劉式威劉靜呂霞梁軍田慶華劉志剛尹嶺

(1.解放軍第211醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，150080；2.解放軍第211醫(yī)院特診科，150080；3.解放軍第65426部隊(duì)醫(yī)院，150087；4.解放軍總醫(yī)院，100837)

中藥眩暈Ⅲ號(hào)治療腦動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

劉式威1劉靜2呂霞3梁軍1田慶華1劉志剛1尹嶺4

(1.解放軍第211醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，150080；2.解放軍第211醫(yī)院特診科，150080；3.解放軍第65426部隊(duì)醫(yī)院，150087；4.解放軍總醫(yī)院，100837)

目的 觀察中藥眩暈Ⅲ號(hào)對(duì)腦動(dòng)脈硬化的治療作用，并初步探索其作用機(jī)制。方法 隨機(jī)將50只雄性SD大鼠分為正常對(duì)照組、模型組、辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組、眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組。除正常對(duì)照組外，在喂食開(kāi)始時(shí)一次性腹腔注射維生素D3(300 000 IU/kg)加高脂配方飼料喂養(yǎng)方法建立腦動(dòng)脈硬化大鼠模型。7周后開(kāi)始灌胃給藥，正常對(duì)照組和模型組予蒸餾水灌胃。8周后處死大鼠，測(cè)各組血脂、腦組織生化指標(biāo)，并對(duì)腦血管作病理檢查。結(jié)果 眩暈Ⅲ號(hào)能降低血脂，降低腦組織丙二醛(MDA)含量，改善腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性(P＜0.05)；模型組腦動(dòng)脈內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞呈廣泛性變性、壞死、脫落，粥樣斑塊形成。經(jīng)眩暈Ⅲ號(hào)治療后上述指標(biāo)均有一定改善。結(jié)論 眩暈Ⅲ號(hào)能改善腦動(dòng)脈硬化模型大鼠的血脂與氧化能力、減輕腦血管壁的病理?yè)p害，這些變化提示眩暈Ⅲ號(hào)具有防治腦動(dòng)脈硬化的作用。

腦動(dòng)脈硬化；動(dòng)物模型；藥物干預(yù)；大鼠

隨著社會(huì)老齡化進(jìn)程的加快及飲食結(jié)構(gòu)和工作方式的改變，腦血管疾病的發(fā)病率近年在全球呈上升趨勢(shì)。高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)發(fā)病的主要因素之一[1]。AS是許多心腦血管疾病的基礎(chǔ)病理表現(xiàn)，其最終結(jié)果是形成粥樣硬化斑塊，造成血管壁狹窄，靶器官供血不足，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成斑塊破裂，形成血栓，促發(fā)心腦血管疾病的發(fā)生。因此，積極降血脂、防治腦動(dòng)脈硬化是腦血管病治療的關(guān)鍵。

以往多采用西藥他汀類降血脂、防治腦動(dòng)脈硬化，因?yàn)楦弊饔么?，使其?yīng)用受到限制。本文利用腦動(dòng)脈硬化大鼠模型，研究中藥眩暈Ⅲ號(hào)對(duì)腦動(dòng)脈硬化的治療作用，并探索其可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)SD雄性大鼠，體質(zhì)量150～180 g，共50只，由北京醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)部醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供，并在SPF環(huán)境下飼養(yǎng)。

1.1.2 藥物與試劑 中藥眩暈Ⅲ號(hào)處方組成：生曬參10 g、白術(shù)15 g、黃芪15 g、當(dāng)歸15 g、川芎15 g、赤勺15 g、葛根15 g、地龍15 g、丹參15 g、石菖蒲15 g、三七粉3 g。按處方稱取中藥材，煎熬成汁，相當(dāng)于每毫升藥液含生藥量2 g。辛伐他汀片：20 mg×7片，浙江京新藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：H20000009。實(shí)驗(yàn)前研末以生理鹽水調(diào)成1 mg/mL濃度供試液備用。高脂乳劑：按文獻(xiàn)方法配成含3%膽固醇、10%豬油、0.5%膽酸鈉和0.2%丙基硫氧嘧啶的脂肪乳劑，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。血清三酰甘?triglycerides，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白(highdensitylipopro-tein，HDL)、低 密 度 脂 蛋 白 (lowdensitylipoprotein，LDL)、丙 二 醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)試劑盒均由南京聚力生物醫(yī)學(xué)工程研究所提供。

