李新才 曾碧映 鄧?guó)P君 肖 凌 陳鳳姣

(益陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥理教研室，湖南 益陽(yáng) 413000)

異常的血脂代謝造成斑塊形成，而斑塊的形成和形成后的不穩(wěn)定是造成冠心病等疾病發(fā)展的重要基礎(chǔ)〔1〕?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)與斑塊的形成關(guān)系相當(dāng)密切〔2〕。本實(shí)驗(yàn)研究黃芪水提取物對(duì)載脂蛋白E基因敲除大鼠動(dòng)脈硬化斑塊部位的MMP-9水平和斑塊的影響，以期為防治冠心病等疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 動(dòng)物:載脂蛋白E基因敲除大鼠40只，雌、雄各半，8周齡，體重19～22 g。藥物:黃芪水提取物、辛伐他汀片;實(shí)驗(yàn)儀器:基質(zhì)金屬蛋白酶試劑盒、全自動(dòng)生化儀、醫(yī)用離心機(jī)、分光光度計(jì)、電子天平等。

1.2 方法

1.2.1 飼養(yǎng)與造模方法正常飼養(yǎng):給予載脂蛋白E基因敲除大鼠正常的顆粒飼料和蒸餾水進(jìn)行喂養(yǎng)。高脂飼養(yǎng):給予大鼠高脂飲食進(jìn)行造模，按照3%膽固醇、1%丙硫氧嘧啶、10%豬油和6%糖與80%正常飼料配制成的高脂飼料喂養(yǎng)大鼠。

1.2.2 藥物方法和計(jì)量 正常組和模型組大鼠不進(jìn)行藥物治療;黃芪組:在造模的同時(shí)給予黃芪水提取物灌胃治療，14 g/kg，1次/d;辛伐他汀組:造模同時(shí)給予辛伐他汀片進(jìn)行灌胃治療，1次/d，每次2.5 mg/kg。3個(gè)月實(shí)驗(yàn)結(jié)束，對(duì)相關(guān)觀察指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定、分析。

1.3 觀察指標(biāo)與方法

1.3.1 觀察指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后對(duì)四組載脂蛋白E基因敲除大鼠的血清MMP-9水平進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)檢測(cè)血脂情況。觀察大鼠的斑塊情況以及內(nèi)膜/中膜面積比例。

1.3.2 檢測(cè)方法①M(fèi)MP-9:采用雙抗體夾心酶免疫法;②血脂:全自動(dòng)生化分析儀器進(jìn)行分析;③斑塊情況:采用HE染色方法觀察形態(tài)，計(jì)算內(nèi)膜與中膜面積比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料用±s表示，三組間比較采用方差分析，兩兩比較采用Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 三組血清MMP-9水平比較 模型組、黃芪組和辛伐他汀組大鼠的MMP-9水平〔(7.32±2.41)、(1.48±0.72)、(3.25±1.72)μg/ml〕明顯高于正常組(0.52±0.17)μg/ml(P＜0.05)。黃芪水提取物和辛伐他汀治療組的MMP-9低于模型組(P＜0.05)。黃芪組明顯低于辛伐他汀組(P＜0.05)。

2.2 三組血脂情況比較 模型組、黃芪組和辛伐他汀組大鼠的三種血脂指標(biāo)均高于正常組(P＜0.05)。黃芪組和辛伐他汀組均低于模型組(P＜0.05)，但黃芪組和辛伐他汀組血脂的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 血脂指標(biāo)情況(±s，mmol/L，n=10)

表1 血脂指標(biāo)情況(±s，mmol/L，n=10)

與正常組相比:1)P＜0.05;與模型組相比:2)P＜0.05;下表同

組別 甘油三酯 總膽固醇 低密度脂蛋白正常組0.69±0.25 1.89±0.72 0.38±0.12模型組 1.57±0.971) 21.79±5.191) 17.39±4.571)黃芪組 0.81±0.311)2)12.18±2.581)2) 6.42±2.931)2)辛伐他汀組 0.79±0.241)2)12.09±3.111)2) 6.36±1.811)2)

2.3 三組大鼠斑塊情況和內(nèi)膜/中膜面積比值比較 模型組、黃芪組和辛伐他汀組比值明顯高于正常組(P＜0.05)。黃芪組和辛伐他汀組比值優(yōu)于模型組(P＜0.05)。黃芪組內(nèi)膜/中膜面積比值明顯優(yōu)于辛伐他汀組(P＜0.05)。見表2。

表2 各組斑塊形成和內(nèi)膜/中膜面積比值(%，n=10)

3 討論

近年來(lái)，冠心病、急性冠脈綜合征等心血管疾病的發(fā)病率明顯增加，動(dòng)脈硬化斑塊與其發(fā)病密切相關(guān)，在治療動(dòng)脈硬化斑塊方面人們研究的深度和廣度正在逐漸加深〔3〕。動(dòng)脈硬化斑塊的脫落或破裂對(duì)心血管疾病患者的危害性極大，甚至迅速造成患者死亡，所以得到了人們廣泛的關(guān)注〔4〕。目前脂質(zhì)堆積的增生性反應(yīng)是普遍公認(rèn)的動(dòng)脈硬化斑塊的原因〔5〕。MMPS屬于一種無(wú)活性酶，通過依賴Zn2+和Ca2+存在并參與各種病理過程的運(yùn)行，MMP-9按照其降解種類歸于明膠酶一類〔6〕，與炎癥反應(yīng)存在正相關(guān)性〔7〕，在防治心肌細(xì)胞纖維化方面也有一定作用〔8〕，與糖尿病血管并發(fā)癥存在特定關(guān)系〔9〕，在腫瘤基因調(diào)控和抑制肝纖維化等方面也有作用〔10〕。同時(shí)，MMP-9可參與受損的血管重建，并使動(dòng)脈的血管平滑肌移行〔11〕，對(duì)動(dòng)脈硬化斑塊的形成和發(fā)展起著重要作用，所以降低MMP-9的水平對(duì)防止動(dòng)脈硬化斑塊有積極的意義。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示黃芪水提取物可以明顯降低大鼠血清MMP-9水平，抑制其表達(dá)，緩解動(dòng)脈硬化斑塊的形成，并對(duì)穩(wěn)定斑塊有重要意義?，F(xiàn)代藥理研究表明黃芪具有多種功能，在治療糖尿病、腎臟疾病、心肌炎、腦血管疾病等各個(gè)方面都有重要作用〔12〕。黃芪在心血管方面的療效也很突出，可以提高心肌細(xì)胞的收縮能力，增加心排出量，降低血脂沉積〔13〕。黃芪水提取物對(duì)載脂蛋白E基因敲除大鼠動(dòng)脈硬化斑塊部位的MMP-9有明顯的降低作用，可對(duì)斑塊的形成有抑制作用，對(duì)于已經(jīng)形成的斑塊起到穩(wěn)定的作用〔14〕，應(yīng)得到臨床研究的關(guān)注。

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