劉 冰，李佩波，鄧存良

（1.川北醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院（四川綿陽(yáng)四0四醫(yī)院）感染科，四川 綿陽(yáng) 621000；2.瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院感染科，四川 瀘州 646000）

乙型病毒性肝炎簡(jiǎn)稱“乙肝”，是由乙型肝炎病毒(HBV)感染人體后導(dǎo)致以肝臟損害為主的傳染性疾病。慢性HBV感染者一般分為HBV攜帶者、慢性乙肝輕、中、重度和重型肝炎及肝炎肝硬化。我國(guó)現(xiàn)約有9 300萬(wàn)慢性HBV感染者[1-2]，該病嚴(yán)重威脅我國(guó)人民的身體健康。其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，國(guó)內(nèi)外研究較多，但目前仍不十分清楚。本研究針對(duì)血清酶學(xué)(ALT)低水平(≤3 ulm)的HBV感染者肝組織學(xué)進(jìn)行研究，檢測(cè)其肝組織病理改變情況以及肝組織中CD28的表達(dá)情況，了解CD28的表達(dá)與肝組織的炎癥活動(dòng)及肝纖維化進(jìn)程之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 病例來(lái)源 四川綿陽(yáng)四0四醫(yī)院感染科2007-2010年收治的慢性HBV感染患者共71例，男性60例，女性11例，年齡15～64歲，平均(35±17.4)歲。所有患者診斷符合2000年《病毒性肝炎防治方案》[3]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。71例患者外周血中HBV-DNA定量≥103copies/ml，肝功酶學(xué)指標(biāo)(ALT≤120 U/L)；均未接受抗病毒治療，且排除合并其他嗜肝病毒感染及其他肝臟疾病。

1.2 分組情況 以肝功酶學(xué)指標(biāo)(ALT)為標(biāo)準(zhǔn)分為三組，ALT≤40 U/L組(Ⅰ組)；40 U/L＜ALT≤80 U/L組(Ⅱ組)；80 U/L＜ALT≤120 U/L組(Ⅲ組)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 血清學(xué)指標(biāo)的檢測(cè) 采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)記物(HBVM)(上海新波有限公司)，酶動(dòng)力學(xué)法檢測(cè)肝功酶學(xué)(上海德賽有限公司)，終點(diǎn)發(fā)檢測(cè)膽紅素和蛋白(上海德賽有限公司)，PCR熒光定量(瑞士羅氏公司)檢測(cè)HBV DNA定量(深圳凱杰有限公司)。

1.3.2 肝組織病理檢測(cè) 在B超引導(dǎo)下行肝穿采集活體肝組織標(biāo)本，要求每條肝組織標(biāo)本長(zhǎng)度在1.5 cm以上。采用HE染色檢測(cè)肝組織的炎癥活動(dòng)度和纖維化程度。免疫組化染色，SP法檢測(cè)肝組織中CD28的表達(dá)。

1.4 結(jié)果判定 由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生看片。炎癥活動(dòng)度分級(jí)用G0～G4表示；纖維化分期用S0～S4表示。免疫組化結(jié)果為肝細(xì)胞胞漿被染成棕黃色或棕褐色為陽(yáng)性細(xì)胞，在高倍鏡下(400×)每張切片選取5個(gè)不連續(xù)視野采集圖片，使用Image-Pro Plus 6.0彩色圖像分析系統(tǒng)對(duì)圖片中陽(yáng)性反應(yīng)部位進(jìn)行處理分析。采用積分光密度(IOD)值表示CD28的表達(dá)強(qiáng)度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)SPSS13.0錄入采用單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 患者血清學(xué)指標(biāo)結(jié)果 71例患者乙肝病毒標(biāo)記物均為陽(yáng)性，HBV-DNA定量＞103copies/ml。ALT≤40 U/L者17例(23.94%)；40 U/L＜ALT≤80 U/L者31例(43.66%)；80 U/L ＜ALT≤120 U/L者 23例(32.39%)。

2.2 肝組織病理學(xué)檢查結(jié)果 71例患者中，肝組織學(xué)完全正常(G0S0)者3例(4.23%)，肝組織學(xué)存在不同程度損害者68例(95.77%)，其中早期肝硬化3例(4.23%)，見(jiàn)表1。

表1 71例肝組織病理學(xué)檢查結(jié)果

2.3 CD28表達(dá)情況 CD28在所有患者的肝組織中均有表達(dá)，胞漿染色呈棕黃色或者棕褐色細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞，主要集中在炎性壞死區(qū)和纖維化周圍，見(jiàn)圖1～圖2。在不同炎癥活動(dòng)度和纖維化程度的肝組織中所測(cè)得陽(yáng)性細(xì)胞的積分光密度(IOD)值不同，見(jiàn)表2、表3?？偟内厔?shì)是，IOD值與肝組織炎癥活動(dòng)度和纖維化程度平行。

圖1 CD28在正常肝組織中的表達(dá)（SP,×400）

圖2 CD28在G2S2肝組織中的表達(dá)（SP,×400）

表2 CD28在G0～G3肝組織中表達(dá)比較(±s)

表2 CD28在G0～G3肝組織中表達(dá)比較(±s)