1.1.3 主要儀器 751型分光光度儀系意大利Maselli公司產(chǎn)品；日立7060全自動(dòng)生化分析儀，日本產(chǎn)；TDL-5-A型離心機(jī)系上海安亭公司產(chǎn)品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物模型的建立 取大鼠50只，其中40只采用楊鵬遠(yuǎn)等介紹的方法喂食高脂飼料，即3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎(chǔ)飼料，在喂食開(kāi)始時(shí)一次性腹腔注射維生素D3(300 000 IU/kg)后連續(xù)喂養(yǎng)7周，造成大鼠實(shí)驗(yàn)性腦動(dòng)脈硬化模型。另10只SD大鼠只喂常用飼料，作為正常對(duì)照組。

1.2.2 分組及給藥方法 將上述模型大鼠隨機(jī)分為4組，即模型組、辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組、眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組，每組10只。①正常對(duì)照組：只喂常用飼料，每日生理鹽水1 mL/kg灌胃1次，連續(xù)8周；②模型組：每日生理鹽水1 mL/kg灌胃1次，連續(xù)8周；③辛伐他汀組：每日辛伐他汀供試液按10 mg/kg灌胃1次，連續(xù)8周；④眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組：每日眩暈Ⅲ號(hào)低劑量8 g/kg灌胃1次，連續(xù)8周；⑤眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組：每日眩暈Ⅲ號(hào)高劑量16 g/kg灌胃1次，連續(xù)8周。

1.3 指標(biāo)檢測(cè)

1.3.1 血清脂質(zhì)水平的檢測(cè) 抽5 mL靜脈血，采用日立7060型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定TC、TG、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。

1.3.2 腦組織氧化能力檢測(cè) 各組采用脫頸椎法處死大鼠，快速稱取腦組織濕質(zhì)量，按質(zhì)量與體積比(W∶V)1∶10加入冰生理鹽水勻漿。經(jīng)3 000 r/min，離心15 min，離心半徑16 cm，取上清液。按照說(shuō)明書(shū)步驟操作，用751型分光光度儀在325 nm處測(cè)MDA、SOD的活力。

1.3.3 腦血管病理形態(tài)學(xué)檢查 大鼠快速斷頭，開(kāi)顱取大腦半球，置10%甲醛溶液中固定，脫水，包埋，冠狀連續(xù)切片，HE染色。光學(xué)顯微鏡觀察腦血管動(dòng)脈粥樣硬化程度。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清脂質(zhì)水平比較 與正常對(duì)照組相比，模型組TC、LDL-C、HDL-C水平均明顯上升(P＜0.01)；與模型組相比，辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組及眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組TC、LDL-C、HDL-C均顯著降低(P＜0.01)；辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組及眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組TC、LDL-C、HDL-C比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，表1)。

2.2 各組腦組織SOD活力與MDA含量測(cè)定結(jié)果 模型組、辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組及眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組血清SOD活性均降低，與正常對(duì)照組相比差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組及眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組SOD水平與模型組相比差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)，且它們組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；模型組、辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組及眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組MDA含量均增高，其中模型組MDA含量增高最為顯著，與其他組相比差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說(shuō)明辛伐他汀、眩暈Ⅲ號(hào)可以增強(qiáng)SOD活性，抑制MDA含量(表2)。

2.3 腦血管病理形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果 光鏡下病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠的腦組織中的動(dòng)脈血管內(nèi)膜的內(nèi)皮細(xì)胞呈廣泛性變性、壞死、脫落，管壁可見(jiàn)纖維帽樣堆積物芽狀突出和增生，表明腦血管動(dòng)脈硬化癥狀形成。辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組及眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組的上述病變情況明顯減輕，腦血管內(nèi)皮基本完整，管壁的纖維帽樣增生也明顯減少，血管內(nèi)堆積物芽狀突出和增生基本消失，表明用藥后明顯抑制了腦血管動(dòng)脈硬化癥狀的形成(圖1)。

