李婧 陳帆 金偉 楊麗君 后望 楊淑紅 劉延友△

（1.四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院09級(jí)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)基地班，四川 成都 610041；2.衛(wèi)生部時(shí)間生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（四川大學(xué)），四川大學(xué)，四川 成都 610041）

肥胖正在以快速的流行趨勢(shì)成為影響公眾健康的重要問題，它常與高血壓、冠心病、腦卒中、2型糖尿病、脂代謝紊亂、骨關(guān)節(jié)病等集結(jié)出現(xiàn)，影響人的生活質(zhì)量，縮短人的壽命。Robert［2］等的研究表明進(jìn)食高脂飲食可以導(dǎo)致肥胖。那么只在三餐中的一餐進(jìn)食高脂飲食是否也會(huì)導(dǎo)致肥胖呢？而不同的時(shí)間段進(jìn)食高脂飲食對(duì)肥胖程度的影響是否不同？進(jìn)食過量高蛋白飲食也可導(dǎo)致肥胖，但已有報(bào)道稱，進(jìn)食限制能量的高蛋白食物具有減輕體重的作用［4-6］，那么在三餐中的一餐進(jìn)食高蛋白食物的方式對(duì)肥胖的指標(biāo)有怎樣的影響呢？

本研究通過在不同時(shí)間段給予3～4周齡小鼠不同構(gòu)成的飼料（高脂肪和高蛋白飼料），觀察其體重、體脂變化，探討進(jìn)食時(shí)間，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)種類與肥胖的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇3～4 周齡健康清潔級(jí)雄性昆明小白鼠共108只，體重約15.0～20.0g，購(gòu)自四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：0020358。將小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為3大組：高脂組、高蛋白組和對(duì)照組。高脂組分為4 小組：HF0、HF1、HF2、HF3；高蛋白組分也為4 小組：HP0、HP1、HP2、HP3。具體見表1。

1.2 飼養(yǎng)

小鼠由專人飼養(yǎng)，分別在7∶00～9∶00 時(shí)，17∶00～19∶00時(shí)和22∶00～24∶00時(shí)根據(jù)分組用高脂或高蛋白飼料或者普通飼料飼喂，自由進(jìn)食，其它時(shí)間不給予進(jìn)食，飲水不限，連續(xù)喂養(yǎng)8w。記錄攝食量，每周稱重一次。

1.3 飼料

飼料實(shí)驗(yàn)所用飼料為合成飼料，高脂飼料配方參考張梅［10］等的方法加以改進(jìn)，由華西醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心配制。其中：（1）基礎(chǔ)飼料（以100g計(jì)）：豆粕25g、黃豆5g、玉米30g、酵母2.5g、麩子10g、魚粉10g、骨粉2.5g、高梁5g、標(biāo)準(zhǔn)粉8.5g、豆油1g、鹽0.5g。（2）高脂肪飼料（以100g 計(jì)）：基礎(chǔ)飼料73g、豬油20g、酪蛋白7g。（3）高蛋白飼料（以100g計(jì)）：基礎(chǔ)飼料87g，酪蛋白13g。各種飼料主要營(yíng)養(yǎng)素的含量及供能比見表2。

表1 分組情況

1.4 測(cè)定內(nèi)臟脂肪的重量：

在第8周末，稱重，并計(jì)算小鼠的體重增加值（第8周體重-初始體重）。禁食、禁飲12h后，處死小鼠，分別測(cè)量?jī)?nèi)臟脂肪系數(shù)（睪周脂肪墊重量+腎周脂肪墊重量）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高脂組、高蛋白組體重增加值

2.1.1 高脂組體重增加值

與對(duì)照組相比，高脂組（包括：HF0，HF1、HF2、HF3）增重明顯（P＜0.05）。但高脂組組間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。即可以認(rèn)為無論三餐中的哪一餐進(jìn)食高脂飼料，或者三餐都進(jìn)食高脂飼料，都較普通飼料增重更多，見圖1。

