趙森銘

(河南省洛陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 洛陽(yáng) 471023)

龍膽瀉肝湯方出自清代汪昂《醫(yī)方集解》[1]，由龍膽、柴胡、黃芩、梔子、炙甘草等10味藥材組方[2]，是中醫(yī)治療肝膽實(shí)火、三焦?jié)駸岬闹匾妓嶽3]，臨床應(yīng)用廣泛，治療效果頗佳，劑型亦較多，其中龍膽瀉肝丸是常用劑型。2010年版《中國(guó)藥典(一部)》龍膽泄肝丸薄層鑒別前處理方法操作煩瑣復(fù)雜，不利于日?？焖俦O(jiān)督檢驗(yàn)。筆者發(fā)現(xiàn)，按2010年版《中國(guó)藥典(一部)》龍膽泄肝丸薄層鑒別2方法操作，即使無(wú)龍膽藥材的陰性樣品，在龍膽苦苷對(duì)照品相應(yīng)位置也會(huì)顯相同顏色的斑點(diǎn)，經(jīng)證明此斑點(diǎn)為梔子苷的斑點(diǎn)，說(shuō)明該法專屬性不強(qiáng)[4－5]。因此，筆者建立了一個(gè)可以同時(shí)鑒別龍膽與梔子的薄層鑒別方法。在此方法的基礎(chǔ)上，依據(jù)全信息薄層鑒別理論，經(jīng)過(guò)研究和優(yōu)化，進(jìn)一步優(yōu)化色譜條件，建立了同時(shí)檢測(cè)梔子、龍膽、甘草和地黃薄層鑒別方法。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，還建立了同時(shí)測(cè)定柴胡和當(dāng)歸薄層鑒別方法。通過(guò)2個(gè)薄層色譜法做到了對(duì)6味中藥材進(jìn)行鑒別，可大幅度節(jié)約分析成本，全面、直接地反映藥品的質(zhì)量?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Reprostar 3型薄層數(shù)碼成像系統(tǒng)，TLC pLate HeaterⅢ薄層加熱板，940型TLC紫外燈箱，均為Camag公司生產(chǎn);瑞士普利賽XT型電子天平;F80型高速萬(wàn)能粉碎機(jī);KQ2200B型超聲清洗儀器;HH－6型恒溫水浴鍋;GF254薄層板(自制，10 cm×10 cm，10 cm×20 cm)。龍膽瀉肝丸(樣品1，洛陽(yáng)順勢(shì)藥業(yè)有限公司，批號(hào)20111203;樣品2，北京同仁堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)2082067;樣品3，陜西香菊藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)20110606);龍膽苦苷對(duì)照品(批號(hào)0770－20004)，梔子苷對(duì)照品(批號(hào)0749－9203)，梓醇對(duì)照品(批號(hào) 0808－9602)，柴胡皂苷 d(批號(hào) 110778－200404)，甘草對(duì)照藥材(批號(hào)120904－200410)，當(dāng)歸對(duì)照藥材(批號(hào)120927－200613)，均來(lái)自于中國(guó)藥品生物制品檢定所;試劑、試藥均為分析純(天津市化學(xué)試劑三廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 龍膽、梔子、地黃、甘草

取3個(gè)廠家樣品各10 g，研細(xì)，加石油醚(60～90℃)40 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，藥渣加甲醇30 mL，超聲30 min，濾過(guò)，濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。同法自制缺龍膽陰性對(duì)照品溶液、缺梔子陰性對(duì)照品溶液、缺地黃陰性對(duì)照品溶液、缺甘草陰性對(duì)照品溶液。取梓醇對(duì)照品加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取梔子苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取龍膽苦苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取甘草對(duì)照藥材粉末0.5 g，加甲醇5 mL，超聲處理10 min，取上清液，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述11種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯－丙酮－甲酸－水(5∶5∶1∶0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在紫外光燈(365 nm)下觀察。結(jié)果供試品溶液色譜中，與梓醇對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置顯淺藍(lán)紫色斑點(diǎn)，與梔子苷對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置顯橙紅色斑點(diǎn)，與龍膽苦苷對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置顯灰藍(lán)色斑點(diǎn)，在與甘草對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上至少顯1個(gè)相同的黃色斑點(diǎn)(見圖1)。

圖1 龍膽、梔子、地黃、甘草的薄層色譜圖

2.2 柴胡、當(dāng)歸

取3個(gè)廠家樣品各5 g，研細(xì)，加甲醇30 mL，超聲30 min，濾過(guò)，濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。同法自制缺柴胡陰性對(duì)照品溶液、缺當(dāng)歸陰性對(duì)照品溶液。取柴胡皂苷d對(duì)照品加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取當(dāng)歸對(duì)照藥材粉末0.5 g，加甲醇5 mL，超聲處理10 min，取上清液作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述7種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，氯仿 －甲醇(8.5 ∶1.5)為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光燈(254 nm)下觀察。供試品溶液色譜中，與柴胡皂苷d對(duì)照品溶液色譜和當(dāng)歸對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)(見圖 2)。

