沈小鐘 ，劉 瑤 ，楊燕軍 ，楊 帆

(1.廣東省中藥研究所，廣東 廣州 510520;2.暨南大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510632;3.重慶市食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121)

隨著中藥現(xiàn)代化步伐的進(jìn)一步加快，無論是消費(fèi)者、藥品生產(chǎn)企業(yè)、科研工作者還是藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)，都對(duì)中藥質(zhì)量提出了更高要求?，F(xiàn)有中藥標(biāo)準(zhǔn)多以單一成分含量反映中藥產(chǎn)品質(zhì)量，但中藥成分復(fù)雜，僅以一種成分含量無法全面反映中藥質(zhì)量，通過多指標(biāo)同步質(zhì)量控制反映中藥質(zhì)量已成為眾多專家學(xué)者的共識(shí)[1]。傳統(tǒng)多指標(biāo)同步質(zhì)量控制必然要求眾多中藥對(duì)照品，為實(shí)現(xiàn)在中藥對(duì)照品緊缺、成本高昂的條件下的多指標(biāo)同步質(zhì)量控制，王智民等[2]于2006年首次提出了一測(cè)多評(píng)法(quantitative analysis of multi-components by single-maker，QAMS)來解決此問題。該法通過采用一種內(nèi)參物檢測(cè)多種組分，節(jié)約、準(zhǔn)確，已得到廣泛認(rèn)可和應(yīng)用，并收載于2010年版《中國(guó)藥典(一部)》[3]?，F(xiàn)對(duì)近年“一測(cè)多評(píng)”理論與應(yīng)用的研究進(jìn)展進(jìn)行初步探討，為中藥質(zhì)量控制提供參考。

1 概念與原理

一測(cè)多評(píng)法是通過測(cè)定中藥中一種代表性成分的含量，依據(jù)相對(duì)校正因子推算該中藥中多種待測(cè)成分含量，并控制計(jì)算值與實(shí)測(cè)值符合定量方法學(xué)要求的一種多指標(biāo)同步質(zhì)量控制方法。部分學(xué)者提出了其他名稱，如系統(tǒng)內(nèi)標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)多控法、替代對(duì)照品法等[4-16]，原理基本相同。

該方法的原理是[1]，在一定的線性范圍內(nèi)，成分的量(質(zhì)量或濃度)與檢測(cè)器響應(yīng)成正比。在多指標(biāo)(s，a，b，…，i，…)質(zhì)量評(píng)價(jià)時(shí)，以藥材(或成藥)中某一典型有效成分作內(nèi)參物(s)，建立內(nèi)參物與其他待測(cè)成分(a，b，…，i，…)間的相對(duì)校正因子(RCF，fsa，fsb，fsc，…)，fsi=fs/fi=(As/Cs)/(Ai/Ci)(公式一)式中 As為內(nèi)參物對(duì)照品s峰面積，Cs為內(nèi)參物對(duì)照品s濃度，Ai為某待測(cè)成分對(duì)照品i峰面積，Ci為某待測(cè)成分對(duì)照品i濃度。

在方法學(xué)建立時(shí)，主要是求出內(nèi)參物與各待測(cè)成分間的RCF，并把它作為一個(gè)常數(shù)用于含量測(cè)定中[3]。在測(cè)定含量時(shí)，內(nèi)參物(s)的濃度可按常規(guī)方法(藥典附錄ⅥD)進(jìn)行測(cè)定(Cs)，應(yīng)用 RCF(fsa，fsb，fsc，…)，結(jié)合內(nèi)參物(s)實(shí)測(cè)值 Cs，計(jì)算待測(cè)成分(a，b，…，i，…)的濃度 Ci。Ci=fsi× Cs× (Ai/As)(公式二)式中 Ai為供試品中待測(cè)成分i的峰面積，Ci為供試品中待測(cè)成分i的濃度，As為供試品中內(nèi)參物s的峰面積，Cs為供試品中內(nèi)參物s的濃度，fsi為內(nèi)參物s對(duì)待測(cè)成分i的校正因子。

一測(cè)多評(píng)法由王智民等[2]首次提出，并應(yīng)用于木通的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究。到目前為止，該方法已在多種中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中得到應(yīng)用，涉及皂苷、黃酮、生物堿、蒽醌等多類成分。高慧敏等[16]認(rèn)為，一測(cè)多評(píng)法將會(huì)成為未來中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要發(fā)展方向。

