漆堅(jiān)

(南昌大學(xué)第四附屬醫(yī)院，江西 南昌 330003)

流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌屬于苛養(yǎng)性細(xì)菌，生長(zhǎng)需要特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，苛養(yǎng)性細(xì)菌與許多感染性疾病有關(guān)，其分離培養(yǎng)較為困難，不同實(shí)驗(yàn)室分離率差異很大，由苛養(yǎng)菌引起的感染發(fā)病率一直難以估計(jì)，因此，對(duì)苛養(yǎng)性細(xì)菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)不僅是臨床迫切的需要，同時(shí)也是衡量一個(gè)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室技術(shù)水平的重要標(biāo)志。筆者將2012年1月－2013年8月我院分離的流感嗜血桿菌，肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌的耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，以幫助臨床醫(yī)生選用抗菌藥物治療。

1 材料與方法

1.1 菌株來(lái)源 2012年1月－2013年8月我院不同標(biāo)本分離的流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌，剔除同一患者相同部位重復(fù)菌株。

1.2 方法 所有標(biāo)本按 《全國(guó)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》第3版進(jìn)行分離培養(yǎng)。采用生物梅里埃公司細(xì)菌鑒定板條(包括API-NH、API-STREP和配套試劑)和藥敏板條(ATB-STREP5、ATB-HAEMO)進(jìn)行菌株鑒定、藥敏試驗(yàn)。流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌藥敏結(jié)果判定以CLSI2010年的標(biāo)準(zhǔn)判斷，卡他莫拉菌的藥敏結(jié)果判定以CLSI2010年M45-A2版的標(biāo)準(zhǔn)判斷。

1.3 參考菌株 流感嗜血桿菌ATCC49247，肺炎鏈球菌ATCC49619。

1.4 β內(nèi)酰胺酶檢測(cè) 采用頭孢硝噻吩紙片定性檢測(cè)流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌的β-內(nèi)酰胺酶。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用WHONET5.6軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分布 2012年1月－2013年8月我院共分離流感嗜血桿菌60株，肺炎鏈球菌60株、卡他莫拉菌43株；除1株流感嗜血桿菌和4株肺炎鏈球菌自血液標(biāo)本分離外，其他均來(lái)源于痰標(biāo)本；所有菌株均來(lái)源于住院患者的標(biāo)本。

2.2 流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌對(duì)16種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。檢測(cè)出產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶流感嗜血桿菌16株、卡他莫拉菌36株。

3 討論

2012年1月－2013年8月我院共分離流感嗜血桿菌60株 (產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶16株)，肺炎鏈球菌60株、卡他莫拉菌43株(產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶36株)，除1株流感嗜血桿菌和4株肺炎鏈球菌自血液標(biāo)本分離外，其他均來(lái)源于痰標(biāo)本,分別占痰標(biāo)本的98.3%(59/60)、93.3%(56/60)、100%(43/43)，可見(jiàn)這 3種苛養(yǎng)菌主要引起呼吸道感染。流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌較廣泛地寄居于正常人上呼吸道，通常以冬季帶菌率較高，發(fā)病也增多，對(duì)人類(lèi)可引起原發(fā)性化膿性感染，也可引起繼發(fā)性感染，常引起急性呼吸道感染。本組資料所有菌株均來(lái)源于住院患者的標(biāo)本而且均分離自成人，這與我院門(mén)診及兒科送檢率極低有關(guān)，這3種細(xì)菌雖然為社區(qū)獲得性感染的主要病原菌，但是對(duì)于住院患者的篩查仍不容忽視，這些細(xì)菌不但可引起醫(yī)院感染，而且可導(dǎo)致醫(yī)院感染的暴發(fā)流行[1]。

表1 流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌對(duì)16種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果(%)