圖2 柴胡、當(dāng)歸的薄層色譜圖

3 討論

受已積累的高效液相色譜法啟示，通過(guò)篩選前人報(bào)道的薄層色譜法，尋找到同時(shí)分離和鑒別多種中藥成分的薄層色譜方法，是一次有意義的嘗試，增加了利用薄層色譜法解決相似化合物同時(shí)進(jìn)行薄層鑒別的信心。

本次研究是實(shí)踐全信息薄層鑒別理論的一次嘗試。全信息薄層鑒別理論是期望充分發(fā)揮薄層板的多層次、多成分分離檢出性能。即將硅膠GF254薄層板展開后，先置紫外光燈(365 nm)下觀察具熒光的成分，再置紫外光燈(254 nm)下觀察具熒光熄滅作用的成分，然后在日光下觀察各種帶顏色的成分，經(jīng)增熒光處理后，再置紫外光燈(365 nm)下觀察增熒光的成分或紫外光燈(254 nm)下的熒光熄滅成分，最后與顯色劑反應(yīng)顯色后，再次在紫外光燈(365 nm)下觀察反應(yīng)后呈現(xiàn)熒光的成分，在日光下觀察反應(yīng)顯色后的各種顏色成分。這樣利用1塊薄層板展開1次，性質(zhì)不同的化學(xué)成分雖有重疊，但在各自的檢視條件下卻互不干擾，呈現(xiàn)各自的斑點(diǎn)特征，可以同時(shí)收集7個(gè)層次以上的不同信息量。本研究中同時(shí)分離和鑒別梔子、龍膽、地黃和甘草，顯色后紫外燈(365 nm)觀察，同時(shí)測(cè)定柴胡和當(dāng)歸(紫外燈254 nm下觀察)，使每一次薄層色譜法都提供多個(gè)成分信息。

薄層色譜法作為鑒別方法，比顯微鑒別更容易掌握，人才培養(yǎng)周期更短。按國(guó)家中藥新藥注冊(cè)要求，要實(shí)現(xiàn)10味以上中藥組成的處方中味味藥材有鑒別，許多質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)依靠顯微鑒別，可以做到味味藥材有鑒別，但如果無(wú)法做顯微鑒別的品種就必須依靠薄層色譜法鑒別。依靠薄層色譜法鑒別做到味味藥材有鑒別，就必須改變目前煩瑣、費(fèi)時(shí)的鑒別方式，建立多個(gè)一測(cè)多評(píng)的薄層色譜方法，結(jié)合特殊藥材薄層色譜方法，才能覆蓋多組分中藥成方制劑的每個(gè)成分，否則檢測(cè)速度將無(wú)法與生產(chǎn)速度相匹配[6－7]。為此，本次研究探索性地用2個(gè)薄層色譜法做到6味中藥材的鑒別，是一次有意義的嘗試，供同行參考。

通過(guò)建立同時(shí)檢測(cè)梔子、龍膽、地黃和甘草的薄層鑒別方法與同時(shí)檢測(cè)柴胡和當(dāng)歸的薄層鑒別方法，可與2010年版《中國(guó)藥典(一部)》龍膽泄肝丸含量測(cè)定項(xiàng)下同時(shí)測(cè)定梔子苷、龍膽苦苷、黃芩苷的含量的方法，形成新質(zhì)量控制模式。這既有于利用高端儀器同時(shí)測(cè)定多種中藥成分，也有可應(yīng)用于快速檢驗(yàn)初篩選時(shí)測(cè)定多種中藥成分。本研究以一種全新的理論基礎(chǔ)與技術(shù)思路，將薄層鑒別提升到一個(gè)新水平，擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍和深度，可推動(dòng)薄層色譜鑒別的發(fā)展。

[1]段富津.方劑學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1995:82－84.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:636－637.

[3]孫國(guó)祥，張靜嫻.系統(tǒng)指紋定量法鑒別龍膽瀉肝丸質(zhì)量[J].分析化學(xué)，2009，37(8):1 183 －1 187.

[4]呂武清，龍新華.中成藥中藥材的薄層色譜鑒別[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1997:160－173，178－189，383－389.

[5]劉瑞新.HPLC同時(shí)測(cè)定龍膽瀉肝丸中龍膽苦苷和梔子苷的含量[J].中成藥，2007，29(8):1 170－1 172.

[6]郝 福，蔣 曄，李艷榮，等.HPLC法測(cè)定龍膽瀉肝丸中龍膽苦苷、黃芩苷和梔子苷[J].中草藥，2006(12):1 108－1 109.

[7]嚴(yán) 紅.HPLC法同時(shí)測(cè)定中藥多種有效成分含量的應(yīng)用[J].天津藥學(xué)，2010，22(1):67－70.