魏 萍，李鋒武，衛(wèi)星華，高 琳

(陜西省西安市食品藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710054)

磷丙泊酚鈉商品名為 Lusedra，由美國 Eisai公司研發(fā)，于2008年12月12日由美國與食品藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)上市，臨床用作成年患者診斷或治療操作過程的鎮(zhèn)靜催眠劑。磷丙泊酚鈉是丙泊酚的一種水溶性的前體藥物，該前藥靜脈注射給藥后在體內(nèi)被內(nèi)皮細(xì)胞表面的堿性磷酸酶代謝，產(chǎn)生活性藥物丙泊酚，其可在大腦組織內(nèi)迅速達(dá)到平衡，從而發(fā)揮劑量依賴性鎮(zhèn)靜催眠作用[1]。為了進(jìn)一步控制該藥品的質(zhì)量，根據(jù)2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅪE的規(guī)定[2]，建立了磷丙泊酚鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。

1 儀器與試藥

漩渦混合器(天津天大天發(fā)設(shè)備有限公司);細(xì)菌內(nèi)毒素凝膠檢測儀(天津天大天發(fā)設(shè)備有限公司)。鱟試劑(TAL，廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司，批號為111010，標(biāo)示靈敏度0.25 EU/mL;批號為110605，標(biāo)示靈敏度0.06 EU/mL。湛江博康海洋生物有限公司，批號為 1203080，標(biāo)示靈敏度 0.25 EU/mL，批號為1102173，標(biāo)示靈敏度0.06 EU/mL)。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(中國食品藥品檢定研究院，批號為150601－201174，規(guī)格為160 EU/支);磷丙泊酚鈉注射液(陜西合成藥業(yè)有限公司，批號分別為 110601，110602，110603，規(guī)格 35 mg/mL);細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(BET用水，中國食品藥品檢定研究院，批號為201001);Tris·HCl緩沖液(pH 7.0，廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司，批號為100910)。

2 方法與結(jié)果

2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素限值確定

按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查限值公式 L=K/M，其中 K為按規(guī)定的給藥途徑下人用每千克體重每小時最大可接受的內(nèi)毒素劑量，注射劑為5.0 EU/(kg·h)，M為人用每1 h每1 kg體重的最大劑量。根據(jù)生產(chǎn)廠家提供的標(biāo)準(zhǔn)給藥方案，磷丙泊酚鈉注射液的給藥方案由首次給藥和追加給藥兩部分組成，根據(jù)患者的體重先給予首次劑量，然后根據(jù)給藥后的癥狀逐次追加給藥，追加給藥的頻率不超過每4 min 1次。據(jù)此，估算1 h后可能給予的最大劑量。則 L=5.0 EU/(kg·h)÷(15+4×15)mL/80(kg·h)=5.33 EU/mL，考慮聯(lián)合用藥內(nèi)毒素相加的安全性，可給予3倍的安全系數(shù)，即 L=1.78 EU/mL。

2.2 供試品pH測定

根據(jù)2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅪE規(guī)定，供試品溶液的pH在6.0～8.0范圍內(nèi)。對于過酸、過堿或本身有緩沖能力的供試品，需調(diào)節(jié)被測溶液(或其稀釋液)的pH，可使用酸、堿溶液或適宜的緩沖液調(diào)節(jié)。測定3批樣品的 pH，分別為9.09，9.15，9.14。用 Tris·HCl緩沖液(pH=7.0)稀釋批號 110601 供試品至 2.5，5，10，20 倍，測定其 pH 分別為 7.75，7.56，7.42，7.32。4 個稀釋倍數(shù)的 pH 均在 6.0～8.0 的范圍內(nèi)，符合藥典要求。

2.3 鱟試劑靈敏度復(fù)核

用 BET 用水將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成 2.0 λ，1.0 λ，0.50 λ和0.25 λ4個濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每一濃度平行制備4支，同時用BET用水做2支陰性對照管，按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法結(jié)果判定。見表1。

表1 靈敏度復(fù)核結(jié)果

2.4 最大有效稀釋倍數(shù)確定

根據(jù)最大有效稀釋倍數(shù) MVD=CL/λ，對于靈敏度為0.5，0.25，0.125，0.06，0.03 EU/mL 的鱟試劑，供試品最大有效稀釋倍數(shù)分別為 3.5，7，14，29，58 倍。

2.5 供試品干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)

取供試品(批號為110601)，分別加Tris·HCl緩沖液(pH=7.0)制成稀釋 2.5，5，10，20 倍的溶液，再分別加內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成含細(xì)菌內(nèi)毒素0.5 EU/mL的溶液，用批號為111010及批號為1203080鱟試劑(λ=0.25 EU/mL)以初步確定供試品的最小不干擾稀釋倍數(shù)，結(jié)果見表2?？梢姡妆捶逾c注射液在稀釋10倍及10倍以上稀釋倍數(shù)時，對鱟試劑的凝集反應(yīng)無增強(qiáng)或抑制作用。

表2 干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

2.6 供試品干擾試驗(yàn)

用BET用水和10倍稀釋供試品(用Tris·HCl緩沖液稀釋制成)分別將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成 2.0 λ，λ，0.5 λ，0.25 λ 的一系列濃度，分別用2個廠家的鱟試劑同時考察3批供試品每個濃度下的干擾情況，每一濃度做4管，同時作陰性對照和陽性對照(細(xì)菌內(nèi)毒素 2.0λ)，結(jié)果見表 3。Es在 0.5λ～2λ之內(nèi)，Et均在 0.5 Es～2 Es之內(nèi);磷丙泊酚鈉注射液10倍稀釋液對標(biāo)示靈敏度為0.25 EU/mL的兩批不同廠家鱟試劑的凝集反應(yīng)無干擾作用。

表3 干擾試驗(yàn)結(jié)果

2.7 樣品檢測

取供試品，分別用標(biāo)示靈敏度為0.06 EU/mL的2個廠家的鱟試劑考察其內(nèi)毒素限值，供試品溶液10倍稀釋。結(jié)果見表4。

3 討論

本試驗(yàn)用兩個廠家的鱟試劑對磷丙泊酚鈉注射液連續(xù)3個批號進(jìn)行了干擾試驗(yàn)，結(jié)果表明，磷丙泊酚鈉注射液在上述試驗(yàn)中無干擾作用。其內(nèi)毒素限值為每1 mL磷丙泊酚鈉注射液含內(nèi)毒素量小于1.78 EU。

表4 磷丙泊酚鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

對陜西合成藥業(yè)有限公司提供的3批磷丙泊酚鈉注射液，用兩個廠家的鱟試劑進(jìn)行了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，陰性對照管呈陰性，供試品陽性管和陽性對照管均呈陽性，試驗(yàn)成立，3批供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果符合規(guī)定。

綜上所述，認(rèn)為磷丙泊酚鈉注射液用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法按每1 mL含細(xì)菌內(nèi)毒素量應(yīng)小于1.78 EU的限值進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測是可行的。

[1]Revll P，Serradell J，Bolos J.Anesthetic drug[J].Drugs Future，2006，31(10):859－863.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄99－附錄102.