表1 各組大鼠血清脂質(zhì)水平比較(±s，mmol/L，n＝10)

表1 各組大鼠血清脂質(zhì)水平比較(±s，mmol/L，n＝10)

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，▲▲P＜0.01

組別 TC TG LDL-C HDL-C正常對(duì)照組 1.86±0.42 0.50±0.14 0.50±0.18 1.21±0.27模型組 4.17±0.96** 0.38±0.12* 1.87±0.60** 1.92±0.63**辛伐他汀組 2.43±0.54▲▲ 0.40±0.10 0.76±0.30▲▲ 1.39±0.28眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組 2.36±0.43▲▲ 0.37±0.08 0.74±0.29▲▲ 1.31±0.36眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組 2.38±0.46▲▲ 0.37±0.07 0.75±0.26▲▲ 1.33±0.32

表2 各組血清超氧化物歧化酶和丙二醛水平(±s，n＝10)

表2 各組血清超氧化物歧化酶和丙二醛水平(±s，n＝10)

注：與正常對(duì)照組相比，▲P＜0.01；與模型組相比，*P＜0.01

組別 SOD(NU/mL) MDA(nmol/mL)正常對(duì)照組 127.86±5.85 1.48±0.40模型組 70.20±5.76▲ 2.78±0.83▲辛伐他汀組 98.86±14.31▲* 1.78±0.49▲*眩暈Ⅲ號(hào)低劑量組 97.38±12.48▲* 1.69±0.48▲*眩暈Ⅲ號(hào)高劑量組 101.5±12.38▲* 1.70±0.52▲*

圖1 腦血管的病理形態(tài)學(xué)表現(xiàn)

3 討論

慢性腦供血不足 (chronic cerebral circulation insufficiency，CCCI)是由于腦動(dòng)脈循環(huán)障礙引起的以頭暈、頭痛、失眠、健忘等為主癥的一種疾病[2]。本病是中老年人常見(jiàn)病、多發(fā)病，其早期臨床表現(xiàn)不典型，可有頭痛、頭暈、失眠、善忘、記憶力減退、易疲倦、嗜睡等。主要病因是腦大、中動(dòng)脈的動(dòng)脈粥樣硬化(可有不同程度的斑塊形成、血管狹窄)、彌漫性小動(dòng)脈硬化和微動(dòng)脈的玻璃樣變，年齡、肥胖、高血壓、糖尿病、血脂異常等是導(dǎo)致腦動(dòng)脈硬化的主要危險(xiǎn)因素[3]。長(zhǎng)期處于腦供血不足的狀態(tài)，容易增加腦梗死、血管性癡呆(VD)、阿爾茨海默病(AD)及Binswanger病等疾病的發(fā)生率[4]。對(duì)于慢性腦供血不足的研究，做到改善臨床癥狀，預(yù)防其向嚴(yán)重腦血管病的進(jìn)展是非常必要的，開(kāi)發(fā)確切有效的防治藥物成為醫(yī)學(xué)界的重要課題。

慢性腦供血不足可歸于中醫(yī)學(xué)的“頭痛”、“眩暈”、“健忘”、“不寐”等范疇，與“中風(fēng)”、“癡呆”有因果關(guān)系[5]。中醫(yī)藥的整體觀念以及多靶點(diǎn)作用，使其在治療缺血性腦血管病中具有一定優(yōu)勢(shì)[6]。郝志漢[7]認(rèn)為慢性腦供血不足的主要病機(jī)是血瘀，存在痰瘀互阻之證，治宜利濕化痰，活血祛瘀。