2 應(yīng)用

2.1 皂苷類內(nèi)參物

王智民等[2]以木通藥材為研究對(duì)象，實(shí)現(xiàn)了通過皂苷PJ1與白木通皂苷B和白木通皂苷C之間相對(duì)保留時(shí)間差進(jìn)行色譜峰定位，利用皂苷PJ1和校正因子計(jì)算含量，結(jié)果與外標(biāo)法測(cè)定值無顯著性差異。朱晶晶等[17]同步測(cè)定人參和三七藥材中8種人參皂苷的含量，利用人參皂苷Rb1和校正因子同步測(cè)定人參二醇型皂苷 Rg1，Re，Rf，Rh1和原人參三醇型皂苷 Rc，Rb2，Rb3，Rd 含量，并將結(jié)果與外標(biāo)法所測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，進(jìn)一步驗(yàn)證了一測(cè)多評(píng)法的可靠性和可行性。黃帥等[18]對(duì)一測(cè)多評(píng)法用于柴胡藥材3種皂苷含量測(cè)定技術(shù)適用性和應(yīng)用可行性進(jìn)行了探討，實(shí)現(xiàn)了以柴胡皂苷a與柴胡皂苷c和柴胡皂苷d之間的相對(duì)保留時(shí)間差進(jìn)行色譜峰定位，利用柴胡皂苷a和相對(duì)校正因子計(jì)算含量，結(jié)果與外標(biāo)法測(cè)定值無顯著性差異。曹恒濤等[19]建立了替代藥品對(duì)照法測(cè)定重樓藥材中重樓皂苷Ⅰ、重樓皂苷Ⅱ、重樓皂苷Ⅵ、重樓皂苷Ⅶ的含量測(cè)定方法，采用柴胡皂苷d為對(duì)照品，以柴胡皂苷d與4種重樓皂苷相對(duì)保留時(shí)間比進(jìn)行色譜峰定位，利用柴胡皂苷和相對(duì)校正因子計(jì)算4種重樓皂苷含量。馬超一[20]則利用重樓皂苷Ⅰ為對(duì)照，采用一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定5種甾體皂苷含量。宋永貴等[21]建立了同時(shí)測(cè)定木通果實(shí)預(yù)知子中多種三萜皂苷成分的一測(cè)多評(píng)質(zhì)量控制方法，以皂苷PD和相對(duì)校正因子計(jì)算皂苷X、皂苷B、皂苷A含量。詳見表1。

表1 皂苷類內(nèi)參物QAMS研究

2.2 黃酮類內(nèi)參物

朱晶晶等[22]建立了黃芩藥材中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素4種成分一測(cè)多評(píng)法含量測(cè)定方法，通過黃芩苷和相對(duì)校正因子計(jì)算各成分的含量，與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果無顯著性差異。該試驗(yàn)還考察了相對(duì)保留時(shí)間差和保留時(shí)間比作為色譜峰定位指標(biāo)的準(zhǔn)確性，得出相對(duì)保留時(shí)間差作為黃芩中目標(biāo)色譜峰定位方法比較合理。彭維等[23]建立了以槲皮苷為內(nèi)參物的一測(cè)多評(píng)法，驗(yàn)證了其測(cè)定田基黃中4個(gè)黃酮成分含量與外標(biāo)測(cè)定法測(cè)得結(jié)果無顯著性差異。蔡海霞等[24]建立了黃芪中4個(gè)主要異黃酮類化合物的一測(cè)多評(píng)含量測(cè)定方法，以芒柄花素和相對(duì)校正因子計(jì)算毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷和毛蕊異黃酮的含量，實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng)，并對(duì)34批黃芪藥材及飲片計(jì)算結(jié)果與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果均顯示計(jì)算值與實(shí)測(cè)值間無顯著性差異。于霄等[25]以淫羊藿藥材為研究對(duì)象，藥材中4個(gè)主要有效成分為指標(biāo)成分，分別建立淫羊藿苷與朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的相對(duì)校正因子，計(jì)算含量，實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng)，并通過相對(duì)保留時(shí)間比對(duì)色譜峰進(jìn)行定位，同時(shí)采用外標(biāo)法驗(yàn)證，得出一測(cè)多評(píng)法計(jì)算結(jié)果與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果無顯著差異。李愛紅等[26]以槲皮素為內(nèi)參物，實(shí)現(xiàn)通過槲皮素與山柰素、異鼠李素之間相對(duì)保留時(shí)間比進(jìn)行色譜峰定位，采用槲皮素和相對(duì)校正因子計(jì)算含量;同時(shí)分別采用外標(biāo)法和一測(cè)多評(píng)法測(cè)定銀杏葉膠囊中3種黃酮醇苷類成分的含量，結(jié)果顯示一測(cè)多評(píng)法計(jì)算值與外標(biāo)法的實(shí)測(cè)值之間沒有顯著性差異。孔晶晶等[27]采用一測(cè)多評(píng)法同步測(cè)定連翹中4個(gè)主要成分的含量，重點(diǎn)探討不同類型化合物之間開展一測(cè)多評(píng)研究的準(zhǔn)確性和可行性。詳見表2。

