徐韶杰，尚培中，李 偉，蔡大偉，韓雪梅，王靜波

宮頸鱗狀細胞癌是婦科常見的上皮來源惡性腫瘤，近年來發(fā)病率呈上升趨勢［1-2］。目前手術切除是其主要的治療方式，放療或化療是重要的輔助手段。盡管如此，不少患者在治療期間出現(xiàn)癌細胞的擴散、轉移，導致預后不良。近年研究表明，抑癌基因maspin和轉錄因子Ets-1在腫瘤侵襲和轉移過程中發(fā)揮了重要作用。本研究應用免疫組化EnVisionTM法對原發(fā)性宮頸鱗狀細胞癌組織進行maspin和Ets-1檢測，旨在探討兩者在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達及其相關性，為判斷預后、指導臨床治療提供客觀參考指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集解放軍316醫(yī)院和解放軍251醫(yī)院2006年1月4日—2012年10月25日原發(fā)性宮頸鱗狀細胞癌根治性手術切除標本70例，年齡42～81歲，平均58歲，≥58歲45例，＜58歲25例。腫瘤最大徑2.5～4.5 cm，平均3 cm，≥3 cm 47例，＜3 cm 23例。同時選取距腫瘤0.3 cm處癌旁組織標本30例作為對照。病例均無其他嚴重內科疾病或其他惡性腫瘤，術前均未行化療、放療及免疫治療。

1.2 方法 濃縮型maspin鼠抗人單克隆抗體及即用型Ets-1兔抗人多克隆抗體均由福州邁新生物技術開發(fā)有限公司提供，其中濃縮型maspin按1:150作為工作濃度。免疫組化染色采用EnVisionTM法，操作步驟參照相應的說明書進行。陽性對照切片由提供試劑公司提供，PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判斷標準［3］背景染色清晰，陽性反應呈黃色或棕黃色顆粒。結果判讀由兩位病理科醫(yī)師在10個高倍視野下觀察陽性細胞所占的比率，規(guī)定陽性細胞率＜20%為陰性，≥20%為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 17.0軟件包進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman檢驗，α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1 maspin和Ets-1在宮頸鱗狀細胞癌及癌旁組織中的表達 maspin和Ets-1在宮頸鱗狀細胞癌及癌旁組織中陽性反應主要定位于細胞質，見圖1、2。maspin陽性表達率在宮頸鱗狀細胞癌組織中為37.14%(26/70)，在癌旁組織中為70.00%(21/30)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=9.10，P ＜0.05)。Ets-1陽性表達率在宮頸鱗狀細胞癌組織中為64.28%(45/70)，在癌旁組織中為 13.33%(4/30)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=21.82，P ＜0.05)。

2.2 maspin和Ets-1表達與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理指標的關系 maspin表達陽性率在年齡及淋巴結有無轉移間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但在腫瘤大小、組織學分級、TNM分期及增殖活性Ki-67間，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Ets-1表達陽性率在年齡及腫瘤大小間，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但在組織學分級、TNM分期、淋巴結轉移及增殖活性Ki-67間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

圖1 maspin在宮頸鱗狀細胞癌組織、癌旁組織中的表達(EnVisionTM法×100)

圖2 Ets-1在宮頸鱗狀細胞癌組織、癌旁組織中的表達(En-VisionTM法×100)

表1 maspin和Ets-1表達與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理指標的關系

2.3 maspin和Ets-1在宮頸鱗狀細胞癌組織中表達的相關性 70例宮頸鱗狀細胞癌組織中，maspin和Ets-1表達同時陽性者11例，同時陰性者10例，maspin陽性、Ets-1陰性者15例，maspin陰性、Ets-1陽性者34例，兩者呈顯著負相關(r=－0.35，P＜0.05)。

