蔣榕 莫曉能

肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，它的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì);肺癌的分型非常重要，它關(guān)系到患者的治療和預(yù)后。按組織病理學(xué)分類，肺癌可分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌，在非小細(xì)胞肺癌中腺癌與鱗癌是最常見的類型［1，2］。TTF-1是一種細(xì)胞核蛋自，屬于核蛋白轉(zhuǎn)錄因子NKX2家族中的成員，主要在間腦、甲狀腺上皮和胚胎肺非纖毛柱狀上皮細(xì)胞核中表達(dá)。TTF-1在肺的發(fā)育、細(xì)胞生長(zhǎng)、分化等過程中有非常重要的作用［3］。本研究通過檢測(cè)TTF-1在非小細(xì)胞肺癌 (主要為腺癌與鱗癌)組織中的表達(dá)，并分析其表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系，探討TTF-1在鑒別肺腺癌與鱗癌中的意義及其在肺癌發(fā)生、發(fā)展、診斷及預(yù)后中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取經(jīng)病理證實(shí)的非小細(xì)胞肺癌75例，其中肺腺癌36例(男23例，女13例，年齡31～77歲;臨床Ⅰ期12例，Ⅱ期20例，Ⅲ期2例，IV期2例;肺癌并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4例，尚無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例);肺鱗癌39例(男20例，女19例，年齡37～84歲;臨床Ⅰ期10例，Ⅱ期24例，Ⅲ期3例，IV 期2例;肺癌并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例，尚無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例);以其75例癌旁正常組織作為對(duì)照。所有患者均無甲狀腺相關(guān)疾病，均未進(jìn)行放療、化療及免疫治療。所有患者均進(jìn)行隨訪，末次隨訪至2012年8月，隨訪時(shí)間2～95個(gè)月，中位隨訪時(shí)間32個(gè)月。

1.2 方法與試劑 兔抗人多克隆TTF-1抗體購(gòu)自PL Laboratories公司，免疫組化SP試劑盒(KIT-9710)、DAB顯色試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。采用免疫組化S-P法，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，抗體稀釋倍數(shù)為1:400，以PBS緩沖液取代一抗作陰性對(duì)照。DAB顯色，蘇木紫復(fù)染。

1.3 結(jié)果判斷 所有標(biāo)本置于10×40倍光學(xué)顯微鏡下觀察，每個(gè)病例隨機(jī)選取5個(gè)視野，運(yùn)用image-pro plus圖像分析軟件自動(dòng)分析圖像，計(jì)數(shù)每個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)。TTF-1陽(yáng)性染色為棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞核內(nèi)。按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比分為:無陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞百分比小于1%為陰性(-)、1% ～10%為弱陽(yáng)性(+)、10% ～50%為陽(yáng)性(++)、＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。如圖1，2。

圖1 TTF-1在肺腺癌中的核陽(yáng)性表達(dá)(SP×400)

圖2 TTF-1在肺鱗癌中的核陽(yáng)性表達(dá)(SP×400)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件，兩組定性資料組間比較采用χ2檢驗(yàn);配對(duì)的兩組二分類資料比較采用配對(duì)c2檢驗(yàn);當(dāng)總例數(shù)小于40，或者至少存在一個(gè)Tij(理論頻數(shù))＜1時(shí)采用Fisher確切概率法;采用Kaplan-Meier和log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析;以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.5 預(yù)后評(píng)價(jià)方法 采用總生存時(shí)間進(jìn)行預(yù)后評(píng)價(jià)，總生存時(shí)間為從確診時(shí)間開始到死亡時(shí)間或末次隨訪時(shí)間，失訪者以末次隨訪時(shí)間計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 TTF-1在肺腺癌與肺鱗癌組織中表達(dá)的比較 TTF-1在肺腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為83.3%(30/36)，顯著高于在肺鱗癌組織中的表達(dá)水平7.69%(3/39)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

2.1 TTF-1在非小細(xì)胞肺癌與其癌旁組織表達(dá)的比較TTF-1在肺腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于其癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);TTF-1在肺鱗癌中的陽(yáng)性表達(dá)率與其癌旁組織無明顯差異(P＞0.05);見表2。

2.3 TTF-1的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 本實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)顯示，TTF-1在不同性別、年齡、淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期及腫瘤大小的非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)均無明顯差異(P＞0.05)，見表3。

表1 TTF-1在非小細(xì)胞肺癌不同組織類型的表達(dá)的比較(例，%)

表2 TTF-1在非小細(xì)胞肺癌與其癌旁組織的表達(dá)的比較(例)

表3 TTF-1的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系(例，%)

2.4 TTF-1的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的關(guān)系 根據(jù)肺癌患者每高倍鏡視野的陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比，將75例非小細(xì)胞肺癌患者分為陽(yáng)性組(≥1%)和陰性組(＜1%)。Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示:肺腺癌中TTF-1陽(yáng)性組患者的中位生存時(shí)間(30個(gè)月)明顯高于陰性組(7.5個(gè)月)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(見圖3);肺鱗癌中TTF-1陽(yáng)性組患者的中位生存時(shí)間為29個(gè)月，陰性組為48個(gè)月，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)(見圖4)。結(jié)合兩組數(shù)據(jù)，非小細(xì)胞肺癌TTF-1陽(yáng)性組患者的中位生存時(shí)間為30個(gè)月，陰性組為43個(gè)月，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)(見圖5)。