本文作者觀察到西醫(yī)的腦動(dòng)脈粥樣硬化、腦供血不足，與中醫(yī)的痰濕中阻有相似的病理生理基礎(chǔ)[8]。認(rèn)為痰瘀互結(jié)是腦供血不足的主要病機(jī)。痰為體內(nèi)津液停聚而生，瘀乃血液停滯而成，津血同源于水谷精微，故痰瘀二者，互為因果，在生理上可以相互為用、相互轉(zhuǎn)化，在病理上亦可以相互影響。痰伏于血脈之中，影響氣機(jī)，氣機(jī)不利，則不能推動(dòng)血液的正常運(yùn)行，導(dǎo)致血液停滯于脈管成血瘀。而血液遲澀不暢，不能正常運(yùn)行于脈中，壅滯氣機(jī)，則影響津液的流動(dòng)，反而導(dǎo)致痰的生成，痰濁和瘀血相互影響，痰凝則血瘀，血瘀則挾痰滯，痰瘀互結(jié)，膠結(jié)難開(kāi)，從而腦脈不通，清竅被壅，形成惡性循環(huán)，貫穿于腦供血不足的整個(gè)過(guò)程。

本文作者利用痰瘀互阻理論，研制了具有健脾祛痰、化瘀通絡(luò)作用的眩暈Ⅲ號(hào)中藥。脂代謝異常血清中TG、TC和LDL-C的升高是誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的首要因素之一，它與血管內(nèi)皮的損傷都是粥樣硬化形成的始動(dòng)環(huán)節(jié)，也是整個(gè)疾病發(fā)展的關(guān)鍵[9]。MDA[10]作為氧自由基和生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，其含量的變化可間接反映組織中氧自由基含量的變化，并間接反映細(xì)胞損傷的程度。SOD[11]的表達(dá)水平可反映機(jī)體內(nèi)抗自由基水平的高低。本研究發(fā)現(xiàn)，與腦動(dòng)脈硬化模型組相比，眩暈Ⅲ號(hào)組血脂水平顯著降低，SOD活性顯著增強(qiáng)，MDA含量受到顯著抑制。同時(shí)，腦血管動(dòng)脈硬化病變情況明顯減輕，腦血管內(nèi)皮基本完整，管壁的纖維帽樣增生也明顯減少，血管內(nèi)堆積物芽狀突出和增生基本消失。顯示眩暈Ⅲ號(hào)可促進(jìn)血清SOD活性，降低MDA的產(chǎn)生，減輕氧化應(yīng)激，抗脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)從而保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，這可能是眩暈Ⅲ號(hào)減輕動(dòng)脈粥樣硬化癥狀的機(jī)制之一。這就為臨床應(yīng)用眩暈Ⅲ號(hào)治療腦供血不足提供了理論支持。

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Objective To study the therapeutic action and its mechanism of Xuanyun-Ⅲ on cerebral atherosclerosis(AS).Methods Fifty male adult SD rats were randomly divided into 5 groups：normal control group，model group，Simvastatin group，low-dose Xuanyun-Ⅲ group，and high-dose Xuanyun-Ⅲ group.Except the normal control group，the rats of the other groups were given an intraperitoneal injection dose of vitamin D3(300 000 IU/kg)at the beginning of feeding，together with high-fat feedstuff to set up rat models with cerebral arteriosclerosis.Gavage administration was conducted after seven weeks，while the normal control group and the model group were given distilled water gavage.After eight weeks，all rats were sacrificed，and the serum lipid and the biochemical criteria such as superoxide dismutase(SOD)，the content of Malondialdehyde(MAD)were detected in the brain tissues.Pathological examinations of cerebral vascular were performed as well.Results Xuanyun-Ⅲ can reduce serum lipid and the content of Malondialdehyde(MAD)，and improve the SOD activity(P＜0.05).Cerebral endarterium endothelial cells of the rats in the model group presented universal degeneration，necrosis，ablation，and atheromatous plaque formed.The above indexes were all improved after the treatment of Xuanyun-Ⅲ.Conclusion Xuanyun-Ⅲ can improve the serum lipid and oxidizability of the rats with cerebral arteriosclerosis，alleviate the pathological lesion of brain blood vessel，which shows that Xuanyun-Ⅲ can prevent and treat cerebral arteriosclerosis.

Cerebral arteriosclerosis；Animal model；Drug intervention；Rats

973國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃資助項(xiàng)目(2004CB720302)

劉式威

1005-619X(2013)05-0396-03

2013-03-23)

·療養(yǎng)·