孫崇華 吳偉 孫寶生

【摘 要】本文論述了藥物用高效液相色譜法含量測(cè)定的基本過(guò)程，為許多條件有限的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行相關(guān)研究提供了一種可行的實(shí)用方法。

【關(guān)鍵詞】含量測(cè)定；高效液相

本藥物收載于中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)第十四冊(cè)，按照《藥品注冊(cè)管理辦法》、中藥、天然藥物分類及申報(bào)資料要求，已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的中成藥和天然藥物制劑的注冊(cè)申請(qǐng)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)有所提高。為此，對(duì)本藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究提高工作，除保留了原產(chǎn)品中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部所規(guī)定的檢驗(yàn)項(xiàng)目外，又建立了蛇床子素的含量測(cè)定，并進(jìn)行了方法學(xué)考察。

1.成分

蠶蛾渣、海龍、蛇床子等。

2.含量測(cè)定方法

2.1儀器與材料

2.1.1儀器

島津高效液相儀（泵LC-10ATVP 紫外檢測(cè)器SPD-10AVP）。

2.1.2材料

實(shí)驗(yàn)樣品、蛇床子素對(duì)照品、其它試劑均為分析純。

2.2試驗(yàn)的條件及方法

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙晴-水（65：35）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為322nm。理論板數(shù)按蛇床子素峰計(jì)算應(yīng)不底于3000。

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取蛇床子素對(duì)照品適量，加乙醇制成每1ml含1μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，取約2g精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無(wú)水乙醇25ml。稱定重量，放置兩小時(shí)，超聲處理（功率300w，頻率50kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用無(wú)水乙醇補(bǔ)足減失的重量。精密量取上清液5ml，置10ml的量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖均，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.3考察項(xiàng)目

2.3.1空白試驗(yàn)

按處方組成份量，取蛇床子外的其余藥味按工藝要求制成缺蛇床子樣品，同供試品溶液制備方法制得空白對(duì)照溶液。

取空白對(duì)照溶液與供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μl，依次注入液相色譜儀，測(cè)定。空白對(duì)照溶液在與對(duì)照品溶液相應(yīng)的位置上不出峰，說(shuō)明空白無(wú)干擾。

2.3.2線性關(guān)系考察

（1）相關(guān)系數(shù)及直線回歸方程：

相關(guān)系數(shù)：是表示兩個(gè)變量間直線關(guān)系親密程度和相關(guān)方向的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)，用γ表示。

直線回歸方程：在直線回歸分析得到一個(gè)直線方程，成為直線回歸方程.公式如下：

Y=b+aX

（2）分析方法：

分別取對(duì)照品溶液濃度為2μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml、8μg/ml、10μg/ml各10μl注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積，以點(diǎn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得一直線。

2.3.3精密度試驗(yàn)

同一供試品溶液依法測(cè)量8次，考察儀器的精密度。

2.3.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)

按擬定的含量測(cè)定方法，取同一批樣品6份，同一供試品溶液依法測(cè)量2次.計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），檢驗(yàn)方法的重現(xiàn)性。

2.3.5回收率試驗(yàn)

取同一批樣品6份準(zhǔn)確稱取蛇床子對(duì)照品適量加入已知含量的樣品（約為測(cè)定方法中樣品的半量）中，按正文含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算回收率。

3.結(jié)果

3.1空白試驗(yàn)的結(jié)果

表1 空白試驗(yàn)結(jié)果

按處方組成份量，取蛇床子外的其余藥味按工藝要求制成缺蛇床子樣品，注入液相色譜儀，測(cè)定。樣品溶液在與對(duì)照品溶液相應(yīng)的位置上不出峰，說(shuō)明空白無(wú)干擾。

3.2線性回歸方程與相關(guān)系數(shù)

表2 不同濃度對(duì)照品含量測(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)上述濃度與峰面積的關(guān)系，得出：

γ=0.9999 b=20245.8737 a=-1677.5911

線性回歸方程：

y=-1677.5911+20245.8737x

3.3精密度試驗(yàn)的結(jié)果

表3 樣品測(cè)量8次的試驗(yàn)結(jié)果

同一供試品溶液依法測(cè)量8次， RSD=1.91%。說(shuō)明儀器的精密度較好。

3.4重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

表4 重現(xiàn)性的試驗(yàn)結(jié)果

取樣品6份，按正文含量測(cè)定法操作， RSD=1.50%。說(shuō)明儀器的精密度較好。

3.5回收率試驗(yàn)結(jié)果

表5 已知樣品含量的測(cè)定結(jié)果

表6 加入蛇床子對(duì)照品后樣品的試驗(yàn)結(jié)果

表7 回收率測(cè)定結(jié)果

回收率平均值102.54%，RSD=1.81%。

4.結(jié)論

本品的含量測(cè)定使用高效液相色譜儀，有較好的線性。試驗(yàn)測(cè)得精密度，重現(xiàn)性，回收率均符合規(guī)定。說(shuō)明高效液相色譜儀能夠完成對(duì)本藥物的含量測(cè)定。

通過(guò)前述的空白、線性關(guān)系、精密度、重現(xiàn)性和回收率五項(xiàng)試驗(yàn)，根據(jù)求得的RSD的結(jié)果可知，本次試驗(yàn)的設(shè)計(jì)方法是可行的、結(jié)果是準(zhǔn)確可靠的，對(duì)本藥物的含量測(cè)定方法做出有效的論證。建議今后藥品生產(chǎn)企業(yè)對(duì)本藥物的含量測(cè)定可根據(jù)上述方法進(jìn)行。

【參考文獻(xiàn)】

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