孫金旭，朱會霞，張彩鳳，劉美竹，孫欣，李曉萌，劉佳

（衡水學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，河北衡水 053000）

HPLC法測定菜花中的辛硫磷殘留的研究

孫金旭，朱會霞，張彩鳳，劉美竹，孫欣，李曉萌，劉佳

（衡水學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，河北衡水 053000）

摘 要：建立了HPLC法測定菜花中農(nóng)藥殘留辛硫磷含量的方法，研究表明：此方法測定農(nóng)藥殘留辛硫磷含量重復(fù)性試驗最大標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.79%，峰面積與辛硫磷標(biāo)品線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=46.768 2x-0.716 7（R=0.999 8），加標(biāo)回收率在98.12%～102.28%之間，經(jīng)超聲處理樣品測定效果明顯好于未經(jīng)超聲處理樣品，此方法用于菜花中辛硫磷含量準(zhǔn)確、可行；經(jīng)測定菜花中的辛硫磷農(nóng)藥殘留為含量25.62 μg/kg，符合國家標(biāo)準(zhǔn)（蔬菜中辛硫磷含量≤0.05 mg/kg）要求。

關(guān)鍵詞：HPLC；辛硫磷；農(nóng)殘；菜花

辛硫磷殺蟲譜廣，擊倒力強，以觸殺和胃毒作用為主，無內(nèi)吸作用，對磷翅目幼蟲很有效。適合于防治地下害蟲。對危害花生、小麥、水稻、棉花、玉米、果樹、蔬菜、桑、茶等作物的多種鱗翅目害蟲的幼蟲有良好的作用效果，對蟲卵也有一定的殺傷作用。也適于防治倉庫和衛(wèi)生害蟲，因此，辛硫磷在水果蔬菜中的應(yīng)用較廣[1-2]。菜花是蔬菜的一種，屬于甘藍(lán)的變種，菜花為十字花科植物，菜花呈肉質(zhì)塊狀，整體很像一個大花朵，色白美觀。花椰菜肉質(zhì)細(xì)嫩，味甘鮮美，食用后很容易消化吸收，因此做為蔬菜備受人們的青睞，菜花生長過程中,為避免受多種病蟲害的影響，要噴灑多種農(nóng)藥，其中以辛硫磷噴灑最多。本研究建立了高效液相色譜法測定菜花中辛硫磷農(nóng)殘的方法，以期快速、準(zhǔn)確的對其進(jìn)行測定。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品：購于國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)（濃度為100 μg/mL）；甲醇、乙腈（色譜級）、無水硫酸鈉：購于濰坊中匯化工有限公司。

1.2 儀器

Agilent1100高效液相色譜：美國；EV311旋蒸儀：萊伯泰科有限公司；電子天平：上海田宮稱重制造有限公司；CTG-1超聲波提取儀：濟寧恒盛超聲機械有限公司。

1.3 樣品等處理方法

1.3.1 辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)液處理

準(zhǔn)確的移取辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品5 mL，放于容積為25 mL的棕色容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，即配制成濃度為20 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃冷藏備用。

1.3.2 菜花樣品處理方法

稱取一定量的菜花樣品，超聲處理2次，每次處理2 min，將處理后的菜花用組織搗碎機搗碎混勻，稱取5 g（精確至0.01 g）樣品于100 mL高型燒杯中，每次加入15 mL乙腈，高速勻漿3 min，提取2次，提取液經(jīng)裝有無水硫酸鈉濾紙過濾，殘渣用15 mL乙腈洗滌，合并濾液于梨形瓶中。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在35℃水浴減壓蒸餾至近干，氮氣吹干，定量加入1 mL流動相溶解殘渣，漩渦混勻，0.45 μm的微孔濾膜過濾供液相色譜分析。

1.4 HPLC測定條件[3-4]

HPLC法測定菜花中辛硫磷含量條件為：色譜柱ZORBAX SB-C18不銹鋼柱（150 mm×3.0 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水溶液（體積比為7∶3）；流速0.3 mL/min；進(jìn)樣量10 μL外標(biāo)法定量；柱溫30℃；檢測波長待定。

2 結(jié)果與討論

2.1 測定波長的確定

為確定測定菜花中辛硫磷農(nóng)藥殘留高效液相色譜測定波長，以辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品為測定樣品，紫外分光光度法進(jìn)行其在200 nm～500 nm下的全波長掃描，掃描結(jié)果如圖1所示。

圖1 辛硫磷紫外全波長掃描結(jié)果Fig.1 The full wavelengh scanner result for phoxim

如圖1所示，辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品在200 nm～500nm下紫外掃描后，在285 nm處有唯一最大吸收峰，表明辛硫磷紫外測定的最適波長為285 nm。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖

辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品HPLC測定條件為：色譜柱ZORBAX SB-C18不銹鋼柱（150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm）；流動相：甲醇-水溶液（體積比為7∶3）；流速0.3 mL/min；進(jìn)樣量10μL外標(biāo)法定量；柱溫30℃；檢測波長285nm。此條件下，辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品的測定結(jié)果如圖2所示。

圖2 辛硫磷標(biāo)品HPLC色譜圖Fig.2 The HPLC spectra for Phoxim standard

由圖2可知，辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品在設(shè)定的測定條件下，在10.352 min處有單一峰，表明該測定條件適宜于辛硫磷的測定。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備及線性范圍考察

