勞華毅，張靖巖，蔣 凱，張 峰，佟立權(quán)

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第五院普外科，黑龍江大慶163316)

小腸缺血再灌注(I/R)損傷，如腸系膜血管栓塞、腸扭轉(zhuǎn)及小腸移植及休克等，是導(dǎo)致患者不能順利康復(fù)的關(guān)鍵。既往研究表明L-carnitine對腎臟［1］I/R損傷有保護(hù)作用，但對小腸的I/R損傷研究尚未見報(bào)道。本研究探討L-carnitine對大鼠小腸I/R損傷的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑和動物:雄性Wistar大鼠30只，體質(zhì)量(250±30)g，［清潔級別，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司許可證號:SCK(滬)2012-0002］。L-carnitine注射劑(山東瑞陽制藥有限公司);SOD和MDA(上海越研生物科技有限公司)。DAO試劑盒(南京建成生物工程研究所)。BAX和BCL-2抗體(北京中山生物技術(shù)有限公司)。

1.2 動物分組及處理:動物隨機(jī)分3組(n=10):假手術(shù)組(S組)、缺血再灌注組(I/R組)、L-carnitine干預(yù)組(L組)。術(shù)前12 h禁食，自由飲水。I/R組術(shù)前10 min給予等量0.9%氯化鈉注射液。L組成模術(shù)前10 min于股靜脈緩慢推注L-carnitine(200 mg/kg)。S組僅切開腹部，游離腸系膜上動脈而不阻斷，按文獻(xiàn)方法制備小腸I/R模型［2］。腹腔注射10%水合氯醛3 mL/kg麻醉后，腹正中線切開，夾閉腸系膜上動脈根部1 h后，再灌注3 h，再次麻醉后，下腔靜脈采血5 mL，注入離心管，然后立即活殺取材。

1.3 指標(biāo)的檢測

1.3.1 血清DAO，MDA及SOD測定:按試劑盒說明書操作。

1.3.2 病理形態(tài)學(xué)檢查:冰凍機(jī)切片后，行HE染色。

1.3.3 Western blot法檢測:BAX及BCL-2蛋白表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (±s)表示，采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 各組血清SOD、MDA及DAO水平:與S組相比，I/R組血清SOD值明顯降低(P＜0.05)，MDA及DAO值明顯升高(P＜0.05)，與I/R組相比，L組各項(xiàng)指標(biāo)均明顯改善(P＜0.05)(表1)。

表1 血清SOD，MDA及DAO的變化Table 1 The serum concentrations of SOD，MDA and DAO(x ± s，n=10)

2.2 小腸組織形態(tài)學(xué)改變:S組絨毛排列整齊，血管周圍結(jié)構(gòu)正常，無出血，肌層纖維結(jié)構(gòu)排列整齊，漿膜層正常，I/R組見部分小腸絨毛上皮斷裂脫落，黏膜下水腫充血，大量炎性細(xì)胞浸潤，基底層斷裂;L組絨毛排列整齊，局部少量出血，壞死，中等量中性粒細(xì)胞浸潤(圖1)。

2.3 BAX及BCL-2蛋白表達(dá):與S組相比，I/R組BAX蛋白表達(dá)上調(diào)，BCL-2蛋白表達(dá)下調(diào)。與I/R組相比，L組BAX蛋白表達(dá)下調(diào)，而BCL-2蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)(圖2)。

3 討論

小腸I/R可引起的小腸及多器官損傷，其機(jī)制尚不清楚。近來，細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激在小腸I/R損傷中所起作用日益引起人們重視［3］。其中細(xì)胞凋亡過程中BCL-2蛋白家族扮演重要角色，BCL-2蛋白家族有兩類，一類具有抗細(xì)胞凋亡作用，如BCL-2，另一類是BAX，可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。另外氧化應(yīng)激引起I/R損傷會導(dǎo)致SOD活性降低，而MDA，DAO在I/R損傷后含量會明顯增加。既往研究表明L-carnitine通過降低氧自由基水平、對抗凋亡等［3］多種作用來改善心肌I/R損傷。本實(shí)驗(yàn)觀察到小腸蛋白BAX及BCL-2表達(dá)結(jié)果及氧化指標(biāo)均與上述文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致。

L-carnitine減輕腸I/R損傷可通過如下機(jī)制:1)提高SOD活性，清除氧自由基，降低MDA及DAO含量，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，對抗氧自由基的損傷，改善小腸I/R損傷作用。2)上調(diào)BCL-2基因和下調(diào)BAX基因表達(dá)減輕大鼠小腸I/R時腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡。

［1］Idrovo JP，Yang WL，et al．Stimulation of carnitine palmitoyltransferase 1 improves renal function and attenuates tissue damage after ischemia/reperfusion．［J］ Surg Res，2012，177:157 －164．

［2］佟立權(quán)，喬海泉，孟凡強(qiáng)．?；撬釋Υ笫笮∧c缺血再灌注后肝、腎損傷的保護(hù)作用［J］．中國普通外科雜志，2006，15:512－515．

［3］Liu Y，Yan S，Ji C，et al．Metabolomic changes and protective effect of(L)-carnitine in rat kidney ischemia/reperfusion injury．［J］ Kidney Blood Press Res，2012，35:373 －381．