張 偉， 胡世強(qiáng)， 陳 娟， 顧利紅

(廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東廣州 510160)

肚痛健胃整腸丸由黃柏、桂皮、丁香、陳皮、甘草五味中藥和木餾油、薄荷腦制成，臨床上用于消化不良，水土不服和食物不潔所致腸胃不適，腹脹肚痛，泄瀉，且具有保護(hù)胃黏膜作用及調(diào)節(jié)腸道菌群功能的作用［1］。木餾油是由山毛櫸或類(lèi)似植物干餾得到的酚類(lèi)混合物，具有止瀉、抑制腸道異常運(yùn)動(dòng)、牙痛等功效，其中愈創(chuàng)木酚為主要活性成分。丁香具有溫中降逆，補(bǔ)腎助陽(yáng)的功效，其中丁香酚有抑菌、麻醉、解熱、抗氧化、抗腫瘤、促進(jìn)透皮吸收、祛蚊等多種藥理活性［2］。本品現(xiàn)執(zhí)行進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，定量測(cè)定項(xiàng)下以氣相色譜法測(cè)定木餾油中的主要活性成分愈創(chuàng)木酚，而方中的薄荷腦、丁香中丁香酚等揮發(fā)性成分只有定性鑒別，且操作方法較繁瑣。本試驗(yàn)參考現(xiàn)有的文獻(xiàn)［3-13］，用氣相色譜法同時(shí)測(cè)定方中薄荷腦、愈創(chuàng)木酚、丁香酚等揮發(fā)性成分，按照擬定的標(biāo)準(zhǔn)條件進(jìn)行。試驗(yàn)結(jié)果顯示，各待測(cè)峰和內(nèi)標(biāo)峰分離良好，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，為該標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步提高積累了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 儀器、試藥與樣品

Agilent7890A氣相色譜儀 (GC);乙酸乙酯為分析純 (廣州化學(xué)試劑廠);對(duì)照品薄荷腦 (批號(hào)110728-200506)，對(duì)照品愈創(chuàng)木酚 (批號(hào)111510-200202)，對(duì)照品丁香酚 (批號(hào)110725-201112)，均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;聯(lián)苯為上?；瘜W(xué)試劑有限公司生產(chǎn);肚痛健胃整腸丸 (批號(hào)W20302，W20202，W20502)，香港李萬(wàn)山藥廠有限公司生產(chǎn)。

2 色譜條件

HP-5 GC column色譜柱 (30 m×0.32 mm，ID 0.25 μm);柱溫由80℃升溫至190℃，升溫速率5℃/min;檢測(cè)器為FID，250℃;進(jìn)樣口為230℃;分流比10∶1;載氣為N2，1 mL/min;尾吹氣29 mL/min;進(jìn)樣量1 μL;理論板數(shù)按愈創(chuàng)木酚峰計(jì)算，應(yīng)不低于10 000。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取內(nèi)標(biāo)物聯(lián)苯適量，精密稱(chēng)定，用乙酸乙酯溶解并稀釋成4 mg/mL的溶液，搖勻，即得。

3.2 對(duì)照品溶液的制備 分別取薄荷腦對(duì)照品約8 mg、愈創(chuàng)木酚對(duì)照品約18 mg、丁香酚對(duì)照品約4 mg，精密稱(chēng)定，置10 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，即得。取1μL注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖。

3.3 供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的供試品適量，研細(xì)，取約0.43 g，精密稱(chēng)定，置10 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，加乙酸乙酯適量，超聲處理 (功率250 W，頻率33 kHz)20 min，放冷，用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。取1 μL注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖。

3.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取陰性對(duì)照樣品 (除薄荷腦、木餾油、丁香外，其余按處方投料，依照工藝方法制備，即得)0.43 g，按3.3項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。取1 μL注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。

圖1 肚痛健胃整腸丸中薄荷腦、愈創(chuàng)木酚、丁香酚的GC色譜圖Fig 1 GC chromatograms of menthol，guaiacol and eugenol in Dutong Jianwei Zhengchang Pills

3.5 線性關(guān)系考察 取薄荷腦對(duì)照品約200 mg、愈創(chuàng)木酚對(duì)照品約450 mg、丁香酚對(duì)照品約100 mg，精密稱(chēng)定，置25 mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，作為貯備液。分別精密量取貯備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0 mL，置 10 mL 量瓶中，精密加入4.351 mg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，即得。按上述所定色譜條件，注入氣相色譜儀中，測(cè)定峰面積，記錄色譜圖，并以對(duì)照品進(jìn)樣質(zhì)量濃度 (X，mg/mL)為橫坐標(biāo)，以對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)峰面積 (Y)為縱坐標(biāo)，計(jì)算得到線性回歸方程。薄荷腦Y1=0.898 4X+0.039，r=0.999 8;愈創(chuàng)木酚Y2=0.947 5X－0.115 1，r=0.999 7;丁香酚Y3=0.769 5X+0.000 7，r=0.999 9。試驗(yàn)結(jié)果表明薄荷腦進(jìn)樣質(zhì)量濃度在0.084 97～3.398 8 mg/mL、愈創(chuàng)木酚在0.183 1～7.324 mg/mL、丁香酚在0.040 4～1.616 mg/mL范圍內(nèi)均有良好的線性關(guān)系。

