薛 君，龐 靖，徐 蕾

(1.山東省青島市黃島區(qū)中醫(yī)院藥劑科，山東 青島 266500;2.山東省青島市藥品檢驗(yàn)所，山東 青島 266071)

注射用硫普羅寧的主要成分是硫普羅寧，臨床廣泛用于急慢性肝炎、脂肪肝、酒精肝以及藥物性肝損害等疾病的治療[1]。目前所有國(guó)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)[2]均采用滴定法測(cè)定含量，本研究中首次建立的高效液相色譜法采用最常用的ODS柱，方法耐用性好，并且供試品溶液及對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性優(yōu)于文獻(xiàn)報(bào)道的方法[3]?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜系統(tǒng)(四元泵、紫外檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱及Chemstation工作站);Sartorius CP225D型分析天平。注射用硫普羅寧(批號(hào)為0110128，110205，110305)及輔料(甘露醇)均由南開允公藥業(yè)有限公司提供，規(guī)格均為0.2 g;硫普羅寧對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)為100991－200701);乙腈為色譜純;磷酸為優(yōu)級(jí)純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Waters C18色譜柱(150 mm × 4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:水(用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.2)－乙腈(90∶10);檢測(cè)波長(zhǎng):210 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:20 μL。理論板數(shù)按硫普羅寧峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。高效液相色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取硫普羅寧對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解后稀釋成每1 mL中約含硫普羅寧100 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。精密量取供試品適量，用流動(dòng)相稀釋制成每1 mL中約含硫普羅寧100 μg的溶液，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密稱取硫普羅寧對(duì)照品25.01 mg，置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取此溶液適量，用流動(dòng)相分別稀釋制成質(zhì)量濃度為 25.01，50.02，100.04，200.08，400.16 μg/mL 的系列溶液;按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程 Y=15.124X+35.241，r=0.9999(n=5)。結(jié)果表明，硫普羅寧質(zhì)量濃度在 25.01～400.16 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密量取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果硫普羅寧峰面積的 RSD=0.25%(n=5)，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):將對(duì)照品溶液及供試品溶液室溫放置，在0，2，4，6，12，24，48 h 時(shí)取 20 μL 溶液進(jìn)樣。結(jié)果的 RSD 分別為0.84%和0.69%(n=7)，表明對(duì)照品溶液及供試品溶液在48 h內(nèi)峰面積均無(wú)明顯變化。

重復(fù)性試驗(yàn):精密量取同一批樣品(批號(hào)為110128)，依法制備供試品溶液6份，按含量測(cè)定方法稀釋，測(cè)定。結(jié)果平均含量為98.1%，RSD=0.59% 。

加樣回收試驗(yàn):將空白輔料按處方比例混勻，備用。按80%，100%，120%3個(gè)不同濃度分別精密稱取硫普羅寧對(duì)照品9份，按處方比例各加入上述備好的空白輔料中，混勻，照含量測(cè)定方法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 硫普羅寧加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

依法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品含量，結(jié)果批號(hào)分別為110128，110205，110305 的樣品中含量分別為 98.1%，97.6% ，97.8%。

3 討論

硫普羅寧及其降解產(chǎn)物均在210 nm附近有最大吸收，故檢測(cè)波長(zhǎng)選擇210 nm。先后考察了3種流動(dòng)相的適用性，即磷酸溶液(pH=3.2)－乙腈(90 ∶10)，磷酸溶液(pH=2.7)－乙腈(90∶10)，磷酸溶液(pH=2.2)－ 乙腈(90 ∶10)。結(jié)果表明，隨著磷酸溶液pH的降低，主峰及雜質(zhì)峰的峰形明顯改善，分離度和理論板數(shù)均顯著增大，由于流動(dòng)相的pH應(yīng)控制在2～8[4]，故選擇文中系統(tǒng)為流動(dòng)相。

文中采用的HPLC法，和文獻(xiàn)方法[3]相比，能大大縮短主要雜質(zhì)硫普羅寧的二硫化物的出峰時(shí)間，從而大幅度縮短了分析時(shí)間。

[1]張曉景.硫普羅寧的藥理作用及臨床應(yīng)用 [J].中國(guó)藥業(yè)，2005，14(8):91－92.

[2]YBH24242006，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)[S].

[3]黃 靜，尹燕杰，黃海偉，等.HPLC測(cè)定注射用硫普羅寧含量及其有關(guān)物質(zhì)[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2009，44(14):1 108 －1 111.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄28.