準(zhǔn)確稱取一定量的辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品，25 mL的棕色容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，分別配置成濃度分別為0.2、0.4、0.6、2.0、4.0、8.0、10.0 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，此 7份標(biāo)準(zhǔn)液在上述色譜條件下進(jìn)樣測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以辛硫磷濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得到線性回歸方程為 y=46.768 2x-0.716 7（R=0.999 8），該回歸方程在 1 μg～100 μg的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.4 重復(fù)性試驗

精密稱取同一份經(jīng)處理后辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品，均勻的分為5份，經(jīng)HPLC測定其中辛硫磷含量，計算平均值及RSD值，結(jié)果如表1所示。

表1 重復(fù)性試驗Table 1 Result of repetitive test

同一份辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品分5次進(jìn)樣后，其RSD值為0.79%，表明該方法的重復(fù)性均達(dá)到分析的要求。

2.5 回收率試驗

取經(jīng)處理的菜花后，平均分成3份，經(jīng)處理后，分別測定辛硫磷含量，分別取辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品配置成不同濃度，添加入處理液中，經(jīng)過濾膜過濾后分別測定辛硫磷含量，計算回收率，結(jié)果如表2所示。

由表2可知，經(jīng)加標(biāo)后，辛硫磷的回收率在98.12%～102.28%之間，表明回收良好此方法適宜于菜花中辛硫磷含量的測定。

表2 回收率試驗Table 2 Recovery rates

2.6 菜花中辛硫磷含量測定

因菜花中的化學(xué)成分較為復(fù)雜，其有機溶劑提取液中的化學(xué)成分較多，影響農(nóng)藥殘留測定較大，有關(guān)文獻(xiàn)報道，在樣品處理時經(jīng)微波或超聲波處理會很大程度的避免其它物質(zhì)對農(nóng)藥殘留測定的影響[5]，菜花樣品經(jīng)超聲波處理前后液相色譜圖如圖3、圖4所示。

圖3 未經(jīng)超聲菜花處理物液相色譜圖Fig.3 The HPLC spectra for the no ultrasonic processing group

圖4 經(jīng)超聲處理后菜花處理物液相色譜圖Fig.4 The HPLC spectra for the ultrasonic processing group

由圖3、圖4的樣品經(jīng)超聲波處理前后液相色譜圖可以看出，未經(jīng)超聲處理的菜花處理物，物質(zhì)含量及種類較多，各物質(zhì)之間峰之間不能很好的分開，各物質(zhì)峰之間有較大的影響，經(jīng)超聲處理后的菜花處理物，物質(zhì)較少，物質(zhì)之間分開效果較好，各物質(zhì)均能獨立成峰，且由出峰時間判斷含有欲測定的農(nóng)藥殘留辛硫磷，表明經(jīng)超聲處理有利于菜花中辛硫磷農(nóng)藥殘留的測定。

精確稱取菜花樣品5.00 g，超聲處理后甲醇定容為1 mL，進(jìn)樣測定辛硫磷含量，結(jié)果利用該方法測定得出辛硫磷含量為25.62 μg/kg，符合國家標(biāo)準(zhǔn)（蔬菜中辛硫磷含量≤0.05 mg/kg）要求。

3 結(jié)論

利用HPLC法測定菜花中辛硫磷農(nóng)藥殘留，測定條件：色譜柱ZORBAX SB-C18不銹鋼柱（150 mm×3.0 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水溶液（體積比為 7∶3）；流速0.0.3 mL/min；進(jìn)樣量10 μL外標(biāo)法定量；柱溫 30℃；檢測波285nm。研究表明：此方法測定農(nóng)藥殘留辛硫磷含量重復(fù)性試驗最大標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.79%，峰面積與辛硫磷標(biāo)品線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=46.768 2x-0.716 7（R=0.999 8），加標(biāo)回收率在 98.12%～102.28%之間，經(jīng)超聲處理樣品測定效果明顯好于未經(jīng)超聲處理樣品，此方法用于菜花中辛硫磷含量準(zhǔn)確、可行；經(jīng)測定菜花中的辛硫磷農(nóng)藥殘留為含量25.62 μg/kg，符合國家標(biāo)準(zhǔn)（蔬菜中辛硫磷含量≤0.05 mg/kg）要求。

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[1]賀敏,戴榮彩,余平中,等.玉米中辛硫磷殘留的高效液相色譜方法研究[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理,2007,24(10):46-48

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Determination of Phoxim in Cauliflower by HPLC

SUN Jin-xu，ZHU Hui-xia，ZHANG Cai-feng，LIU Mei-zhu，SUN Xin，LI Xiao-meng，LIU Jia
（Department of Biology Heng shui College ，Heng shui 053000，He bei，China）

Abstract：HPLC determination method for the determination of Phoxim in Cauliflower was established.The result showed that the maximum standard deviation of cholesterol content is 0.79%under this this method for determination and cholesterol content displayed an excellent linear relationship，the standard curve equation was y=46.768 2x-0.716 7（R=0.999 8）.The spike recoveries for cholesterol were between 98.12%and 102.28%.The results show that the ultrasonic processing group felt much better than the group，the method was feasibility and accurate for using to determine phoxim content in Cauliflower，the average contents of phoxim content in Cauliflower is 25.62 μg/kg by HPLC determination.The result is accord with national level（phoxim in vegetable content≤ 0.05 mg/kg）.

Key words：HPLC；phoxim；pesticides residuein；Cauliflower

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.13.028

衡水學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新課題重點項目（2013038）

孫金旭（1975—），男（漢），副教授，博士，主要從事食品科學(xué)、發(fā)酵工程、微生物等方面的研究。

2013-01-22