黃竹青，鄭劍玲，鄧鐵宏，魏赤平，劉福東，齊 賀，王美惠，宋 超

(1.遼寧衛(wèi)生技術(shù)職業(yè)學(xué)院，遼寧沈陽(yáng) 110101;2.沈陽(yáng)恒生農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，遼寧沈陽(yáng) 110164)

白色金針菇是我國(guó)大力發(fā)展的一種優(yōu)質(zhì)食用菌［1］，但仍有相當(dāng)多數(shù)的栽培者采用傳統(tǒng)的固體菌種栽培模式。由于固體菌種的生產(chǎn)工藝比較繁雜、生產(chǎn)周期較長(zhǎng)、菌齡不一致，污染率較高等不利因素，導(dǎo)致產(chǎn)品的質(zhì)量不穩(wěn)定，生產(chǎn)成本過(guò)高［2］。因此，借鑒了其他食用菌液體菌種應(yīng)用于工廠(chǎng)化生產(chǎn)的技術(shù)與經(jīng)驗(yàn)［3］，開(kāi)展了液體菌種應(yīng)用于白色金針菇工廠(chǎng)化生產(chǎn)的研究。結(jié)果表明白色金針菇液體菌種制備技術(shù)應(yīng)用于工廠(chǎng)化生產(chǎn)，可縮短生產(chǎn)周期，降低菌種污染率，增強(qiáng)出菇均一性，有效地提高了白色金針菇工廠(chǎng)化生產(chǎn)的產(chǎn)量和質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 恒生1號(hào)由沈陽(yáng)恒生農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司提供。

1.1.2 培養(yǎng)基 ①斜面培養(yǎng)基:在PDA培養(yǎng)基上另加 MgSO40.5 g，KH2PO41 g，VB110 mg;②碳源試驗(yàn)培養(yǎng)基:分別加入葡萄糖、乳糖、可溶性淀粉、白砂糖各 1.0%，再加入蛋白胨 4.0%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，VB110 μg/100 mL，VB250 μg/100 mL;③氮源試驗(yàn)培養(yǎng)基:分別加入蛋白胨、尿素、硫酸銨、豆粕粉各4.0%，再加入葡萄糖 1.0%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，VB110 μg/100 mL，VB250 μg/100 mL［4］。

1.1.3 儀器設(shè)備 BSD-250全溫度恒溫培養(yǎng)振蕩器，SCW-CJ-2FD超凈工作臺(tái)，GZX-9146MB干燥箱，YXQ-LS-75SⅡ自動(dòng)壓力滅菌器，F(xiàn)A2104電子分析天平，PHS-3C酸度計(jì)。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)方法 將斜面母種在斜面培養(yǎng)基上活化1次，培養(yǎng)7 d。取100 mL液體培養(yǎng)基注入300 mL的三角瓶中，121℃滅菌30 min，冷卻后無(wú)菌操作接入4塊1 cm×1 cm斜面菌塊，靜置24 h，18℃溫度下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。恒溫培養(yǎng)振蕩器轉(zhuǎn)數(shù)150 r/min，培養(yǎng)6～8 d，測(cè)定菌絲干重。

1.2.2 菌絲干重測(cè)定 用40目細(xì)胞篩過(guò)濾收集菌絲球，用純化水清洗3次，在80℃烘干至恒重，稱(chēng)量菌絲干重。

1.2.3 液體菌種培養(yǎng)時(shí)間確定 搖瓶菌種培養(yǎng)1、2、3、4、5、6、7、8、9 d 后，對(duì)液體菌種菌絲球干重進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.4 液體菌種培養(yǎng)基的起始pH值確定 分別將液體培養(yǎng)基的起始 pH 值調(diào)至 4、5、6、7、8、9，進(jìn)行液體菌種培養(yǎng)，搖瓶菌種培養(yǎng)6、7、8 d，對(duì)液體菌種菌絲干重進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.5 液體菌種培養(yǎng)基不同培養(yǎng)溫度的確定分別在 12、14、16、18、20、22、24 ℃ 條件下進(jìn)行液體菌種的培養(yǎng)，菌種培養(yǎng)6、7、8 d，對(duì)液體菌種菌絲干重進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.6 瓶栽試驗(yàn)方法 ①培養(yǎng)料配制:按照培養(yǎng)料配比使培養(yǎng)料含水量達(dá)到62% ～65%，攪拌15 min。將攪拌后的培養(yǎng)料裝瓶，壓蓋和裝車(chē);②培養(yǎng)料滅菌及冷卻:將栽培瓶進(jìn)行高壓滅菌，冷卻，使溫度降至14～17℃;③接種:用液體菌種接種機(jī)，將液體菌種接種至培養(yǎng)瓶中，接種量為30 mL;④菌絲培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)室，進(jìn)行黑暗培養(yǎng)，溫度15～20℃之間，濕度60% ～65%，適當(dāng)通入新風(fēng)，CO2濃度在4 000×10－6以下，培養(yǎng)天數(shù)為22～25 d;⑤搔菌洗菌:培養(yǎng)瓶中菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)后，進(jìn)行機(jī)械搔菌洗菌，去掉老化菌層;⑥催蕾期:溫度控制在14～17℃范圍之內(nèi)，濕度90% ～95%，給予一定散射光，光照以600～800 LX為宜，8～10 d;⑦抑制期:溫度逐步降至3～5℃，濕度90%，7～8 d;⑧育菇期:溫度控制在8～10℃，濕度 90% ～95%，9～10 d，通風(fēng)量降低;⑨采收加工:當(dāng)幼菇長(zhǎng)到適宜大小，進(jìn)行采收和加工。

