唐大軒 熊靜悅 譚正懷

（四川省中醫(yī)藥科學(xué)院·國家中醫(yī)藥管理局中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)重點(diǎn)研究室，四川 成都 610041）

川楝子（Melia toosendan）為楝科（Meliaceae）楝屬（Meliaceae）川楝的果實(shí)（又名金鈴子等），廣泛分布于四川、湖北、貴州、河南等地。性味苦寒，有小毒，歸肝、小腸、膀胱經(jīng)，具有疏肝泄熱、行氣止痛、殺蟲等功效，臨床用于治療胸脅、脘腹脹痛、疝氣痛、蟲積腹痛。川楝子中主要有效成分為川楝素，此外，還含有揮發(fā)油、黃酮及多糖等多種化學(xué)成分，川楝子活性成分還大量用于植物防護(hù)和機(jī)體毒理及藥理研究。有關(guān)川楝子毒性的記載首見于《名醫(yī)別錄》，謂川楝子有小毒，但臨床應(yīng)用仍很廣泛，現(xiàn)代對(duì)其毒性的研究較少。由于川楝子的毒性作用，人們采用炒黃以炮制川楝子，達(dá)到降低其毒性作用的目的，然而，炒黃炮制川楝子真的可以達(dá)到減毒作用嗎？本文擬通過比較研究川楝子和炒黃川楝子水提物、乙醇提取物對(duì)小鼠的急性毒性作用，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

生川楝子水提取物，棕色膏體，1g浸膏相當(dāng)于2.8g原生藥；生川楝子70%乙醇提取物，深棕色膏體，1g 浸膏相當(dāng)于4.95g原生藥；炒黃川楝子水提物，棕褐色膏體，1g浸膏相當(dāng)于2.6g原生藥。炒黃川楝子70%乙醇提取物，棕褐色膏體，1 g浸膏相當(dāng)于4.34g原生藥。生川楝子飲片購自四川新荷花飲片公司，提取物由中國科學(xué)院成都生物研究所提供，給藥時(shí)以蒸餾水配制，給藥劑量以原生藥g·kg-1計(jì)。

1.1.2 動(dòng)物

昆明種小鼠，SPF級(jí)，♀♂各半，由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK（川）2008-19。飼養(yǎng)于SPF屏障系統(tǒng)中，光照條件為12h／12h明暗交替，溫度20-26℃，相對(duì)濕度40%-70%，以鼠全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)。

1.1.3 儀器

電子天平，JY10001，良平儀器；電子天平，JA1003A，上海精天電子儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 生川楝子水提取物最大耐受量試驗(yàn)

預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示無法測(cè)出其LD50，故本實(shí)驗(yàn)擬測(cè)定其最大耐受量。將40只昆明種小鼠禁食不禁水16h后按體重隨機(jī)分為對(duì)照組和生川楝子水提物組（n=20），以最大濃度（1.12g原生藥·ml-1）、最大給藥體積（0.4ml·10g-1）灌胃小鼠1 次，逐日觀察并記錄給藥后14 日內(nèi)動(dòng)物的中毒表現(xiàn)以及死亡情況。第14d處死小鼠取心、肝、脾、肺、腎計(jì)算臟器指數(shù)。

1.2.2 生川楝子70%乙醇提取物L(fēng)D50試驗(yàn)

預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到全死劑量及不致死劑量，故本實(shí)驗(yàn)擬測(cè)定其LD50值。將50只昆明種小鼠禁食不禁水16h后按體重隨機(jī)均分為5組，給藥濃度分別為3.30g·ml-1、2.64g·ml-1、2.11g·ml-1、1.69 g·ml-1及1.35 g·ml-1，給 藥 體 積0.4ml·10g-1，灌胃給予小鼠1 次；逐日觀察并記錄給藥后14d內(nèi)動(dòng)物的中毒表現(xiàn)以及死亡情況。

1.2.3 炒黃川楝子水提物最大耐受量試驗(yàn)

預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示無法測(cè)出其LD50，故本實(shí)驗(yàn)擬測(cè)定其最大耐受量。將40只小鼠禁食不禁水16h后按體重隨機(jī)分為對(duì)照組和炒黃川楝子水提物組（n=20）；以最大濃度（0.95g原生藥·ml-1）、最大給藥體積（0.4 ml·10g-1）灌胃小鼠1次；逐日觀察并記錄給藥后14日內(nèi)動(dòng)物的中毒表現(xiàn)以及死亡情況；第14d處死小鼠取心、肝、脾、肺、腎計(jì)算臟器指數(shù)。

1.2.4 炒黃川楝子70%乙醇提取物L(fēng)D50試驗(yàn)

預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到全死劑量及不致死劑量，故本實(shí)驗(yàn)擬測(cè)定其LD50值。將60只小鼠禁食不禁水16h后按體重隨機(jī)分均為6組（n=10），給藥濃度分別為3.48g·ml-1、2.78g·ml-1、2.23g·ml-1、1.7g·ml-1、1.43g·ml-1及1.14g·ml-1，相鄰組見的劑量比為1∶0.8，給藥體積0.4ml·10g-1，灌胃給予小鼠1次；逐日觀察并記錄給藥后14日內(nèi)動(dòng)物的中毒表現(xiàn)以及死亡情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