表2 黃酮類內(nèi)參物QAMS研究

2.3 生物堿類內(nèi)參物

宋亞芳等[28]以吳茱萸為研究對(duì)象，重點(diǎn)探討了一測(cè)多評(píng)法在不同類成分之間應(yīng)用的可行性與適應(yīng)性，建立吳茱萸次堿與吳茱萸內(nèi)酯、吳茱萸堿的相對(duì)校正因子，并用該校正因子進(jìn)行含量計(jì)算，實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng);同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定藥材中含量，并比較計(jì)算值與實(shí)測(cè)值并無顯著性差異。研究發(fā)現(xiàn)，在選擇內(nèi)參物時(shí)，以吳茱萸次堿為內(nèi)參物，采用相對(duì)校正因子計(jì)算樣品中其他兩種成分的含量與實(shí)測(cè)結(jié)果誤差最小，而以吳茱萸內(nèi)酯或吳茱萸堿為內(nèi)參物計(jì)算其他兩種成分含量與實(shí)測(cè)結(jié)果誤差偏大。該方法對(duì)目標(biāo)色譜峰選擇相對(duì)保留比值方法進(jìn)行定位?？锲G輝等[29]以黃連藥材為研究對(duì)象，以藥材中5個(gè)典型生物堿為指標(biāo)，建立小檗堿與巴馬汀、黃連堿、表小檗堿、藥根堿的相對(duì)校正因子，并用該校正因子進(jìn)行含量計(jì)算，實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng);同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定藥材中該5種生物堿的含量，并比較得出計(jì)算值與實(shí)測(cè)值無顯著性差異。劉暉暉等[30]在藥典標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，建立黃連配方顆粒的一測(cè)多評(píng)標(biāo)準(zhǔn)。汪坤等[31]應(yīng)用一測(cè)多評(píng)法優(yōu)選黃連最佳提取工藝，可以有效提取黃連中小檗堿、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀多種生物堿，為中藥工藝合理性評(píng)價(jià)提供了新的思路。李文亮等[32]以博落回果實(shí)為研究對(duì)象，建立以原阿片堿和相對(duì)校正因子，計(jì)算別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿的含量，實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng);同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定藥材中4種生物堿的含量，驗(yàn)證一測(cè)多評(píng)法的準(zhǔn)確性和可行性。尹萌等[33]建立了同時(shí)測(cè)定關(guān)黃柏中小檗堿、巴馬汀和藥根堿3種生物堿的一測(cè)多評(píng)方法，可用于控制關(guān)黃柏藥材及飲片的質(zhì)量。李岑等[34]以藏藥當(dāng)佐為研究對(duì)象，建立胡椒堿和校正因子計(jì)算沒食子酸、羥基紅花黃色素-A、桂皮醛的含量的一測(cè)多評(píng)法。劉永利等[35]建立咳喘寧片中5種生物堿類成分的一測(cè)多評(píng)含量測(cè)定方法，以嗎啡為對(duì)照，建立嗎啡和校正因子計(jì)算磷酸可待因、鹽酸罌粟堿、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量的一測(cè)多評(píng)方法，在進(jìn)行色譜峰定位時(shí)研究發(fā)現(xiàn)兩種定位方法均不可靠。見表3。

表3 生物堿類內(nèi)參物QAMS研究

2.4 其他類內(nèi)參物

李文龍等[36]分別以綠原酸和咖啡酸為內(nèi)參物建立了金銀花中6種有機(jī)酸的一測(cè)多評(píng)方法。楊菲等[37]以中藥丹參為研究對(duì)象，以丹參素鈉為內(nèi)參物建立了原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B一測(cè)多評(píng)法。黃山君等[38]以芍藥苷為內(nèi)標(biāo)物，建立其與芍藥內(nèi)酯苷的相對(duì)校正因子，并進(jìn)行含量測(cè)定，實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng)。楊芳等[39]首次將一測(cè)多評(píng)法應(yīng)用于川白芷藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)中，該法所得3種香豆素類成分含量與傳統(tǒng)外標(biāo)法所得含量之間沒有顯著性差異。楊桂秀等[40]將一測(cè)多評(píng)法應(yīng)用于黨參研究，以黨參炔苷為內(nèi)標(biāo)，實(shí)現(xiàn)黨參炔苷、黨參苷Ⅳ和蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的一測(cè)多評(píng)。王鈺瑩等[41]建立三黃片中以大黃素為內(nèi)參物，大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚的一測(cè)多評(píng)法。王瑞等[42]建立了赤芍中兩種不同類型共6個(gè)化學(xué)成分的一測(cè)多評(píng)法。馮偉紅等[43]以中藥秦皮為研究對(duì)象，以秦皮甲素為參照物，建立了秦皮乙素、秦皮苷和秦皮素一測(cè)多評(píng)法。賀鳳成等[44]建立五味子中4個(gè)木脂素類化合物一測(cè)多評(píng)法。林芳等[45]建立了杜仲中不同類成分的一測(cè)多評(píng)法，同時(shí)測(cè)定綠原酸、京尼平苷酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量。孟江等[46]建立干姜藥材中4種姜酚類成分含量同時(shí)測(cè)定的一測(cè)多評(píng)法。見表4。