3 討論

TTF-1是一種細(xì)胞核蛋白，最早是作為甲狀腺球蛋白和甲狀腺過氧化物酶基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子而被發(fā)現(xiàn)。TTF-1在胚胎發(fā)育早期在肺和甲狀腺上皮細(xì)胞的分化和器官形成中起重要作用，并且參與調(diào)控肺泡表面活性蛋白A、B及clara細(xì)胞抗原等基因的表達(dá)，被視為肺發(fā)育中特異性的核轉(zhuǎn)錄因子［4］。有研究表明，TTF-1在肺組織中的表達(dá)局限于肺泡上皮和細(xì)支氣管上皮細(xì)胞，可作為肺終末氣道細(xì)胞及其腫瘤的標(biāo)記物［5］。由于大部分肺腺癌向Ⅱ型肺泡上皮及clara細(xì)胞分化［6］，所以絕大部分腺癌包括由clara細(xì)胞化生而來的腺癌都可以表達(dá)TTF-1［7］。作為一種對(duì)肺及甲狀腺來源的腫瘤選擇性非常高的標(biāo)記物，TTF-1正被越來越廣泛地應(yīng)用于腫瘤的診斷和鑒別診斷中，且有人將它作為肺癌的一項(xiàng)預(yù)后指標(biāo)。本研究采用免疫組化(SP法)對(duì)75例非小細(xì)胞肺癌(其中肺腺癌36例，肺鱗癌39例)組織中TTF-1的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，以其癌旁正常組織作為對(duì)照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TTF-1在肺腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為83.3%(30/36)，明顯高于在肺鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率7.69%(3/39)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);這與以往的報(bào)道相符合［8，9］。TTF-1在肺癌的發(fā)生，發(fā)展中起一定作用，檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌組織中TTF-1的表達(dá)有助于肺腺癌和肺鱗癌的診斷與鑒別診斷。TTF-1的表達(dá)與患者性別、年齡、淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及腫瘤TNM分期等臨床病理特征無關(guān)(P＞0.05)。這可能與本實(shí)驗(yàn)研究的樣本量相對(duì)較少有關(guān)，有待于擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

關(guān)于TTF-1與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的關(guān)系目前仍存在爭(zhēng)議，Altaner等［10］研究認(rèn)為TTF-1陽(yáng)性與無病生存和總生存期無關(guān);Berghmans等［11］研究提示:在非小細(xì)胞肺癌中，TTF-1是一個(gè)預(yù)后良好的指標(biāo);Puglisi［12］等研究則認(rèn)為在非小細(xì)胞肺癌中TTF-1陰性患者趨向于預(yù)后較好。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Kaplan-Meier分析顯示，肺腺癌中TTF-1陽(yáng)性組患者的中位生存時(shí)間為30個(gè)月，明顯高于陰性組(7.5個(gè)月)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而肺鱗癌中TTF-1陽(yáng)性組患者的中位生存時(shí)間為29個(gè)月，陰性組患者的中位生存時(shí)間為48個(gè)月，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。TTF-1可否作為非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后指標(biāo)尚需更大樣本及更具有前瞻性的試驗(yàn)加以證明。

圖3 肺腺癌患者TTF-1表達(dá)的生存分析陽(yáng)性組患者的生存時(shí)間明顯高于陰性組(P＜0.05)

圖4 肺鱗癌患者TTF-1表達(dá)的生存分析陽(yáng)性組患者的生存時(shí)間與陰性組無明顯差異(P＞0.05)

圖5 非小細(xì)胞肺癌患者TTF-1表達(dá)的生存分析陽(yáng)性組患者的生存時(shí)間與陰性組無明顯差異(P＞0.05)

［1］ Travis WD，Colby TV，Corrin B，et al.In collaboration with Sobin LH and pathologists from 14 countries.WHO Histological Typing of Lung and Pleural Tumours.3rd ed.Berlin:Springer，1999．

［2］ Travis WD.Pathology of Lung Cancer.Clin Chest Med，2002，23:65-81．

［3］ 高宗煒，郭春寶，金先慶.人肺癌中甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1 DNA結(jié)合活性的意義.中國(guó)肺癌雜志.2009，12(2):127-130．

［4］ Mendelson C R.Role of transcription factors in fetal lung developmentand surfactant protein gene expression.Annual Review of Physiology，2000，62:875-915．

［5］ MyongNH.Thyroid transcription factor-1(TTF-1)expression in human lung carcinomas:its prognostic implication and relation ship with expressions of p53 and Ki-67 proteins．Journal Of Korean Medical Science，2003，18(4):494-500．

［6］ Travis W D，Colby T V，Corrin B，et al.WHO Histological typing of lung and pleural tumors．3rd ed，Berlin:Springer，1999:35．

［7］ 韓高華，周曉軍，盂奎，等.TTF-1在肺腺癌中的表達(dá)及其診斷意義.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2002，18(6):595-597．

［8］ Wang BY，Gil J，Kaufman D.p63 in pulmonary epithelium，pulmonaey squamous neoplasms，and other pulmonary tumors.Human Pathology，2002，33(9):921-926．

［9］ Yang A，Kaghad M，Wang Y.p63，a p53 homolog at 3q27-29，encodes multiple products with transactivating，death-inducing，and dominant-negativeactivities.MolecularCell， 1998， 2(3):305-316．

［10］ Altaner S，Yoruk Y，Tokatli F，et al.The correlation between TTF-1 immunoreactivity and the occurrence of lymph node metastases in patients with lung cancer．Tumori，2006，92(4):323-326．

［11］ Berghmans T，Paesmans M，Mascaux C，et al.Thyroid transcription factor 1-a new prognostic factor in lung cancer:a meta-analysis.Annals Of Oncology，2006，17(11):1673-1676．

［12］ Puglisi F，Aprile G，Bruckbauer M，et al.Combined analysis of M IB21 and thyroid transcription factor-1 predicts survival in nonsmall cell lung carcinomas． Cancer Lett，2001，162(1):97-103．