注：總 F=14.77；G0/G1：F1=3.12、P＞0.05；G0/G2：F2=4.17、P2＜0.05；G0/G3：F3=4.49、P3＜0.05；G1/G2：F4=3.03、P4＞0.05；G1/G3：F5=4.10、P5＜0.05；G2/G3：F6=4.08、P6＜0.05。

炎癥活動(dòng)度分級(jí)總P值G0G1G2G3例數(shù)3 26 28 14 IOD值8.31±0.44 10.33±1.33 13.62±1.79 19.12±1.79 P＜0.05

表3 CD28在S0～S4肝組織中表達(dá)比較(±s)

表3 CD28在S0～S4肝組織中表達(dá)比較(±s)

注：總 F=19.01；S0/S1：F1=3.67、P＞0.05；S0/S2：F2=4.11、P2＜0.05；S0/S3～4：F3=4.41、P3＜0.05；S1/S2：F4=3.82、P4＞0.05；S1/S3～4：F5=4.15、P5＜0.05；S2/S3～4：F6=3.21、P6＞0.05。

纖維化分期總P值S0 S1 S2 P＜0.05 S3～4例數(shù)9 23 29 10 IOD值6.05±0.91 8.83±1.82 13.48±1.39 17.41±2.40

2.4 CD28在不同ALT組別肝組織中的表達(dá)差異 不同ALT組別的肝組織中CD28的表達(dá)強(qiáng)度不同，總的趨勢(shì)隨ALT的增高CD28的表達(dá)增強(qiáng)，見(jiàn)表4。

表4 CD28在不同ALT的肝組織中表達(dá)(±s)

表4 CD28在不同ALT的肝組織中表達(dá)(±s)

注：總F=14.48；Ⅰ/Ⅱ，F(xiàn)1=3.56、P1＞0.05；Ⅰ/Ⅲ，F(xiàn)2=4.13、P2＜0.05；Ⅱ/Ⅲ，F(xiàn)3=4.58、P3＜0.05。

組 別 例數(shù)IOD值 總P值17 31 23Ⅰ組Ⅱ組Ⅲ組9.88±0.89 11.78±1.31 21.19±3.36 P＜0.05

3 討論

近幾年，國(guó)內(nèi)對(duì)慢性乙型病毒性肝炎肝組織學(xué)改變及其發(fā)病機(jī)作了大量研究，但是對(duì)血清酶學(xué)低水平(ALT≤3 ULN)的慢性HBV感染者研究較少。本課題針對(duì)該類人群肝組織病理改變、肝組織中CD28的表達(dá)狀態(tài)進(jìn)行了研究，探討CD28的表達(dá)與肝組織學(xué)改變以及在低酶學(xué)水平狀態(tài)下與酶學(xué)變化的關(guān)系。

3.1 CD28與肝組織學(xué)改變的關(guān)系 CD28分子是免疫球蛋白超家族成員之一。CD8+細(xì)胞一般分為特異性殺傷T細(xì)胞(Tc)和免疫抑制性T細(xì)胞(Ts)，這兩類細(xì)胞對(duì)機(jī)體的免疫起著重要的調(diào)節(jié)作用[4-5]。目前，對(duì)外周血中CD28的表達(dá)研究報(bào)道較多。但在肝組織中檢測(cè)報(bào)道不多。本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)肝組織炎癥活動(dòng)度和纖維化程度處于較低水平時(shí)，組織中的CD28表達(dá)水平也較低；當(dāng)炎癥活動(dòng)增強(qiáng)和纖維化加深后，CD28表達(dá)明顯增強(qiáng)。說(shuō)明CD28的表達(dá)強(qiáng)度和肝組織病理?yè)p害程度具有同步性，這可能與人體免疫應(yīng)答有關(guān)。當(dāng)機(jī)體進(jìn)入免疫耐受期時(shí)，CD28不表達(dá)或表達(dá)水平低，B7/CD28共刺激通路異常，T細(xì)胞活化差，抑制CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，病毒不能清除，機(jī)體處于免疫耐受期；當(dāng)機(jī)體處于免疫清除期時(shí)，CD28表達(dá)水平升高，Tc促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖、活化[6-7]。由此證明，肝組織中CD28的表達(dá)在乙型病毒性肝炎的發(fā)病機(jī)制中起到非常重要的作用。

3.2 CD28表達(dá)與血清酶學(xué)(ALT)的關(guān)系 本文對(duì)低酶學(xué)(ALT)水平的慢性HBV感染者肝組織病理學(xué)及CD28表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，在不同ALT組別的肝組織中CD28的表達(dá)強(qiáng)度存在差異，其趨勢(shì)為隨ALT的增高CD28表達(dá)增強(qiáng)，說(shuō)明ALT在一定程度上可以反應(yīng)出肝組織炎癥活動(dòng)度能力?？梢?jiàn)，ALT目前仍是慢性乙肝患者肝臟病理炎癥監(jiān)測(cè)的一個(gè)重要的血清學(xué)指標(biāo)[8]。

綜上所述，CD28在病毒性肝炎的發(fā)生和進(jìn)展過(guò)程中起到重要作用，但其機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

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