1.2.7 培養(yǎng)料配方 配方Ⅰ:玉米芯40%，米糠55%，玉米粉2%，甜菜渣2%，輕質(zhì)碳酸鈣1%;配方Ⅱ:玉米芯55%，米糠40%，玉米粉2%，甜菜渣2%，輕質(zhì)碳酸鈣1%;配方Ⅲ:玉米芯45%，米糠45%，玉米粉2%，甜菜渣2%，輕質(zhì)碳酸鈣1%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳源對(duì)白色金針菇菌絲生長(zhǎng)情況的影響

由表1可知，不同碳源對(duì)白色金針菇液體菌種的菌絲生長(zhǎng)影響顯著，液體培養(yǎng)基添加1.0%的白砂糖后，在第6、7、8天液體菌種菌絲干重相對(duì)較高，長(zhǎng)勢(shì)較快，而添加其他碳源的液體菌種菌絲干重較低，長(zhǎng)勢(shì)較慢。白色金針菇液體菌種選擇碳源的順序依次為:白砂糖、可溶性淀粉、葡萄糖、乳糖。

2.2 不同氮源對(duì)白色金針菇液體菌種菌絲生長(zhǎng)情況的影響

在液體培養(yǎng)基中特別添加4%的蛋白胨、尿素、硫酸銨、豆粕粉4種不同氮源，接種培養(yǎng)，在第6、7、8天對(duì)液體菌種菌絲干重進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2。因此，白色金針菇液體菌種選擇氮源的順序依次為:豆粕粉、蛋白胨、尿素、硫酸銨。

表1 不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響Table 1 Effect of different carbon sources on mycelia growth of liquid spawn

表2 不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響Table 2 Effect of different nitrogen sources on the growth of mycelium of liquid spawn

2.3 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)白色金針菇菌絲生長(zhǎng)情況的影響

由表3可知，白色金針菇進(jìn)行液體菌種培養(yǎng)時(shí)，搖瓶菌種培養(yǎng)第8天時(shí)菌絲體生長(zhǎng)最好。

表3 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響Table 3 Effect of culture time on the growth of mycelium liquid culture

2.4 培養(yǎng)起始pH值對(duì)白色金針菇菌絲生長(zhǎng)的影響

分別將液體培養(yǎng)基的起始pH值調(diào)至不同值，進(jìn)行接種培養(yǎng)，搖瓶培養(yǎng)6、7、8 d，對(duì)菌絲干重進(jìn)行檢測(cè)，白色金針菇液體菌種在培養(yǎng)基起始pH值6～7時(shí)菌絲體生長(zhǎng)最好，結(jié)果見(jiàn)表4。

2.5 培養(yǎng)溫度對(duì)白色金針菇菌絲生長(zhǎng)的影響

分別在不同溫度條件下進(jìn)行液體菌種的培養(yǎng)，菌種培養(yǎng)6、7、8 d對(duì)液體菌種菌絲干重進(jìn)行檢測(cè)，白色金針菇液體菌種在16～20℃生長(zhǎng)旺盛，結(jié)果見(jiàn)表5。

表4 不同培養(yǎng)起始pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響Table 4 Different culture effect of initial pH value on biomass of mycelium

表5 不同培養(yǎng)溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響Table 5 Effects of incubation temperature on the growth of mycelium

2.6 不同培養(yǎng)料配方對(duì)白色金針菇(瓶栽)菌絲生長(zhǎng)情況的影響［5］

食用菌培養(yǎng)料的配方一般以當(dāng)?shù)刭Y源情況而定，培養(yǎng)料處理更是食用菌栽培工藝中的重中之重，是栽培成敗、產(chǎn)量高低的關(guān)鍵所在。根據(jù)本地資源情況，設(shè)計(jì)培養(yǎng)料配方，結(jié)果表明配方Ⅱ?yàn)樽顑?yōu)，見(jiàn)表6。

