仍在20%左右，早期肺癌行標(biāo)準(zhǔn)肺癌根治術(shù)，5年整體生存率也是2/3左右。即使研究表明腫瘤微轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致生存率低、預(yù)后欠佳的罪魁禍?zhǔn)住?〕。因此，如能及時(shí)檢測(cè)出微轉(zhuǎn)移，選擇治療方案將會(huì)更加合理，治療更加有針對(duì)性。MAGE屬于腫瘤特異性抗原中腫瘤睪丸抗原(CTA)的一類，家族成員有 MAGE-1，-2，-3，-4等 20余個(gè)，表達(dá)于睪丸、胎盤及大多數(shù)腫瘤組織，高表達(dá)于NSCLC中。LUNX基因是肺組織特異性表達(dá)基因，特異性持續(xù)表達(dá)于肺癌細(xì)胞及轉(zhuǎn)移病灶，正常血循環(huán)、淋巴結(jié)或骨髓中的細(xì)胞中不表達(dá)，人類其他腫瘤及組織中亦極少表達(dá)或不表。本研究結(jié)果尚不能說明MAGE及LUNX mRNA陽性表達(dá)與性別、年齡、腫瘤位置及吸煙有關(guān)系。在NSCLC患者淋巴結(jié) MAGE和LUNX mRNA陽性表達(dá)，與分化程度以及TNM分期有密切關(guān)系，隨著分化級(jí)別的增高，陽性表達(dá)率逐漸降低，分化程度越低，癌癥的惡性程度越高，淋巴結(jié)檢測(cè)的陽性率也越高。這一結(jié)果與姚舒洋等〔5〕的研究結(jié)果相近，明確了LUNX mRNA陽性表達(dá)與病理相關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)即使是臨床分期為Ⅰ期的NSCLC患者，其淋巴結(jié)中也存在LUNX mRNA和MAGE mRNA的陽性表達(dá)，提示NSCLC早期癌細(xì)胞就有擴(kuò)散轉(zhuǎn)移的可能。這就解釋了為什么有些臨床分期為早期且無任何轉(zhuǎn)移征象的NSCLC患者，在行標(biāo)準(zhǔn)的腫瘤完整切除根治術(shù)后，仍有可能在短期內(nèi)出現(xiàn)癌轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象;同時(shí)也進(jìn)一步證明了NSCLC淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移是腫瘤發(fā)生的早期事件。在研究過程中發(fā)現(xiàn)2例分期降期現(xiàn)象，這與總體相悖，可能與以下原因有關(guān):腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性，基因表達(dá)的差異性，內(nèi)源性或外源性RNA酶降解、病例選擇、標(biāo)本取材、標(biāo)本保存等。

1 Massarelli E，Andre F，Liu DD，et al.A retrospective analysis of the outcome of patients who have received two prior chemotherapy regimens including platinum and docetaxel for recurrent non-small-cell lung cancer〔J〕.Lung Cancer，2003;39(1):55-61.

2 Iwao K，Watanabe T，F(xiàn)ujiwara Y，et al.Isolation of a novel human lungspecific gene，LUNX，A potential molecular marker for detection of micrometastasis in non-small-cell lung cancer〔J〕.Int J Cancer，2001;91(4):433-7.

3 冼 磊，王 俊，姜冠潮，等.MAGE基因在檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用〔J〕.中國(guó)肺癌雜志，2005;8(3):219-22.

4 Jheon S，Hyun DS，Lee SC，et al.Lung cancer detection by a RT-nested PCR using MAGE Al-6 common primers〔J〕.Lung Cancer，2004;43(1):29-37.

5 姚舒洋，王濰博，崔言剛.LUNX、CK19和CEA基因在非小細(xì)胞肺癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移中的比較研究〔J〕.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2007;1(2):10-4.

6 Tajima K，Obata Y，Tamaki H，et al.Expression of cancer/testis(CT)antigens in lung cancer〔J〕.Lung Cancer，2003;42(1):23-33.