楊國(guó)慧，紀(jì)春茹，韓德果，林春和

（1.農(nóng)業(yè)部東北地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，哈爾濱 150030；2.黑龍江省格潤(rùn)藥業(yè)有限公司，黑龍江 伊春 153100）

北豆根學(xué)名蝙蝠葛（Menispermum dauricum DC.），為防己科（Menispermaceae）纏繞落葉木質(zhì)藤本植物。主產(chǎn)于黑龍江、吉林、遼寧等地，以干燥根莖入藥，屬地道北藥。北豆根味苦，性寒，具有清熱解毒，祛風(fēng)止痛，消腫之功效，主治咽喉腫毒、口腔炎、肺炎、氣管炎、腸炎、痢疾、蛇蟲(chóng)咬傷等。北豆根含有多種生物堿，總生物堿含量為1.7%～2.5%，主要為蝙蝠葛堿（Dauricine）、蝙蝠葛蘇林堿（Dsurisoline）、蝙蝠葛諾林堿（Daurinoline）等。這些生物堿不僅具有抑菌消炎作用，而且還具有改善心腦血管循環(huán)、提高免疫力、抗腫瘤、抗心率失常、抗血栓等功用[1]。

目前，對(duì)北豆根研究主要集中在生物堿成分分析、提取工藝、藥品加工工藝、藥理作用等方面[2-3]，也有對(duì)其生物學(xué)特性和人工栽培技術(shù)研究[4-5]，但是對(duì)北豆根果實(shí)成分研究卻未見(jiàn)報(bào)道。

本研究通過(guò)測(cè)定北豆根果實(shí)主要成分含量，包括可溶性固形物、糖、酸、蛋白質(zhì)、維生素C、花色苷及生物堿含量，比較果實(shí)中與一年生根莖中生物堿含量，為北豆根果實(shí)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

北豆根果實(shí)為采自黑龍江省伊春市南岔區(qū)的野生果；根莖為采用種子和根狀莖進(jìn)行人工種植獲得的1年生根莖，種植地點(diǎn)為東北農(nóng)業(yè)大學(xué)香坊實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)基地。

1.2 方法

1.2.1 果實(shí)中主要化學(xué)成分的測(cè)定

果實(shí)可溶性固形物測(cè)定采用上海索光WAY-2S數(shù)字阿貝斯折射儀[6]，可溶性總糖測(cè)定采用蒽酮比色法[6]，還原性糖測(cè)定采用3，5-二硝基水楊酸（DNS）比色法[6]，可滴定酸測(cè)定采用酸堿滴定法[6]，維生素C測(cè)定采用二甲苯-2，6-二氯靛酚比色法[6]，可溶性蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)比色法[6]，花色苷含量測(cè)定采用鹽酸甲醇比色法[7]，試驗(yàn)采用上海天普UV-1800紫外分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。

1.2.2 果實(shí)及根莖中生物堿的測(cè)定

采用高效液相色譜法，所用儀器為日本島津高效液相色譜儀LC-10AVP，蝙蝠葛堿標(biāo)準(zhǔn)品由中國(guó)藥品生物制品檢定所生產(chǎn)，純度以96.6%計(jì)。

蝙蝠葛堿提取液的制備[2]：將北豆根根莖晾干研碎，取研碎的粉末1 g。取野生北豆根果5 g，對(duì)果實(shí)做三種不同處理：①將果實(shí)研碎；②將果實(shí)四周用手術(shù)刀切成不同的傷口；③作為對(duì)照（CK）不進(jìn)行任何處理。向上述處理過(guò)的果實(shí)及根莖中加入20%氨溶液1 mL及氯仿30 mL浸泡過(guò)夜，然后進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，殘?jiān)蛹状既芙猓ㄈ荩?.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液作為供試品待測(cè)液。

色譜條件如下：色譜柱，phenomenex C18（4.6 mm×150 mm，5μm）；柱溫，30℃；流動(dòng)相，乙腈-0.2%磷酸（20∶80）；流速，1 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)，284 nm；進(jìn)樣量，20μL[2]。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用高效液相色譜儀器中的Breeze軟件、Excel 2003和SPSS18.0分析軟件處理數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 果實(shí)中主要化學(xué)成分的測(cè)定

分析結(jié)果表明，北豆根果實(shí)中可溶性固形物含量為8.5%、可溶性總糖含量為7.54%、還原性糖含量為0.111%、可滴定酸含量為1.179%、可溶性蛋白質(zhì)含量為1.94 mg·g-1、維生素C含量為254.8 mg·100 g-1、花色苷含量為41.5 mg·100 g-1。

2.2 果實(shí)不同處理方法對(duì)生物堿含量測(cè)定的影響

以峰面積為縱坐標(biāo)，蝙蝠葛堿含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得線(xiàn)性回歸方程為：Y=6.71e+008X-1.73e+005，R=0.998893，R2=0.997788，其線(xiàn)性范圍在0.002～0.01 mg。