2.7 培養(yǎng)料不同含水量對(duì)白色金針菇(瓶栽)菌絲生長(zhǎng)情況的影響［6］

由表7可知，培養(yǎng)料含水量的高低對(duì)菌絲生長(zhǎng)有較大影響，當(dāng)含水量在55%以下時(shí)，接種后培養(yǎng)料表面容易失水，導(dǎo)致菌絲生長(zhǎng)緩慢，且易污染。當(dāng)含水量在70%以上時(shí)，培養(yǎng)料不易滅菌徹底，且瓶底部易積水，透氣性不好。白色金針菇液體菌種培養(yǎng)料最適宜的含水量為60% ～65%，此時(shí)菌絲濃白健壯，且吃料快，封面和發(fā)滿(mǎn)瓶時(shí)間短。

2.8 不同液體菌種接種量對(duì)白色金針菇液體菌種菌絲生長(zhǎng)情況的影響［7］

每瓶裝培養(yǎng)料750 g，經(jīng)滅菌、冷卻后，用液體接種機(jī)接入液體菌種。液體菌種接種量的不同，造成培養(yǎng)料中菌絲體封面、發(fā)滿(mǎn)瓶的時(shí)間也不同，由表8可知當(dāng)液體菌種接種量在每瓶(30±2)mL時(shí)，4 d菌絲就能鋪滿(mǎn)整個(gè)料面，降低了污染的風(fēng)險(xiǎn);發(fā)菌滿(mǎn)瓶時(shí)間最短。當(dāng)液體菌種接種量在(20±2)mL時(shí)，因接種量少，菌絲含量就少，菌絲萌發(fā)點(diǎn)相對(duì)也少，封面慢，容易造成污染，導(dǎo)致發(fā)滿(mǎn)瓶延長(zhǎng)。當(dāng)液體菌種接種量在(40±2)mL時(shí)，菌絲含量多，封面快，但因?yàn)槭且后w菌種，增加了培養(yǎng)料的含水量，透氣性變差，瓶底部容易積水，導(dǎo)致底部發(fā)菌緩慢。因此，液體菌種最適宜的接種量為(30±2)mL。

表6 不同培養(yǎng)料配方對(duì)菌絲生長(zhǎng)情況的影響Table 6 Effect of different culture medium on growth of mycelium of liquid spawn

表8 不同液體菌種接種量對(duì)菌絲生長(zhǎng)情況的影響Table 8 Effect of different liquid spawn inoculation amount of mycelia growth of liquid spawn

3 討論

食用菌液體菌種的優(yōu)勢(shì)是縮短發(fā)菌時(shí)間，菌種質(zhì)量有較大提高，菌種生產(chǎn)成本低、效率高。影響液體菌種的因素有母種、制種設(shè)備、液體培養(yǎng)基配方、接種溫度和時(shí)間、接種量及培養(yǎng)料配方等。根據(jù)白色金針菇液體菌種在工廠(chǎng)化生產(chǎn)中應(yīng)用的研究可知，供試白色金針菇菌種適宜的液體培養(yǎng)基配方為豆粕粉4%，白砂糖1%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，VB110 μg/100 mL，VB250 μg/100 mL;恒溫培養(yǎng)振蕩器轉(zhuǎn)數(shù)150 r/min，培養(yǎng)8 d，液體菌種適宜的培養(yǎng)溫度為16～20℃，適宜的pH值為6～7;液體菌種適宜的培養(yǎng)料配方為:玉米芯55%，米糠40%，玉米粉2%，甜菜渣2%，輕質(zhì)碳酸鈣1%;適宜的培養(yǎng)料含水量為60% ～65%;接種量為:(30±2)mL。在上述條件下，液體菌種發(fā)菌速度較快，也易分化形成子實(shí)體原基。結(jié)果表明，將液體菌種技術(shù)應(yīng)用于白色金針菇的工廠(chǎng)化生產(chǎn)是可行。在白色金針菇工廠(chǎng)化生產(chǎn)中應(yīng)用液體菌種技術(shù)取代了傳統(tǒng)固體菌種，不僅菌種生產(chǎn)操作簡(jiǎn)單、方便，且成本低。因菌絲萌發(fā)點(diǎn)多，封面好，發(fā)菌滿(mǎn)瓶時(shí)間短，可降低栽培種污染率，同時(shí)大大縮短生產(chǎn)周期，提高了出菇的均一性，有效地提高了白色金針菇工廠(chǎng)化生產(chǎn)的產(chǎn)量和質(zhì)量。

［1］ 孫字峰，沙長(zhǎng)青，于德水，等.金針菇功能性蛋白的研究進(jìn)展［J］.微生物學(xué)雜志，2006.26(4):15-17.

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