3.6 精密度試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，按所定的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果薄荷腦、愈創(chuàng)木酚、丁香酚的RSD分別為0.3%、0.7%、0.5%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批樣品 (批號(hào)W20502)適量，按3.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，精密吸取供試品溶液 1 μL，分別在 0、2、4、8、12、24 h按所定的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果薄荷腦、愈創(chuàng)木酚、丁香酚的RSD分別為0.6%、0.7%、0.4%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品 (批號(hào)W20502)適量，按3.3項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果測(cè)得薄荷腦的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15.17 mg/g;愈創(chuàng)木酚的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50.73 mg/g;丁香酚的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6.27 mg/g;RSD分別為0.5%、0.6%、0.8%。結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

3.9 加樣回收試驗(yàn) 取同一批樣品 (批號(hào)W20502)適量，取6份，每份約0.21 g，置10 mL量瓶中，分別精密加入1.594 3 mg/mL薄荷腦對(duì)照品溶液2 mL，5.126 6 mg/mL愈創(chuàng)木酚對(duì)照品溶液2 mL，0.634 3 mg/mL丁香酚對(duì)照品溶液2 mL，按3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1，薄荷腦平均回收率為100.4%，愈創(chuàng)木酚平均回收率為99.6%，丁香酚平均回收率為100.2%;RSD分別為1.14%、1.23%、1.03%。結(jié)果表明該方法回收率良好。見(jiàn)表1。

4 樣品測(cè)定

取肚痛健胃整腸丸適量，按3.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法以峰面積計(jì)算樣品中各測(cè)定成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 肚痛健胃整腸丸中薄荷腦、愈創(chuàng)木酚和丁香酚加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests of menthol，guaiacol andeugenol in Dutong Jianwei Zhengchang Pills

5 討論

5.1 本品現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作繁瑣，所用溶劑為正己烷，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作者的中樞、周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)有潛在損害。同時(shí)，原標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)主要的揮發(fā)性成分木餾油中的愈創(chuàng)木酚進(jìn)行了定量，無(wú)法整體評(píng)判藥品的綜合質(zhì)量。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)改用毒性更小的乙酸乙酯作為溶劑，同時(shí)對(duì)提取方法及提取時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果選用超聲提取20 min來(lái)測(cè)定方中的3種主要的揮發(fā)性成分，并對(duì)其進(jìn)行定量，簡(jiǎn)化了操作步驟。

5.2 實(shí)驗(yàn)中試驗(yàn)了環(huán)己酮、聯(lián)苯、萘，正十八烷等多種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，根據(jù)所測(cè)成分極性及色譜行為的差異同時(shí)消除進(jìn)樣誤差，故選擇聯(lián)苯作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，采用內(nèi)標(biāo)法定量，結(jié)果溶劑峰、內(nèi)標(biāo)峰和各成分色譜峰均有良好的分離。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果 (n=3)Tab.2 Determination results of samples(n=3)

［1］蘭 鴻，杜士明.肚痛健胃整腸丸保護(hù)胃黏膜作用與調(diào)節(jié)腸道菌群功能研究［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29(5):591-594.

［2］趙艷麗，楊先樂(lè)，黃艷平，等.丁香酚對(duì)大黃魚(yú)麻醉效果的研究［J］.水產(chǎn)科技情報(bào)，2002，29(4):163.

［3］段蓮華，馮速捷，李玉麗.氣相色譜法測(cè)定紅花油中水楊酸甲酯和丁香酚含量的方法改進(jìn)［J］.中國(guó)藥業(yè)，2002，11(7):54.

［4］曾 潔.氣相色譜法測(cè)定紅花油中丁香酚和水楊酸甲酯的含量［J］.海峽藥學(xué)，1996，8(3):9-10.

［5］張 偉，吳鵬昌.氣相色譜法測(cè)定紅花油中水楊酸甲酯和丁香酚的含量［J］.中成藥，2009，31(6):972-974.

［6］王偉炳，朱華軍.氣相色譜法測(cè)定風(fēng)痛靈中薄荷腦、冰片和樟腦的含量［J］.中國(guó)中藥雜志，2007，32(21):2319-2320.

［7］季衛(wèi)剛，鄧國(guó)才.愈創(chuàng)木酚的氣相色譜分析［J］.化學(xué)研究，2001，12(3):56-57.

［8］唐登峰，李 萌，張 鵬.舒康貼膏中愈創(chuàng)木酚GC鑒別的研究［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2010，27(5):450-451.

［9］林 林，劉廣楨.氣相色譜法測(cè)定舒康栓中愈創(chuàng)木酚的含量［J］.齊魯藥事，2007，26(5):287-288.

［10］劉 冰，朱永波，姚祖福.氣相色譜法測(cè)定鮮竹瀝中愈創(chuàng)木酚的含量研究［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，13(2):75-76.

［11］陳碧蓮，祝 明，周馮秋.高效毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定鮮竹瀝中愈創(chuàng)木酚的含量［J］.中成藥，2003，25(6):483-485.

［12］王友蘭，田金改，高天兵.健胃丸中愈創(chuàng)木酚和薄荷腦的含量測(cè)定［J］.藥物分析雜志，1998，18(增刊):113-114.

［13］車(chē)廣林，李明生.UV，GC，HPLC測(cè)定愈創(chuàng)木酚含量［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，1998，33(7):417.