3 討論

maspin基因是一種腫瘤抑制基因，位于染色體18q21.3，由6個內含子和7個外顯子構成。第1個外顯子不編碼蛋白質，其啟動區(qū)無TATA盒，但富含GC［4］。maspin蛋白屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的一種，相對分子量為42 000，其C端位點環(huán)為主要的反應部位，該區(qū)域高度保守，如其變異可影響maspin蛋白功能;其N端有識別靶蛋白和結合膠原作用的P1殘端。maspin蛋白在人體正常甲狀腺、乳腺及前列腺等組織中呈高水平表達，通過降低腫瘤細胞運動侵襲能力、抑制新生血管形成等多種途徑發(fā)揮抑制腫瘤的作用。在乳腺癌、非小細胞肺癌和卵巢癌等腫瘤中，maspin呈低表達或表達缺失，表明其異常表達參與了多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［5-7］。本實驗表明，maspin在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達明顯低于癌旁組織，推測maspin在良性病變或正常組織中呈高水平表達，而在惡性病變組織中呈低水平表達，這與張遠起等［3］研究結論相符。分析maspin與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理指標之間的關系時發(fā)現(xiàn)，其表達與患者年齡及淋巴結轉移無關，這與maspin具有抑制癌細胞的浸潤轉移結論［8］不符。說明maspin在不同組織中的功能表現(xiàn)不盡相同，可能與其C端活性位點環(huán)功能有關。成少華等［9］研究了胃癌組織中maspin的表達，結果顯示在高、中分化組高于低分化組、TNMⅠ～Ⅱ期高于Ⅲ～Ⅳ期。本實驗顯示，maspin與腫瘤大小、組織學分級及TNM分期有關，且分化程度越高，其表達水平相對亦高，顯示maspin可在一定程度上反映腫瘤的惡性程度。Ki-67是一種核增殖標志物，其表達與細胞的增殖活性密切相關。Ki-67在多種惡性腫瘤中呈高表達，其表達水平越高，腫瘤細胞增殖就越快，也就更易于發(fā)生侵襲、轉移［10-11］。實驗發(fā)現(xiàn)，maspin在Ki-67高表達者中的陽性率低于Ki-67低表達者，推測maspin具有與Ki-67相反的功能。

Ets(E26 transformation-specific)家族轉錄因子主要包括Ets-1和Ets-2，其結構均有一特異的DNA結合序列，影響著Ets-1和Ets-2的活性［12］。Ets-1基因位于染色體11q23，其編碼的蛋白質相對分子量為54 000。Ets-1能夠調節(jié)一系列與細胞外基質重建有關的基因表達，如尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化物(uPA)，基質金屬蛋白酶(MMP)-1、3、9，整合素β-2等，這些物質可降解細胞外基質，使細胞黏附能力降低，有利于腫瘤細胞的游走、浸潤生長和轉移。Ets-1在肺癌、胃癌、結直腸癌等多種實體腫瘤中呈高表達［13-15］。本實驗結果顯示，Ets-1在宮頸鱗狀細胞癌組織中呈高表達，且明顯高于癌旁組織，這與鄭麗娟等［16］研究結論相符。Ets-1在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達與患者年齡及腫瘤大小無關，而與組織學分級、TNM分期及淋巴結轉移有關，且在增殖活性Ki-67表達越高的患者中其表達亦越高，因而推測Ets-1的高表達預示著宮頸鱗狀細胞癌惡性度高、預后不良。這與Ets-1在腫瘤浸潤過程中主要參與細胞外基質重塑、降解有關［17］。

對一些腫瘤標志物的免疫組化研究，有助于預測宮頸鱗狀細胞癌對放療的敏感性，作為新輔助化療療效的預測指標，也為分子靶向治療帶來了新的曙光［18-21］。本研究結果顯示maspin與Ets-1之間呈顯著負相關，可見兩者之間存在信號傳導進而相互調節(jié)，其機制可能與maspin的結構有關，在maspin啟動子區(qū)域存在多個重要轉錄因子結合點，其中就包括Ets-1［8］。資料顯示，maspin能夠直接抑制培養(yǎng)基中血管內皮細胞向堿性纖維生長因子和血管內皮生長因子的運動，抑制有絲分裂和血管的生成［22］。然而，有絲分裂信號可以改變Ets-1的磷酸化狀態(tài)，使其磷酸化，進而抑制其DNA結合能力，由此可知，有絲分裂信號可抑制Ets-1活性［12］。

綜上所述，在宮頸鱗狀細胞癌組織中，maspin表達下調，而Ets-1表達上調，前者與腫瘤大小、組織學分級、TNM分期及增殖活性Ki-67顯著相關，后者與組織學分級、TNM分期、淋巴結轉移及增殖活性Ki-67顯著相關。兩者表達呈負相關，共同參與了宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展。探討它們的生物學功能及其相關作用機制，有利于對宮頸鱗狀細胞癌的綜合治療和預后評估。

［1］朱彤宇，支園園，武愛芳，等.宮頸脫落細胞人乳頭狀瘤病毒基因分型檢測在宮頸癌篩查及宮頸上皮內瘤樣病變宮頸環(huán)形電切術后隨訪中的意義［J］.解放軍醫(yī)藥雜志，2012，24(3):14-17.

