王康康 肖興國(guó)

鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院消化內(nèi)科，河南鄭州 450052

原發(fā)性肝癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重危害著人類的健康。 IAPs（inhibitors of apoptosis proteins）是一組以抑制caspase為主要作用機(jī)制的凋亡調(diào)控因子。其中Survivin和Livin是IAPs家族中最具有表達(dá)特異性的兩種凋亡抑制蛋白，在人類多種腫瘤組織中異常表達(dá)[1]。故一部分學(xué)者認(rèn)為檢測(cè)Livin、Survivin可以幫助腫瘤疾病的診斷，為腫瘤的治療提供新的治療途徑。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科2006年5月～2008年5月手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)證實(shí)的HCC標(biāo)本60例，男39例，女 21 例，年齡 18～78 歲，平均（50.00±10.60）歲。 所有患者在術(shù)中、術(shù)前均未經(jīng)放、化療及免疫治療。將HCC分為3級(jí)，其中，高分化13例，中分化36例，低分化11例；腫瘤直徑≥3 cm 42例，＜3 cm 18例；有轉(zhuǎn)移47例，無轉(zhuǎn)移13例（轉(zhuǎn)移包括肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝外轉(zhuǎn)移）。另隨機(jī)抽取上述60例HCC患者的癌旁肝組織40例作為對(duì)照。

1.2 方法

兔抗人Livin、survivin多克隆抗體、即用型SP試劑盒、DAB顯色劑試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛溶液常規(guī)固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。采用免疫組化二步法，具體步驟參照試劑盒說明。用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。以胞漿、胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為Survivin、Livin免疫組化染色陽(yáng)性。將染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分率相結(jié)合判斷Survivin、Livin免疫組化染色結(jié)果。先按染色強(qiáng)度評(píng)分：0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色，染色強(qiáng)度需與背景色相對(duì)比；再按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分：0分為陽(yáng)性細(xì)胞<5%，1分為5%～25%，2分為 26%～50%，3分為 51%～75%，4分為>75%，染色強(qiáng)度分值與陽(yáng)性細(xì)胞百分比分值的乘積為0～1分為陰性，2～3 分為+，4～5 分為++，>6 分為+++。 本實(shí)驗(yàn)將+～+++均視為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，陽(yáng)性率比較用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Sperman等級(jí)相關(guān)性分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Survivin及Livin在肝細(xì)胞癌組織及癌旁組織中的表達(dá)

肝細(xì)胞癌中Survivin及Livin染色陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色顆粒狀，表達(dá)主要位于癌細(xì)胞的胞漿和胞核，在部分癌旁組織中可見Survivin及Livin染色陽(yáng)性。肝癌組Survivin及Livin 陽(yáng)性率分別為 68.3%（41/60）、58.3%（35/60）， 癌旁組分別為 10.0%（4/40）、5.0%（2/40）。 兩組 Survivin 及 Livin陽(yáng)性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2 Survivin及Livin的表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床及病理學(xué)特征之間的關(guān)系

具體見表1。

表1 肝癌組織Survivin及Livin陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤臨床病理特征的比較（n）

2.3 肝癌組織Survivin與Livin表達(dá)的相關(guān)性分析

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，其中22例HCC標(biāo)本中Survivin蛋白及Livin蛋白均為陽(yáng)性，有6例HCC標(biāo)本中兩者的表達(dá)均為陰性；Survivin陽(yáng)性表達(dá)而Livin陰性表達(dá)的有19例，Livin陽(yáng)性表達(dá)而Survivin陰性表達(dá)的13例。肝癌組織中Survivin和Livin的表達(dá)無相關(guān)性（P＞0.05）。

3 討論

IAP 家族包括 8 個(gè)成員：NAIP、XIAP、cIAP-1、cIAP-2、survivin、apollon、ILP-2和 livin。Survivin和 Livin是 IAP 家族中新發(fā)現(xiàn)的兩種蛋白，兩者都可以直接或間接抑caspase凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的起始分子caspase-9的活化、活性以及效應(yīng)分子caspase-3/-7的活性而阻斷凋亡的發(fā)生過程[2-3]。研究發(fā)現(xiàn)，Survivin在胃癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等多種腫瘤中表達(dá)增加，并可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[4]。Survivin在腫瘤組織中高表達(dá)、在癌旁組織中低表達(dá)，使其在HCC的診斷及評(píng)估預(yù)后中具有重要的參考價(jià)值。Livin是一種新發(fā)現(xiàn)的、特異性表達(dá)于人的胚胎組織、胎盤組織以及大多數(shù)人類實(shí)體瘤細(xì)胞的蛋白。在正常成人組織亦有所表達(dá)，如心臟、脾、卵巢、肺、腦、骨骼肌和淋巴細(xì)胞，但含量很低。近年來研究發(fā)現(xiàn)，Livin蛋白在肺癌、膀胱癌、黑色素瘤等多種腫瘤中表達(dá)增加，同時(shí)該蛋白的高表達(dá)與腫瘤的分化程度、侵襲、轉(zhuǎn)移過程相關(guān)[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肝癌組織Survivin蛋白、Livin蛋白表達(dá)均高于相應(yīng)癌旁肝組織，并在不同的組織分級(jí)及有無轉(zhuǎn)移組間表達(dá)均有明顯差異。提示Survivin蛋白、Livin蛋白的高表達(dá)與肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有實(shí)驗(yàn)表明，用siRNA技術(shù)沉默Survivin與Livin基因表達(dá)，能夠抑制腫瘤的增殖并取得了一定的成效[6-7]。提示Survivin基因、Livin基因可做為候選癌基因在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用，并與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)。

本研究表明，Survivin與Livin表達(dá)無相關(guān)性，考慮兩者的上調(diào)機(jī)制有一定的差異，還需更深入、更具體的研究?；蛘?，我們可以認(rèn)為Survivin和Livin兩種基因在肝癌的診斷和治療中有單獨(dú)的作用。

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