由表1可知，處理2果實(shí)切傷浸泡測(cè)定的結(jié)果極顯著高于處理1果實(shí)研碎浸泡和處理3對(duì)照，處理1果實(shí)研碎浸泡和對(duì)照差異不顯著。原因可能是處理1將研磨碎的果實(shí)轉(zhuǎn)移到三角瓶進(jìn)行浸泡，從研缽轉(zhuǎn)移到三角瓶的過(guò)程中有部分損失；向三角瓶中加入氨水和氯仿時(shí)，立即會(huì)有不溶物形成沾到瓶壁上，在浸泡過(guò)夜的過(guò)程與浸泡液未有接觸也會(huì)造成一定的損失。對(duì)照并未對(duì)果實(shí)進(jìn)行任何處理，溶劑未進(jìn)入果實(shí)中，所以提取效果不好。而處理2在提取過(guò)程中未經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)移，提取溶劑與果實(shí)充分接觸，因而測(cè)定效果較好。

2.3 果實(shí)與根莖中蝙蝠葛堿含量的比較

以根狀莖和種子繁殖獲得的根莖中蝙蝠葛堿含量差異不顯著，但兩者皆極顯著高于果實(shí)中蝙蝠葛堿含量（見(jiàn)表1、圖1）。

表1 北豆根果實(shí)及根莖中蝙蝠葛堿含量Table1 Dauricine content in fruit and rhizome of Menispermum dauricum DC.

表1 北豆根果實(shí)及根莖中蝙蝠葛堿含量Table1 Dauricine content in fruit and rhizome of Menispermum dauricum DC.

注：不同大小寫(xiě)字母分別表示0.05和0.01水平差異顯著。Note:Different capital and small letters indicate significant differenceat 0.05 and 0.01 levels,respectively.

圖1 蝙蝠葛堿的峰圖Fig.1 Peak map of dauricine

3 討論與結(jié)論

北豆根果實(shí)為核果，近球形或卵圓形，熟時(shí)黑色、汁少、味酸而苦。糖的含量、種類(lèi)及糖酸比對(duì)果實(shí)味道影響很大。果實(shí)中含有的可溶性糖主要有蔗糖、葡萄糖和果糖，果糖最甜，葡萄糖風(fēng)味最好。試驗(yàn)結(jié)果表明，北豆根果實(shí)中可溶性總糖含量為7.54%，還原性糖含量?jī)H為0.111%，因此成熟果實(shí)中積累的主要為非還原糖。

維生素C含量是評(píng)價(jià)果實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的常規(guī)指標(biāo)，花色苷含量不僅和果實(shí)著色有關(guān)，也是目前評(píng)價(jià)果實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的一個(gè)重要指標(biāo)。試驗(yàn)表明，北豆根果實(shí)中維生素C量為254.9 mg·100 g-1，接近高維生素C含量樹(shù)種，如刺玫果、獼猴桃和黑穗醋栗等，可將北豆根果實(shí)作為維生素C源加以利用。實(shí)際中觀測(cè)北豆根果實(shí)染色能力很強(qiáng)，但測(cè)定結(jié)果表明，北豆根果實(shí)花色苷含量與越橘、藍(lán)靛果、樹(shù)莓相比較低[8]。

試驗(yàn)測(cè)定表明，北豆根果實(shí)中蝙蝠葛堿含量低于根莖中含量，為2.309 mg·g-1FW。果實(shí)中除蝙蝠葛堿外，還含有其他種類(lèi)生物堿（見(jiàn)圖1B），在蝙蝠葛堿峰旁邊還有一個(gè)高峰，推測(cè)是另一種生物堿，而且含量也很高。因此可以考慮對(duì)果實(shí)中生物堿作深入分析。

[1]李銘,單保恩.北豆根的研究現(xiàn)狀[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè),2005,27(5):267.

[2]于維萍,傅春升,陶琳璐,等.HPLC法對(duì)不同產(chǎn)地北豆根中蝙蝠葛堿的測(cè)定[J].齊魯藥業(yè),2005,24(3):143-144.

[3]鄭艷春,秦婷,崔雅慧.北豆根化學(xué)成分及其藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011(3):61-62.

[4]張志環(huán),劉立波,許忠海,等.北豆根的生物學(xué)特性[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006,34(2):48-50.

[5]劉興權(quán),周淑榮,吳連舉,等.北豆根的無(wú)性繁殖[J].特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物,2008(4):37.

[6]高繼國(guó),郭春絨.普通生物化學(xué)教程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2009.

[7]張曉松,孫艷梅,胡振生,等.都柿果酒在釀制過(guò)程中總酚和花色苷含量和抗氧化活性[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,41(3):120-124.

[8]杜鵬飛,楊國(guó)慧.樹(shù)莓果實(shí)維生素C含量測(cè)定方法的研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2009,40(2):31-33.