［2］Cheng Y，Zhou Y，Jiang W J，et al.Significance of E-cadherin，β-catenin，and vimentin expression as postoper-ative prognosis indicators in cervical squamous cell carcinoma［J］.Hum Pathol，2012，43(8):1213-1220.

［3］張遠起，陳小東，李建文，等.乳腺癌組織中血管內皮生長因子和抑癌基因Maspin的表達及意義［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2012，12(3):493-496.

［4］Lin Z，Liu Y，Sun Y，et al.Expresssion of Ets-1，Ang-2 and maspin in ovarian cancer and their role in tumor angiogenesis［J］.J Exp Clin Cancer Res，2011，30(9):31-37.

［5］齊淑軼，蔡勇，鄧蒞霏，等.Maspin在非小細胞肺癌組織中的表達及意義［J］.山東醫(yī)藥，2012，52(3):9-11.

［6］楊偉萍，韋長元，周建華，等.Maspin在65例乳腺癌中的表達及其臨床意義［J］.腫瘤學雜志，2010，16(3):163-167.

［7］楊娜，安牧爾.Maspin和VEGF-C蛋白表達與卵巢癌發(fā)生及臨床病理學的關系［J］.疑難病雜志，2012，11(4):274-276.

［8］吳齊斌，宋一一，孫蓬明.Maspin基因在婦科惡性腫瘤中的研究進展［J］.海峽預防醫(yī)學雜志，2012，18(1):25-27.

［9］成少華，白玉賢，陶莉，等.Maspin與EGFR在胃癌中的表達及臨床意義［J］.中國腫瘤，2012，21(1):71-74.

［10］李永昊，肖玉周，汪萬英.COX-2、Ki-67在骨肉瘤中的表達及臨床意義［J］.中華全科醫(yī)學，2010，8(3):274-276.

［11］Song S H，Park H M，Eom D W，et al.The expression of p16(INK4a)and Ki-67 in relation to high-risk human papilloma viral load and residual disease after conization with positive margins［J］.Int J Gynecol Cancer，2007，17(4):858-867.

［12］于湧，張一楚.Ets家族轉錄因子及其與腫瘤浸潤轉移的關系［J］.國外醫(yī)學腫瘤學分冊，2003，30(3):177-179.

［13］王新允，孫翠云，鄭海燕，等.肺癌中Ets1 mRNA和c-Met蛋白表達細胞芯片的研究［J］.國際呼吸雜志，2008，28(1):1-3.

［14］任濤文，周永寧，吳靜，等.胃癌組織中Ets-1的表達及其與血管生成臨床病理特征和預后的關系［J］.中華腫瘤雜志，2009，31(9):674-678.

［15］何常，陳佳，鐘愉，等.結直腸癌內Ets-1、血管內生長因子C蛋白表達及微血管和微淋巴管密度的意義［J］.中華病理學雜志，2007，36(5):331-332.

［16］鄭麗娟，盧啟明.Ets-1和E-cadherin在食管鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義［J］.中華消化內鏡雜志，2010，27(4):204-205.

［17］Pap Z，Pavai Z，Denes L，et al.An immunohistochemical study of colon adenomas and carcinomas:E-cadherin，Syndecan-1，Ets-1［J］.Pathol Oncol Res，2009，15(4):579-587.

［18］劉秀芳，王炳勝，熊正文，等.微血管密度及增殖細胞核抗原表達與宮頸癌放射敏感性的關系初探［J］.中國腫瘤臨床與康復，2005，12(2):100-102.

［19］王靜波，肖穎麗，張瑩，等.血管內皮生長因子在宮頸癌新輔助化療前后的表達及意義［J］.細胞與分子免疫學雜志，2010，26(12):1280-1281.

［20］Yeasmin S，Nakayama K，Rahman M T，et al.Expression of nuclear Notch3 in cervical squamous cell carcinomas and its association with adverse clinical outcomes［J］.Gynecol Oncol，2010，117(3):409-416.

［21］Murakami A，F(xiàn)ukushima C，Yoshidomi K，et al.Suppression of carbonyl reductase expression enhances malignant behaviour in uterine cervical squamous cell carcinoma:Carbonyl reductase predicts prognosis and lymph node metastasis［J］.Cancer Lett，2011，311(1):77-84.

［22］Zhang M，Volpert O，Shi Y H，et al.Maspin is anangiogenesis inhibitor［J］.Nat Med，2000，6(2):196-199.