高會(huì)霞 王彬 周希山

VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

高會(huì)霞 王彬 周希山

目的 觀察血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)及其受體VEGFR-3與神經(jīng)細(xì)胞黏附分子-接觸蛋白-1(contactin-1,CNTN-1)在胃癌組織中的表達(dá)情況，并分析其與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和其臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。方法 56例胃癌患者按淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分成：實(shí)驗(yàn)組(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性患者34例)和對(duì)照組(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性患者22例)。對(duì)所有腫瘤組織標(biāo)本行免疫組化染色檢測VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表達(dá)，分析三者之間的關(guān)系及其與臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的陽性表達(dá)率分別為67.64%、82.35%及76.47%。對(duì)照組：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的陽性表達(dá)率分別為:40.91%、50.00%及45.45%。CNTN-1的表達(dá)與VEGF-C(P<0.05)及VEGFR-3表達(dá)(P<0.05)存在明顯相關(guān)性。三者的表達(dá)與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)(均P<0.05)。結(jié)論 VEGF-C、VEGFR-3和CNTN-1三者均在胃癌組織中高表達(dá)。三者的表達(dá)情況與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期關(guān)系密切。而且認(rèn)為VEGF-C促進(jìn)胃癌的淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有可能是通過CNTN-1通路介導(dǎo)的。

胃癌；血管內(nèi)皮生長因子；接觸蛋白-1

胃癌的治療手段是手術(shù)，腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移是術(shù)后死亡的主要原因。研究發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)和其受體VEGFR-3的表達(dá)與腫瘤的淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[1]。本課題應(yīng)用免疫組化方法檢測VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組56例標(biāo)本系本院胃腸外科2010年1月～2012年6月期間接受胃癌根治術(shù)患者的胃癌組織標(biāo)本，男性37例，女性19例；年齡32～76歲，中位年齡61歲。按1997年國際抗癌聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn)行TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期14例，Ⅲ期32例。腫瘤大小按腫瘤原發(fā)灶的最長徑判斷，介于1.0～9.2 cm之間，中位值5.1 cm。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性者34例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者22例。術(shù)中所取標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。

1.2 試劑 兔抗人VEGFR-3多克隆抗體、兔抗人CNTN-1多克隆抗體、羊抗人VEGF-C多克隆抗體均購于英國Abcam公司；DAB顯色劑和免疫組化鏈球菌親和素-生物素-過氧化酶復(fù)合物法(SABC)試劑盒購于美國Santa Cruz公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 所有標(biāo)本均制成4 μm厚的連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，然后置于新鮮配制的0.3%的過氧化氫溶液浸泡，蒸餾水沖洗后用枸櫞酸鈉緩沖液浸泡，微波修復(fù)，PBS沖洗，血清封閉，加稀釋后的一抗4℃孵育過夜，再加生物素化二抗室溫孵育0.5 h，PBS沖洗，加SABC試劑室溫放置0.5 h，再次PBS沖洗，DAB顯色，蒸餾水沖洗蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化。最后脫水、透明、封片、鏡檢。陽性對(duì)照為試劑公司提供的陽性切片，PBS替代一抗行陰性對(duì)照染色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 17.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。用χ2檢驗(yàn)分析VEGF-C、VEGFR-3和CNTN-1蛋白的表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系，r相關(guān)分析法判斷三者間的相關(guān)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的陽性表達(dá)率分別為67.64%、82.35%及76.47%。對(duì)照組：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的陽性表達(dá)率分別為:40.91%、50.00%及45.45%。CNTN-1的表達(dá)與VEGF-C(P<0.05)及VEGFR-3表達(dá)(P<0.05)存在明顯相關(guān)性，見表1。三者的表達(dá)與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)(均P<0.05)。

表1 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1陽性率比較

3 討論

惡性腫瘤細(xì)胞具有異質(zhì)性。研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C在腫瘤的淋巴管形成中起了重要作用，參與了腫瘤細(xì)胞的播散和區(qū)域淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移[2]。國內(nèi)學(xué)者認(rèn)為檢測VEGF-C的表達(dá)可作為甲狀腺乳頭狀癌[3]和乳腺癌[4]發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測指標(biāo)。Wang等研究發(fā)現(xiàn)其特異性受體VEGFR-3參與了新生淋巴管的形成，腫瘤細(xì)胞的浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[5]。近年來，通過基因芯片技術(shù)分析侵襲性的肺癌細(xì)胞基因表達(dá)的差異性，發(fā)現(xiàn)CNTN-1是與腫瘤侵襲相關(guān)的基因。CNTN-1在胃癌組織中高表達(dá)， r相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，CNTN-1與VEGF-C/VEGFR-3軸之間存在顯著相關(guān)性。

本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF-C/VEGFR-3軸在胃癌組織的淋巴管生成和淋巴轉(zhuǎn)移過程中具有重要作用。同時(shí)，CNTN-1蛋白表達(dá)還與VEGF-C及VEGFR-3蛋白表達(dá)相關(guān)，提示CNTN-1或許是VEGF-C/VEGFR-3軸作用通路上的一個(gè)重要分子，可能參與了腫瘤的淋巴管生成及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這一過程的具體機(jī)制，需要以后更深層次的研究。

[1] Albuquerque RJ, Hayashi T, Cho WG, et al. Alt ernatively spliced vascular endothelial growth factor receptor-2 is an essential endogenous inhibitor of lymphatic vessel growth.Nat Med, 2009, 15(9):1023-1030.

[2] Da MX,Wu XT,Wang J,et al. Expression of cyclooxygenase-2 and vascular endothelial growth factor-C correlates with lymphangiogenesis and lymphatic invasion in human gastric cancer.Arch Med Res, 2008, 39(1):92-99.

[3] 吳立剛,劉奇?zhèn)?胡志強(qiáng).MMP-2 和VEGF-C 在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及臨床意義.中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志,2009,16(11):906-910.

[4] 黃桂林,侯吉學(xué),吳毅平.乳腺癌患者血清VEGF-C水平與癌組織C-erbB-2蛋白的表達(dá)及臨床意義.中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志,2009,16(7):514-517.

[5] Wang XL,Fang JP,Tang RY,et al. Different significance between intratumoral and peritumoral lymphatic vessel density in gastric can cer:a retrospective study of 123 cases.BMC Cancer, 2010(10):299-310.

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