楊怡俠 張 濤 宋宏春*

（1.內(nèi)蒙古綠源生醫(yī)藥有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué) ，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010051）

“協(xié)日嘎-4”是蒙古族驗方[1,2]，該處方是由姜黃、黃柏、梔子和蒺藜（微炒）4味藥材組成，原劑型為洗劑，臨床用于治療真菌性皮膚病和細菌性皮膚病。療效確切。擬將其劑型改革為現(xiàn)代劑型噴霧劑。以方便患者使用。為保證產(chǎn)品質(zhì)量的可控性，采用HPLC法對“協(xié)日嘎-4”氣霧劑中鹽酸小檗堿進行含量研究，[3]方法準確、簡便、快速，能有效控制“協(xié)日嘎-4”氣霧劑的質(zhì)量。該研究為完善和提高藥品質(zhì)量標準提供依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 儀器：依利特p230高效液相色譜儀；uv230+紫外-可見檢測器;EC2000色譜工作站。P230/P230p高壓恒流泵；SinoChrom ODS-AP(4.6 mm×200 mm，5μm） 色譜柱。

1.2 試藥：甲醇為色譜純試劑,水為雙重蒸餾水。小檗堿對照品(批號為715-200010,供含量測定用，由中國藥品生物制品檢定所購入)。其它試劑均為分析純。協(xié)日嘎-4氣霧劑，由內(nèi)蒙古自治區(qū)醫(yī)科大學(xué)制劑室制備，批號20120628。

2 含量測定方法

精密量取“協(xié)日嘎 -4”氣霧劑 1.5mL，加入 50mL容量瓶中，用甲醇-水=50：50定容 。用微孔濾膜過濾，棄去初濾液，收集續(xù)濾液于EP管中，進樣20μL，以乙腈 -水（每100mL加入0.1mL磷酸和0.1g十二烷基硫酸鈉）(53：47)為流動相，在 265nm波長處測定“協(xié)日嘎 -4”氣霧劑中鹽酸小檗堿的含量[4]。

3 方法學(xué)考察

3.1 色譜條件：色譜柱為 SinoChrom ODS-AP（4.6 mm×200 mm，5μm），乙腈 -水（100mL中加入 0.1mL磷酸和0.1g十二烷基硫酸鈉）(53:47)為流動相，流速1.0mL·min-1，柱溫 25℃，檢測波長為 265nm。

3.2 溶液的制備

3.2.1 標準品溶液的制備：精密稱取鹽酸小檗堿對照品16.26mg,置 25mL容量瓶中，用乙腈 -水(50：50)（100mL中加入0.1mL磷酸和0.1g十二烷基硫酸鈉）稀釋至刻度，得到0.6504mg·mL-1的標準品溶液。

3.2.2 供試品溶液的制備：精密吸取梔黃提取液2mL，置于 50mL容量瓶中，用甲醇 -水(50：50)定容，即得。標準品溶液和供試品溶液的HPLC色譜圖見圖 1和圖 2。

圖1 標準品溶液HPLC色譜圖

圖2 供試品溶液HPLC色譜圖

3.3 線性關(guān)系考察：精密吸取標準品溶液0.05mL、0.10mL、0.15mL、0.20mL、0.25mL、0.30mL，置 10mL容量瓶中，用乙腈-水（50：50）定容至刻度，搖勻。進樣20μL，每份樣品 2次，實驗數(shù)據(jù)見表1。以峰面積對標準品溶液濃度（μg·mL-1）進行回歸分析.試驗結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在 3.25μg·mL-1～19.50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為 Y=99.441X+78.435，r=0.9999。 標準曲線見圖3。

表1 標準曲線數(shù)據(jù)表

圖3 鹽酸小檗堿的標準曲線

3.4 精密度試驗：精密吸取樣品液2mL置于50mL容量瓶中，用甲醇：水（50：50）定容，過濾，收集續(xù)濾液，連續(xù)平行進樣5次，測定鹽酸小檗堿峰面積。試驗結(jié)果表明,該方法精密度良好，RSD=0.94（%）。實驗結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好，RSD=0.70%。結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗結(jié)果

3.5 重復(fù)性試驗：精密吸取樣品液2mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇：水（50：50）定容。平行操作 5份，進樣，每份溶液測定兩次，實驗結(jié)果見表3。

3.6 穩(wěn)定性試驗：精密吸取樣品液2mL，置于50mL容量瓶中，以甲醇：水（50：50）定容，每隔 120min測定一次峰面積，連續(xù)測定 5次，即分別于 0h、2h、4h、6h、8h進樣測定。實驗結(jié)果表明樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表4。

3.7 加樣回收試驗：精密吸取樣品液1mL，置于50mL容量瓶中，然后再精密吸取標準品溶液0.50mL置同一容量瓶中，用甲醇：水（50：50）定容，平行操作 5份，每份測定 2次。實驗結(jié)果表明該方法平均加樣回收率為102.04%，RSD為 1.65%，符合方法學(xué)要求。實驗結(jié)果見表5。

表3 重現(xiàn)性試驗結(jié)果

表4 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

表5 加樣回收試驗結(jié)果

4 結(jié) 果

本研究應(yīng)用高效液相色譜法測定“協(xié)日嘎-4”氣霧劑中鹽酸小檗堿的含量，并對測定的線性范圍（3.25μg·mL-1～19.50μg·mL-1），精密度（RSD=0.94），重現(xiàn)性（RSD=1.2），穩(wěn)定性（RSD=1.28%）、平均加樣回收率為102.04%，RSD=1.65%進行了考察，結(jié)果均符合要求，表明可以作為“協(xié)日嘎-4”氣霧劑中鹽酸小檗堿的含量的測定方法。

[1]蒙醫(yī)藥編輯委員會.中國醫(yī)學(xué)百科全書(蒙藥學(xué))[M].上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1993,12（2）：251.

[2]布日額.蒙藥材姜黃本草考證[J].中藥材,2007,2(2):239-240.

[3]邢俊波,劉云.正交設(shè)計優(yōu)選黃柏中小檗堿的提取工藝[J].時珍國醫(yī)國藥,2003,14（3）：129-130.

[4]程詠梅,陳仁華.小檗堿提取工藝的研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2007,18（6）：1445-1447.