本次分析結(jié)果顯示流感嗜血桿菌對(duì)復(fù)方新諾明的耐藥率最高(60%)，已不適合臨床經(jīng)驗(yàn)用藥。氨芐西林作為治療流感嗜血桿菌感染的常用藥物，在世界范圍內(nèi)其耐藥率也達(dá)到很高水平，2010年中國(guó)CHINET監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示該菌對(duì)氨芐西林的耐藥率也達(dá)到31.7%[2]，我院流感嗜血桿菌對(duì)氨芐西林的耐藥率為28.6%，略低于全國(guó)水平。本組資料中，產(chǎn) β-內(nèi)酰胺酶率為 26.7%(16/60)，提示產(chǎn) β-內(nèi)酰胺酶是流感嗜血桿菌對(duì)氨芐西林耐藥的主要機(jī)制。另外，我們也發(fā)現(xiàn)有2株流感嗜血桿菌(0.3%)為β-內(nèi)酰胺酶陰性但氨芐西林耐藥，即BLNAR菌株。BLNAR菌株于1980年首次被報(bào)道，其耐藥機(jī)制主要是由于菌株細(xì)胞壁上一種或多種青霉素結(jié)合蛋白發(fā)生改變，引起青霉素結(jié)合蛋白與靶位親和力的降低，其次是由于外膜蛋白改變導(dǎo)致耐藥[3]。流感嗜血桿菌對(duì)阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻肟、氧氟沙星仍然保持較高的敏感性，敏感率均在90%以上，可作為經(jīng)驗(yàn)用藥的首選藥物。但對(duì)頭孢呋辛、頭孢克洛耐藥率為21.1%、25.0%，高于相關(guān)報(bào)道[4]，這可能與我們的分離菌株均來(lái)源于住院患者有關(guān)。

從表1中可以看出60株肺炎鏈球菌對(duì)紅霉素、克林霉素、四環(huán)素呈高水平耐藥，耐藥率分別為95.7%、95.5%、86.7%，高于同一地區(qū)的報(bào)道[5]。其耐藥機(jī)制可能與erm基因介導(dǎo)核糖體靶位修飾、mef基因介導(dǎo)的主動(dòng)外排機(jī)制和50S核糖體突變有關(guān)。對(duì)頭孢噻肟、左氧氟沙星、青霉素、阿莫西林的耐藥率分別為0%、2.3%、8.5%、8.5%，提示這些抗菌藥物是治療肺炎鏈球菌所致感染的首選抗菌藥物；沒(méi)有發(fā)現(xiàn)耐萬(wàn)古霉素肺炎鏈球菌。

本組資料中卡他莫拉菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶率高達(dá)83.7%(36/43)，該菌產(chǎn)生的β－內(nèi)酰胺酶主要可分為BRO-1、BRO-2及BRO-3，這些酶為染色體基因編碼的脂蛋白，而且耐藥基因易于通過(guò)接合在細(xì)菌間轉(zhuǎn)移[6],該菌株通常對(duì)阿莫西林、氨芐西林等青霉素類(lèi)抗生素高度耐藥，臨床不宜用于治療卡他莫拉菌所致感染。卡他莫拉菌對(duì)阿莫西林/克拉維酸、頭孢呋辛、頭孢克洛、頭孢噻肟、氧氟沙星均呈現(xiàn)高度敏感(敏感率>90%)，臨床上可依據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果合理選用上述抗菌藥。利福平、四環(huán)素、氯霉素敏感率雖高，但臨床已不常規(guī)使用。

雖然目前本資料中細(xì)菌耐藥率較其他細(xì)菌低，臨床多采用經(jīng)驗(yàn)用藥來(lái)治療感染，但由于我國(guó)不合理使用抗菌藥物較為嚴(yán)重，必然導(dǎo)致這些細(xì)菌耐藥不斷發(fā)生變化，如果持續(xù)不合理使用抗生素，勢(shì)必給這些細(xì)菌感染的治療帶來(lái)困難，建議各級(jí)醫(yī)院細(xì)菌室應(yīng)充分重視對(duì)苛養(yǎng)菌的分離培養(yǎng)，臨床根據(jù)具體的藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果來(lái)指導(dǎo)用藥，以減少耐藥菌株的產(chǎn)生。

[1]車(chē)大鈿,張育才.卡他莫拉菌研究進(jìn)展[J].國(guó)際兒科學(xué)雜志,2010,37(2):206-208.

[2]張泓,孔菁,王傳清.2010中國(guó)CHINET流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌耐藥性監(jiān)測(cè)[J].中國(guó)感染與化療雜志,2012,12(3):180-184.

[3]Marco F,García-de-Lomas J,García-Rey C,et al.Antimicrobial susceptibilities of 1,730 Haemophilus influenzae respiratory tract isolates in Spain in 1998-1999[J].Antimicrob Agents Chemother,2001,45(11):3226-3228.

[4]朱旭慧,孫自鏞,李麗.流感嗜血桿菌的分布及耐藥性分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,28(2):114-116.

[5]鄧林強(qiáng),陳會(huì),郭建軍.100株肺炎鏈球菌耐藥性分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(6):633-634.

[6]張之烽,沈瀚,寧明哲.乙酰吲哚紙片法在呼吸道標(biāo)本分離卡他莫拉菌中的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2009,11(1):64-65.