表4 其他類內(nèi)參物QAMS研究

3 結(jié)語(yǔ)

一測(cè)多評(píng)法因其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，具有廣泛的應(yīng)用前景。從已有的研究結(jié)果來看，合理建立的中藥一測(cè)多評(píng)法計(jì)算結(jié)果與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果無顯著性差異。由于該理論提出時(shí)間尚短，加上部分同原理卻不同名稱的方法出現(xiàn)，使得在應(yīng)用該法時(shí)，關(guān)鍵參數(shù)計(jì)算方法和取值標(biāo)準(zhǔn)選擇尤為重要，如相對(duì)校正因子RCFs取值:王智民教授等最初提出該理論時(shí)給出的 f值定義為 fi=Ci/Ai[2];而幾年后他對(duì)定義作了修正，在2011年其發(fā)表的一測(cè)多評(píng)法建立的技術(shù)指南中由公式一[1]推出f值定義已經(jīng)修正為 fi=Ai/Ci。因此，部分研究者試驗(yàn)得出的RCFs值實(shí)際是1/f，但是未作說明容易產(chǎn)生混亂;此外，如作為一種標(biāo)準(zhǔn)建議統(tǒng)一取值方法，試驗(yàn)結(jié)論需要對(duì)影響因素限定的應(yīng)該依據(jù)試驗(yàn)結(jié)論加以限定并且進(jìn)行驗(yàn)證，個(gè)人認(rèn)為f值應(yīng)取驗(yàn)證值為佳。

另一重要問題是多成分同步測(cè)定時(shí)指標(biāo)峰的定位。部分研究者可能忽略了該法是為克服對(duì)照品缺乏情況下，以一種對(duì)照品的檢測(cè)實(shí)現(xiàn)多指標(biāo)同步測(cè)定和質(zhì)量評(píng)價(jià)，部分文獻(xiàn)沒有給出校正時(shí)間，影響了研究在生產(chǎn)檢驗(yàn)中的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值;部分研究者在深入研究后發(fā)現(xiàn)建立的一測(cè)多評(píng)方法無法在缺少對(duì)照品前提下進(jìn)行指標(biāo)峰定位，如劉永利等經(jīng)過深入研究后發(fā)現(xiàn)以嗎啡為內(nèi)參物建立咳喘寧片的含量測(cè)定方法一測(cè)多評(píng)法可以用于含量測(cè)定但是無法進(jìn)行色譜峰定位，說明該方法用于該制劑質(zhì)量控制時(shí)還需要進(jìn)一步深入研究。

筆者首次從應(yīng)用角度對(duì)現(xiàn)有一測(cè)多評(píng)研究現(xiàn)狀進(jìn)行初步探討，并淺議了實(shí)際使用該法測(cè)定過程中可能碰到的一些問題。一測(cè)多評(píng)法是在對(duì)照品缺乏的情況下欲實(shí)現(xiàn)多指標(biāo)同步評(píng)價(jià)，由王智民教授提出，并且得到許多學(xué)者的推廣。作為一種多指標(biāo)質(zhì)量控制評(píng)價(jià)新模式和新方法，雖然提出之初是作為含量測(cè)定方法的一種補(bǔ)充，但是隨著藥品標(biāo)準(zhǔn)的提高，對(duì)照品需求量將會(huì)越來越龐大，制備大量對(duì)照品必然消耗過多的藥材資源并衍生出其他一些問題，而現(xiàn)代社會(huì)越來越提倡節(jié)約、低碳和環(huán)保理念，今后這種矛盾將會(huì)更加突出。如應(yīng)用該方法建立QAMS全國(guó)共享數(shù)據(jù)庫(kù)，不僅可拓寬該法的應(yīng)用范圍，也可為緩解日益突出的資源矛盾作出貢獻(xiàn)。

致謝:本文得到了廣東省食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)認(rèn)證中心周衛(wèi)軍老師的指導(dǎo)，在此致謝。

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