所有數(shù)據(jù)均以表示，使用SPSS11.5軟件進(jìn)行單因素方差分析；半數(shù)致死量LD50用Bliss法進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 生川楝子水提取物最大耐受量試驗(yàn)

小鼠灌胃給予生川楝子水提取物或蒸餾水后未出現(xiàn)死亡或行為學(xué)、排泄物、分泌物等異常。給藥組體重與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，解剖肉眼檢查各組小鼠主要臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯異常；從表1可以看出生川楝子水提取物組與對(duì)照組肝臟系數(shù)有顯著性差異。測(cè)得生川楝子水提取物的最大耐受量為≥44.80g·kg-1。

2.2 生川楝子70%乙醇提取物L(fēng)D50試驗(yàn)

小鼠在給生川楝子70%乙醇提取物后先后出現(xiàn)趴伏、少動(dòng)、對(duì)外界刺激的反應(yīng)降低，行動(dòng)遲緩，嚴(yán)重者抽搐，從表2、3可見，多數(shù)動(dòng)物在給藥后3h內(nèi)發(fā)生死亡。解剖死亡小鼠見呼吸先于心臟搏動(dòng)停止。測(cè)得其LD50為80.92g·kg-1，回歸方程y（Probit）=-18.52+12.32Log（D），LD50（Feiller校正）95% 的 可 信 限 為 72.71 -89.99 g · kg-1，LD5為59.51g·kg-1，LD95為110.04g·kg-1。

2.3 炒黃川楝子水提物最大耐受量試驗(yàn)

小鼠灌胃給予炒黃川楝子水提取物或蒸餾水后未出現(xiàn)死亡或行為學(xué)、排泄物、分泌物等異常，給藥組體重與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，肉眼檢查各組小鼠主要臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯異常；從表4可以看出炒黃川楝子水提取物組與對(duì)照組臟器系數(shù)比較無顯著性差異。測(cè)得炒黃川楝子水提取物的最大耐受量為≥38.0g·kg-1，臟器系數(shù)見表4。

2.4 炒黃川楝子70%乙醇提取物L(fēng)D50試驗(yàn)

動(dòng)物在給藥后出現(xiàn)趴伏，少動(dòng)，對(duì)外界刺激的反應(yīng)降低，行動(dòng)遲緩，嚴(yán)重者抽搐，解剖死亡小鼠見呼吸先于心臟搏動(dòng)停止。多數(shù)動(dòng)物在給藥后1h內(nèi)發(fā)生死亡。由Bliss法計(jì)算得LD50為67.75g·kg-1，回歸方程y（Probit）=-7.93+7.06Log（D），LD50（Feiller校正）95%的可信限為57.86-77.57g·kg-1，LD5為39.63g·kg-1，LD95為115.82g·kg-1，見表5、6。

3 討論

川楝子是我國傳統(tǒng)中藥材，具有來源廣泛、價(jià)格低廉、作用多樣化且療效確切等優(yōu)點(diǎn)。主要有鎮(zhèn)痛抗炎作用以及抗生育作用［1，2］?！睹t(yī)別錄》謂川楝子有小毒，但臨床應(yīng)用仍很廣泛，現(xiàn)代對(duì)其毒性的研究較少。有臨床研究表明消化道的不良反應(yīng)大多在服藥后1～2h內(nèi)出現(xiàn)，表現(xiàn)為胃腸道刺激癥狀，并可發(fā)生急性中毒性肝炎，出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶升高［3］。成年果子貍飼喂一定量的川楝子后，在短時(shí)間內(nèi)即可引起中毒，主要表現(xiàn)為胃腸道刺激，肌肉震顫、四肢抽搐、肌無力等中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，伴有肝臟為主的其他內(nèi)臟器官出血［4］。

本研究測(cè)得生川楝子和炒黃川楝子70%乙醇提取物L(fēng)D50分別80.92和67.75原生藥g·kg-1；生川楝子及炒黃川楝子水提物最大耐受量≥44.80 及38.0 原生藥g·kg-1。說明生川楝子與炒黃川楝子70%乙醇提取物的急性毒性作用相似，炒黃炮制川楝子并沒有降低其急性毒性作用。

表1 生川楝子水提取物對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響（，n＝10）

表1 生川楝子水提取物對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響（，n＝10）

注：與對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01。

表3 給藥后死亡時(shí)間分布情況

表4 炒黃川楝子水提取物對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響（，n＝10）

表4 炒黃川楝子水提取物對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響（，n＝10）

表5 用Bliss法計(jì)算半數(shù)致死量

表6 給藥后死亡時(shí)間分布情況

1 紀(jì)青華，陸兔林.川楝子不同炮制品鎮(zhèn)痛抗炎作用研究［J］.中成藥，1999，21（4）：181-183.

2 賈瑞鵬，周性明，陳甸英，等.川楝子油對(duì)雄性大鼠的抗生育作用［J］.南京鐵道醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1996，15（1）：1-3.

3 路志強(qiáng).川楝子的性味功能與現(xiàn)代臨床應(yīng)用［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，1997，15（1）：45-46.

4 劉進(jìn)輝，曹迎春，李文平，等.果子貍川楝子中毒后的臨床表現(xiàn)及病理變化［J］.特產(chǎn)研究，1996，14（3）：28-29.