圖1 高脂組體重增加

2.1.2 高蛋白組體重增加值

17∶00～19∶00高蛋白組（HP1）及7∶00～9∶00高蛋白組（HP3）相比對(duì)照組有顯著增重（P＜0.05），而三餐高蛋白組（HP0）、22∶00～24∶00高蛋白組（HP2）組、對(duì)照組三組之間差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。即可認(rèn)為三餐進(jìn)食高蛋白或者某特定時(shí)間段（22∶00～24∶00）進(jìn)食高蛋白食物與普通飼料對(duì)小鼠肥胖程度的影響相似，見圖2。

圖2 高蛋白組體重增加

2.2 高脂組、高蛋白組內(nèi)臟脂肪指標(biāo)

2.2.1 高脂組內(nèi)臟脂肪系數(shù)

與對(duì)照組比較，高脂組（包括：HF0，HF1、HF2、HF3）內(nèi)臟脂肪系數(shù)均較高，但結(jié)果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖3。

2.2.2 高蛋白組內(nèi)臟脂肪系數(shù)

高蛋白組（包括：HP0，HP1、HP2、HP3）與對(duì)照組內(nèi)臟脂肪系數(shù)差別也沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖4。

3 討論

肥胖是由于多種原因造成的食欲調(diào)節(jié)、脂肪細(xì)胞代謝或能量代謝失衡而致的脂肪組織增加。隨著飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的改變，肥胖發(fā)生率正以驚人的速度增長(zhǎng)，已經(jīng)成為全球性的健康問題。肥胖的發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，是多種因素相互作用的結(jié)果，但是飲食與肥胖的關(guān)系仍然是人們所重點(diǎn)關(guān)注的問題。有很多研究者關(guān)注進(jìn)食種類和數(shù)量，也有較多研究者關(guān)注睡眠和作息規(guī)律對(duì)體重的影響，但國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)尚缺乏關(guān)于進(jìn)食的時(shí)間與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類與肥胖的關(guān)系的研究。為此，我們將分別探討高蛋白營(yíng)養(yǎng)與高脂肪營(yíng)養(yǎng)在不同時(shí)間進(jìn)食與肥胖的關(guān)系，結(jié)果如下：

圖3 高脂組內(nèi)臟脂肪重量

圖4 高蛋白組內(nèi)臟脂肪重量

無論三餐中的哪一餐進(jìn)食高脂飼料，或者三餐都進(jìn)食高脂飼料，都較普通飼料增重更多。有研究表明：高脂飲食可以導(dǎo)致肥胖。高脂飲食可引起動(dòng)物攝食量增加、脂肪細(xì)胞代謝紊亂、脂肪組織基因表達(dá)及肥胖相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)發(fā)生變化［2］。

三餐高蛋白組（HP0）相較于對(duì)照組沒有顯著增重。這可能和限制能量的高蛋白質(zhì)食物更有利于減輕體重有關(guān)，有學(xué)者就高蛋白飲食有利于減輕體重提出了如下機(jī)理：1、蛋白質(zhì)能增加能量消耗：一般混合膳食所引起的能量消耗大約占總能量的10%。而蛋白質(zhì)的生熱效應(yīng)消耗能量可達(dá)到20～35%，碳水化合物和脂肪則只有5～15%。因此高蛋白飲食比高脂肪或高碳水化合物飲食能顯著增加生熱效應(yīng)的能量消耗。Johnstonh［4］的研究也發(fā)現(xiàn)30%蛋白占比的飲食生熱效應(yīng)比含15%蛋白飲食高出34kJ／h。2、增加飽腹感：Westerterp-Plantenga［5］研究發(fā)現(xiàn)高蛋白飲食（Pro∶Carb∶Fat=30%∶60%∶10%）比低蛋白飲食（Pro∶Carb∶Fat=10%∶30%∶60%）在用餐和餐后都有更高的飽腹感。Moran［6］的研究發(fā)現(xiàn)，高蛋白低脂肪組受試者（34%∶29%）餐后飽腹感明顯高于標(biāo)準(zhǔn)蛋白高脂肪組（18%∶45%）。

22∶00～24∶00組（HP2）相較于三餐高蛋白組沒有顯著增重。表明在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間段進(jìn)食高蛋白飲食和三餐高蛋白飲食以可達(dá)到同樣的效果。徐暢［11］等總結(jié)了過量的高蛋白飲食對(duì)機(jī)體的負(fù)面影響：免疫機(jī)能衰退、腎臟受損、骨質(zhì)疏松、氧化應(yīng)激和加速衰老等。但是否在某個(gè)時(shí)間段進(jìn)食高蛋白飲食也會(huì)有如上的負(fù)面影響，我們不得而知。但從理論上來說，三餐的高蛋白飲食影響可能要小于三餐高蛋白組的。所以，某時(shí)間段進(jìn)食高蛋白飲食相較于三餐高蛋白飲食也許更為健康。

22∶00～24∶00組（HP2）相較于對(duì)照組沒有顯著增重，而17∶00～19∶00高蛋白組（HP1）及7∶00～9∶00 高蛋白組（HP3）較普通飼料組有顯著增重，這可能與小鼠的生物節(jié)律有關(guān)。由于就餐時(shí)間的不同可能對(duì)能量的利用、身體代謝、生物鐘的運(yùn)轉(zhuǎn)等方面的產(chǎn)生了很大的差異，三餐中的不同時(shí)間進(jìn)食高蛋白或者高脂飲食將對(duì)機(jī)體產(chǎn)生不同的影響，與肥胖的關(guān)系也會(huì)不同。有研究發(fā)現(xiàn)：晝夜節(jié)律的核心基因Clock的純合突變小鼠除了出現(xiàn)晝夜節(jié)律表型異常外，還表現(xiàn)為貪食、攝食行為異常、肥胖和人類代謝綜合征相似的代謝異常［7］。還有研究表明：僅在光照時(shí)（小鼠正常的休息時(shí)間）給予高脂飲食的小鼠比僅在黑暗時(shí)（小鼠活動(dòng)時(shí)間）進(jìn)食同樣飲食的小鼠體重增加更多，而二組小鼠的熱量攝入和活動(dòng)量無差別，表明進(jìn)食在晝夜不同時(shí)間在體重調(diào)控中的重要性［8］。有報(bào)道稱，夜間暴露于昏暗光線（光照強(qiáng)度大約5lux）的小鼠較對(duì)照小鼠增重更明顯，糖耐量降低。夜間暴露于昏暗光線促進(jìn)白天進(jìn)食量增加，提示避免夜間進(jìn)食和暴露于光線下有助于預(yù)防和（或）延緩肥胖和糖尿病的發(fā)生［9］。這些研究都表明進(jìn)食時(shí)間的不同，能夠很大程度的影響體重的變化。

內(nèi)臟脂肪實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義可能如下：小鼠的脂肪墊太小，解剖時(shí)每只小鼠不可能達(dá)到同樣的處理效果，導(dǎo)致誤差的產(chǎn)生。且有兩只小鼠幾乎沒有脂肪墊，所以內(nèi)臟脂肪重量為0。

綜上所述，無論哪一餐進(jìn)食高脂肪飼料，或者三餐都進(jìn)食高脂肪飼料都容易使體重增加。而進(jìn)食普通飼料以及在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間段進(jìn)食高蛋白飼料對(duì)小鼠體重的影響有相似的效果。很多肥胖患者更喜好高能量的食物，而進(jìn)食普通食物和在某個(gè)時(shí)間段進(jìn)食高蛋白食物是可以達(dá)到同樣效果的，這也許有利于肥胖患者的飲食調(diào)整。

既然某個(gè)時(shí)間段進(jìn)食高蛋白飼料可以和三餐高蛋白飼料的效果相似，那么也許可以成功解決三餐的高蛋白飲食的減肥方法可能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生很多負(fù)面影響這一問題。本研究將有利于人們預(yù)防肥胖，也許能給人們提供一種新的更為健康的飲食方式。

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10 張梅.高脂肪和高蛋白飼料對(duì)幼年大鼠糖代謝的影響［J］.中國(guó)慢性病預(yù)防與控制，2009，17（2）：125-127.

11 徐暢，阮榕生，劉玉環(huán).淺述高蛋白飲食對(duì)人體健康的影響［J］.食品工業(yè)科技，2012，21（33）：399-402.